Overview
来源: 凯斯图尔特, RVT, RLATG, CMAR;瓦莱丽. 施罗德, RVT, RLATG。圣母大学
生物医学研究的一个基本要求是研究动物的正确识别。必须将正确的动物用于程序和数据收集。实验室小鼠和大鼠可以用下列永久性方法识别: 耳标签、耳打码、微芯片植入、成年小鼠的尾部纹身和新生儿脚趾纹身。染料和标记笔的临时方法也可用于急性研究。这段视频涵盖了对小鼠和老鼠的耳贴标签和冲压的技术方面, 以及每种对动物进行的研究类型的好处。对每个动物的基本手工约束技术 (包括在一个单独的视频) 的知识是必要的, 这些识别方法是正确的完成。
Principles
耳标签是便宜和易于执行, 并因此通常用于识别个别小鼠和老鼠。标签可以用一系列的数字和/或字母 custom-made。将特定的代码分配给一只老鼠/大鼠, 或者给一个原则调查员 (PI), 在记录记录和数据库管理方面的助手, 特别是在有多重菌株和 pi 的大型育种群中。此外, 市面上还有各种各样的标签。金属标签上刻有字符。虽然这种蚀刻是明确的, 当使用鼠标时, 通常需要把它捡起来, 以便读取标签上的代码, 由于小的标签大小。其他选项是塑料标签, 无论是数字和/或字母鲜艳的背景, 或塑料标签的条形码在前面的表面。这两个选项都允许读取标签, 而不必处理这些动物。塑料标签的另一个优势是它们与 MRI 成像的兼容性。
标签在耳朵上的定位是至关重要的, 因为不正确的定位可能会产生一些不幸的后果。标签必须放置, 这样他们不会造成在耳廓的弯曲, 干扰动物的机动性, 或捕获的任何部分的锁定。如果标签放得太靠近耳朵的边缘, 它可以很容易地从耳廓组织撕裂。如果定位太靠近头部, 颈部的皮肤可以捕捉到标签, 这将造成刺激, 疼痛, 和限制运动。这可以导致 self-trauma 从动物抓痕的标签, 翻录它的耳朵, 或得到一只脚抓住了标签。适当的安置和技术培训是必不可少的。1
尽管标签为老鼠或老鼠提供了单独的标识符, 但它们并不是万无一失的。标签可以丢失, 由于战斗, over-grooming, 皮炎易感菌株, 感染, 或 self-trauma。2特别是成年大鼠对耳标签的耐受性较差, 通常会将其移除, 从而造成 self-trauma。在大鼠的更积极的繁殖行为也会导致耳朵标签被撕裂的耳廓。如果老鼠或老鼠是配对或集体安置的, 那么在不止一个动物身上丢失一个耳朵标签就会很麻烦。为了绕过这个问题, 应该使用第二种形式的识别--例如, 在耳对面的标签上使用的打孔代码, 或尾巴或脚趾纹身。一个设施应该规范的选择耳朵被标记和代码要使用的其他耳朵或脚趾。所有的代码应在笼卡上注明。
使用耳打码可以快速而简单的识别方法, 但该技术有局限性。常用的代码对可用的数字有上限, 通常最多可使用100到399。要阅读耳打码, 大多数动物必须掌握在颈背上。该方法可作为 PCR 基因分型的组织样本, 同时进行动物鉴定和基因组取样。这会减少对动物重复处理的压力。3
有三种风格的耳朵拳: 剪刀拳, 拇指拳, 和杠杆冲床。虽然都是同样有效的, 但都有各自的优缺点。例如, 当老鼠衰老时, 耳朵的皮肤会变厚。在幼鼠断奶时, 最好对它们进行耳部击打。对于需要鉴定的成年大鼠, 应考虑使用吸入麻醉。人体工程学, 比拇指拳更容易使用的水平冲床, 特别是对较厚的老老鼠的耳朵。然而, 这两种拳都需要手指的捏动。剪刀冲床具有人体工程学的优点, 不需要挤压运动, 从而避免腕管疲劳和损伤。相比之下, 拇指拳是有利于收集基因分型样本, 因为提示与组织材料将适合离心管。使用的拳打方式应由执行任务的个人和大鼠的年龄来决定。
