Pez cebra cría y manipulación de embriones

Biology II

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Summary

Pez cebra (Danio rerio) son un organismo modelo importante que es particularmente valioso para la investigación en Biología del desarrollo. Pez cebra son extremadamente fértil y puede producir cientos de progenie por semana, por lo que es relativamente fácil de recoger un gran número de embriones para los números de muestra alta. Además, pez cebra se someten a un desarrollo rápido y embriones son transparentes, lo que permite fácil visualización de procesos de desarrollo.

Este video cubre los pasos necesarios para la recogida de embriones de pez cebra recién fertilizado. Se presenta una breve descripción del comportamiento de acoplamiento de pez cebra, seguido por las instrucciones para configurar cruces en tanques que permiten para el apareamiento controlado de la cría de laboratorio especializado. También están las condiciones necesarias para iniciar la liberación de óvulos (conocido como desove) la mañana después de ajustan los tanques. Se presentan técnicas siguientes, esenciales para trabajar con embriones, incluyendo la inhibición del desarrollo de pigmento con la PTU química y dechorionation: un procedimiento en el que se retira la membrana de la concha que rodea el embrión (el corion). Por último, el vídeo concluye con algunas aplicaciones prácticas de estas técnicas en la investigación del desarrollo.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Biology II: Ratón, pez cebra y polluelo. Pez cebra cría y manipulación de embriones. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Pez cebra son un sistema pequeño pero poderoso modelo. Estos peces prolíficos pueden generar cientos de crías a la semana y muchos miles más de sus vidas. Rápido desarrollo externo y cuerpos transparentes hacen los embriones ideal para diversas aplicaciones. Este video cubre los conceptos básicos de colección de embriones y manejo antes de describir los métodos actuales de investigación que se aprovechan de los embriones de pez cebra.

Con el fin de generar embriones, ayuda a saber un poco sobre el comportamiento de acoplamiento de pez cebra.

Pez cebra se someten a reproducción sexual, por lo que requiere de cría peces macho y hembra. Los machos tienen cuerpos más delgados con un color ligeramente rojo, mientras que las hembras tienen el abdomen más grande, de plata lleno de huevos.

Periódicos de acoplamiento mantiene huevos sanos, pero hacer todos esos huevos requiere mucho trabajo, por lo que las hembras individuales deben ser acopladas sólo una vez por semana.

Finalmente, como muchos otros animales, procesos sensoriales guían de comportamiento de acoplamiento en los peces.

Señales olfativas de la ayuda masculina para prepararse a su amiga desovar, aunque un poco de iluminación del humor pone en acción.

Haber aprendido a identificar peces macho y hembra, es hora de configurar una cruz.

Para la cría de pez cebra, los investigadores utilizan tanques específicamente diseñados para el apareamiento. Tanques de cría por lo general cuentan con un accesorio de inserción extraíble con agujeros que permiten que los huevos que caen a través de. Esta función protege los huevos de ser comidos por los peces adultos hambrientos.

Para empezar, combinar peces adultos en tanques de cría durante la tarde o la noche. Para recolectar embriones de etapa temprana la mañana siguiente, separar peces machos y hembras con un separador de ambientes, que les impide la cría antes de que usted esté listo para comenzar un experimento. Para evitar que los peces saltando, asegúrese de cubrir el tanque de cría con una tapa. Luego, dejar el pescado para aclimatar uno al otro durante la noche.

Después de pasar la noche juntos en un tanque de cría, los peces acoplan a la mañana siguiente.

El primer paso en la mañana es eliminar el divisor entre el pez macho y hembra para iniciar el desove. Si no se utiliza un divisor, los peces ponen huevos poco después del inicio ligero.

Como los machos persiguen a las hembras alrededor del tanque, estimula el desove de huevos mientras suelta el esperma en el agua para la fecundación. Espere aproximadamente 15-30 minutos después de tirar un divisor para permitir a los peces a mate. Luego, retire a los adultos el tanque mediante una red o levantando el relleno del tanque y colocar el pescado en otro tanque.

A continuación, vierta el agua y los embriones a través de un colador de té para la colección. Luego, utilizando "agua del huevo", lavar los embriones fuera del filtro en una placa Petri. Puede ser necesario transferir embriones entre platos para lograr una densidad óptima de 50-100 por plato. Para asegurar el desarrollo procede a un ritmo normal, colocar los platos en una incubadora a 28,5 ° C.

Una vez que tienes tus embriones, Manipúlelos con cuidado. ¡Son importantes para sus experimentos! Repasemos algunos punteros.

Para mantener los embriones sanos, asegúrese de mantener el agua en los platos de petri limpia y libre de escombros. Embriones muertos serán opacos y deben eliminarse diariamente. Además, el azul de metileno puede añadirse al agua para evitar el crecimiento de hongos.

Cualquier momento que usted necesita mover los embriones de un plato a otro, utilice una pipeta de transferencia. Agitando el plato, puede concentrarse los embriones en el centro de la placa, haciendo más fácil pipetear.

Algunos protocolos requieren algunos pasos adicionales para el mantenimiento del embrión. Para los tres primeros días de vida, desarrollan de embriones de pez cebra dentro un corion, que puede impedir la manipulación del embrión. El corion se puede retirar por el tratamiento con la enzima proteolítica, pronasa, o mediante el uso de fórceps para extraer manualmente. Además, el pez cebra empiezan a desarrollar pigmento por 24 horas, como se muestra aquí en esta larva de pez cebra, que puede interferir con la microscopia. Para ver a través de este problema, los científicos complementan el agua de embrión con PTU, que inhibe la producción de la melanina de pigmento.

Ahora que sabes cómo obtener y cuidar embriones de pez cebra, exploremos algunas de las formas que los investigadores utilizan para el descubrimiento científico.

El desarrollo externo de los embriones de pez cebra permite manipulación genética por microinyección de ADN, ARN o reactivos de precipitación del gene. Este método conduce a una distribución uniforme del material inyectado en el embrión y puede producir fenotipos visibles ocasionados por la sobreexpresión o la pérdida de una proteína. La misma técnica puede utilizarse también para hacer peces transgénicos en los que estructuras específicas están marcadas por la expresión de proteínas fluorescentes.

Además, el pequeño tamaño de las larvas y embriones de pez cebra los hacen ideales para la detección fenotípica de química. Aquí, se cargan los embriones en placas de 96 pocillos y luego tratados con bibliotecas de moléculas pequeñas mediante la adición de los productos químicos en el agua. Más tarde, estos platos de pescado son evaluados por defectos morfológicos, tales como el desarrollo anormal que se muestra a continuación.

Por último, la transparencia de los embriones de pez cebra hace muy adecuado para microscopía. Embriones vivos, expresión de proteínas fluorescentes en tipos celulares específicos pueden ser montados y visualizados con microscopía confocal, permitiendo a los investigadores examinar los movimientos de la célula en el desarrollo de los tejidos con el tiempo.

Sólo has visto video de Zeus en pez cebra cría y manipulación de embriones. En este video, hemos analizado los conceptos básicos de acoplamiento, configuración de los tanques de cría y manipulación de embriones. También discutimos algunos métodos de investigación que se aprovechan de este embrión poco potente. ¡Gracias por ver!

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