对老鼠来说, 虽然最常用的是金属标签, 但研究表明, 使用它们是有后果的。炎症, 肿瘤的变化, 甚至慢性疼痛已被观察到的动物已经磨损金属耳标签几个月。34, 56如果有不良反应, 应立即将标签从耳中移除, 并在必要时由兽医人员检查和处理随后的损伤。
适当的保养和维护拳打将延长他们的使用。所有类型的冲床将沉闷, 如果蒸压, 所以建议用消毒剂清洗, 并用酒精冲洗。然后, 必须彻底干燥, 以防止生锈。如果是用于 PCR, 他们应该浸泡3分钟的解决方案, 去除残留的 DNA 或 RNA。使用前, 用酒精冲洗, 擦干。
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Procedure
1. 耳冲识别
耳打码已发展成为一种快速和廉价的方法来标记个别动物。有三种风格的耳朵拳: 剪刀拳, 拇指拳, 和杠杆冲床。动物的右耳用于单位数, 左耳为十, 耳朵中间为数百人。
- 抑制动物, 使耳朵容易接近。大多数老鼠在断奶时都被标记为个体识别。这需要温和的处理, 由于其较小, 更脆弱的大小。如果后肢可以在笼顶或台面等表面上休息, 一些老鼠就不太可能挣扎。
- 确定所需的耳拳, 以符合动物的实验数量或在笼子内识别。
- 根据所使用的代码, 冲床将是凹槽或孔。
- ear 标记上的最后一个数字通常用作识别的第二种方法时的耳打孔标识符。
- 如果动物在稳定的笼群中进行短期研究, 它们可以得到连续的数字。这通常是在没有耳朵标签的情况下完成的。
- 打耳朵
- 为了使一个缺口, 冲床是放置在边缘的耳朵耳廓。
- 要制造一个洞, 把耳朵放在拳孔中, 使冲头的洞远离耳廓边缘的位置。
- 将压力施加到拇指或杠杆上, 或快速、牢固地将剪刀冲进耳朵的皮肤。
- 当使用拇指或杠杆拳时, 轻轻地将冲床从耳朵上抬起来。打开剪刀, 把它从耳朵里移开。
- 避免拉或扭拳, 以防止撕裂耳朵。
- 拳击会在一段时间后变得迟钝。如果一拳打不进耳朵, 松开冲床, 并选择一个新的耳朵冲床。在同一位置重新定位新冲床。
- 每次使用后都要清洗拳头。
- 所有冲床类型将沉闷, 如果蒸压。建议用消毒剂清洗, 用酒精冲洗。彻底干燥, 防止生锈。
- 用于 PCR 的耳拳通常在溶液中浸泡3分钟以去除残留的 DNA 或 RNA。使用前, 用酒精冲洗, 擦干。
图1。用剪刀冲压的小鼠耳朵。
2. 耳标签识别
定制的耳标签可以订购的制造商与字母和/或数字代码, 这允许分化的小鼠菌株或调查。耳标签可以用金属或塑料制成。
- 选择适合于要识别的动物的耳标签。有几种风格的 appliers 可从耳标签制造商。一定要订购的变更是特定的大小和风格的耳朵标签正在使用。
- 轻轻地从纸板架上取下一个标签, 并将其定向到变更, 以便与孔的末端位于变更的缺口区域上。标记的尖端应该在缺口的对面。
- 抑制动物, 使耳朵容易接近。如果后肢可以在一个表面上休息, 例如笼顶或台面, 动物可能会更不容易挣扎。
- 正确定位耳标签的位置。
- 把耳朵标记的点和耳朵的最深的位置尽可能地放在一起, 这样标签号就会面对动物的背部。
- 要使耳朵标记数字面对动物的鼻子, 放置标记的点在耳廓的基地在耳朵的后面。
- 应用标签。
- 牢牢地挤压变更关闭。耳朵的标签会刺穿耳朵和锁在一起。
- 释放变更, 标记的耳朵将从变更中脱落。
图2。在耳廓上正确定位的带有耳标签的鼠标。
- 卸下金属耳标签。
注意: 有时, 金属耳标签会引起耳朵发炎和肿胀。肿胀和刺激往往导致感染的耳廓。治疗应包括去除标签;然而, 在严重刺激或感染的情况下, 动物可能需要麻醉。- 用一个用防腐溶液浸湿的棉签将碎片从标签周围移走。
- 从边与线切割器的标签环顶部切割。不要穿过平坦的表面, 因为这会压缩标签, 捏耳朵, 并造成进一步的损害。
- 避免在切割时使用扭矩, 以防止撕裂耳朵。
- 使用止血将耳标签的切端分开。
- 用止血轻轻地引导耳朵标签通过-和出-耳朵。减少创伤, 避免扩大穿孔孔和滑动的标签, 使卷曲的结束没有通过耳朵。
- 一旦标签不见了, 用防腐浸泡的棉签棒擦拭耳朵。
- 如果耳朵有脓性分泌物, 则可能需要进行后续治疗, 并建议与兽医人员进行协商以进行评估。
正确鉴定实验动物是生物医学研究的基本要求。调查人员必须能够区分个别动物, 以便正确的动物用于实验程序和数据收集。科学家们已经开发了几种永久性的和临时性的方法来鉴定个体的实验动物。在这里, 我们将讨论两种最常用的方法: 耳标记和耳冲孔。
在深入探讨耳冲压过程之前, 我们先介绍一下耳打码、可供选择的拳型, 并讨论这种方法的优缺点。你可能已经猜到了, 耳朵冲孔包括在动物的外耳或耳廓上打一个洞或一个缺口。为了规范该方法, 研制了通用耳冲码。
根据位置的不同, 右耳朵上的凹槽代表单个数字, 如1、3和 5, 双缺口代表2。使用这些凹槽的不同组合, 并总结每个缺口的值, 你可以标记的动物从1到9。同样, 在左耳上, 同样的凹痕代表着十。另外, 不同的组合将覆盖10到90的范围。右侧和左侧耳廓的孔分别代表100和200。并且孔在两个表明300。因此, 例如, 如果你想标记的动物 173, 你应该打一个洞, 在右耳朵的中心 100, 三个凹口在左年总和 70, 和一个单一的缺口在右上耳朵代表单位的地方 "三"。
现在, 让我们来讨论一下三种类型的商用耳拳: 剪刀拳、拇指拳和杠杆拳。这些都有各自的优缺点。
拇指拳需要一个捏动作, 但小到足以适应一个离心管, 使耳朵组织可以更容易收集。从人体工程学上来说, 杠杆拳比拇指拳更容易使用, 尤其是对较年长的老鼠的耳朵更厚。剪刀冲床不需要挤压运动, 从而避免腕管疲劳和损伤。
尽管是一种快速而简单的识别方法, 但耳冲确实有一定的局限性。首先, 上面讨论的耳打码的上限为 399, 这可能限制了这种方法在一些 large-scale 研究中的使用。另一个限制是, 大多数动物必须掌握在颈背上, 以便阅读代码, 从而增加他们处理的时间。随着年龄的增长, 他们的耳朵的皮肤变厚, 很难执行耳冲, 而不会给动物造成重大的痛苦。因此, 在幼鼠断奶时, 最好对它们进行耳部击打。对于需要鉴定的成年大鼠, 在执行耳部穿孔时应考虑使用吸入麻醉。
现在, 您已经了解了一些有关 ear 穿孔代码和可用工具类型的背景信息, 让我们学习如何在小鼠中执行此技术。
在开始操作前, 建议用消毒液清洗冲孔工具, 用酒精冲洗, 然后彻底烘干。避免灭菌耳拳, 因为它最终会使他们迟钝。
开始, 决定动物的实验代码和使用的冲床。让我们使用代码173和剪刀冲床作为例子在这里。同样的程序适用于任何其他代码或冲床。当你准备好了, 通过抓住它的颈背来抑制动物, 这样耳朵就容易接近。从洞开始100。将右耳朵放在冲床中, 使冲床的孔远离耳廓边。其次, 施加压力, 以关闭剪刀迅速和坚定地削减通过皮肤。然后, 松开冲床并将其从耳朵中取出。避免拉或扭拳, 以防止撕裂耳朵。为了制造一个缺口把拳打在耳朵的边缘耳廓在正确的位置, 在这种情况下, 在右耳朵的顶部的 "三" 在代码的单位位置, 并做同样的-应用快速和坚定的压力, 然后打开剪刀删除它。在另一只耳朵上重复相同的步骤, 以打三凹槽--两个为 "20", 靠近外角, 一个为 "50", 靠近内角, 将代码合计为 "70"。
在将动物放回笼子之前, 确认正确的代码被打过。再次, 用消毒剂清洗冲床, 用酒精冲洗, 彻底烘干, 防止生锈。
现在, 让我们转到耳贴标签, 这是另一种廉价和 easy-to-perform 的方法, 单独识别小鼠和老鼠。有各种商业可用的耳标签。这些包括: 金属标签, 有一系列的数字和/或字母蚀刻在他们身上, 和塑料标签的字符或条形码在色彩鲜艳的背景。
金属标签的一个缺点是, 为了阅读代码, 经常需要拿起动物。相比之下, 塑料标签是容易阅读, 而无需处理的动物。塑料标签的另一个优势是它们与 MRI 成像的兼容性。虽然标签为老鼠或老鼠提供了一个单独的标识符, 但它们并不是万无一失的。标签可以丢失, 由于 over-grooming, 皮炎或感染, self-trauma 造成试图删除标签由于不宽容, 战斗, 和侵略性的繁殖行为。如果几个动物被安置在同一个笼子里, 丢失一个耳朵标记可能是麻烦的。为了绕过这个问题, 应该使用第二种形式的识别, 如在标签的对面的耳打码。一个设施应该规范的选择的耳朵被标记和代码要使用的另一只耳朵, 和所有的代码应标明在笼卡。
现在, 让我们学习如何正确应用耳标签, 因为不正确的定位可能会有几个不幸的后果。下面的应用程序, 我们还将讨论删除的耳标签, 这是通常执行的情况下, 由于标签的应用程序感染。
第一步是选择一个适当的标签, 动物被识别。在这里, 我们将使用一个金属标签来演示小鼠的程序。一定要订购的变更, 这是适用于特定的大小和风格的耳朵标签正在使用。轻轻地从纸板架上取下标签, 并将其定向到变更, 以便与孔的一端位于变更的缺口区域上。标记的尖端应该在缺口的对面。
当你准备应用耳标签时, 要抑制动物, 这样耳朵就可以方便地使用。如果后肢能在笼顶或台面等表面上休息, 动物可能会更不容易挣扎。一旦动物被克制, 将耳朵标记的点深深地放在耳朵的鼻甲上, 这样标签号就会面对动物的背部。然后, 牢牢地挤压变更关闭;耳朵的标签会刺穿耳朵和锁在一起。当你释放时, 被标记的耳朵将从变更中脱落。确认标记已正确定位和应用。如果你喜欢的耳朵标签号码面对动物的鼻子, 把标签点的基础上的耳廓在后面的耳朵, 然后挤压锁定标记到位。
标签必须放置, 这样它们不会引起耳朵弯曲, 干扰动物的移动, 或捕捉到锁定的任何部分。如果标签放得太靠近耳朵的边缘, 它就很容易被撕裂。如果定位太靠近头部, 颈部的皮肤可以捕捉到标签, 造成刺激, 疼痛, 并限制运动, 从而可以导致 self-trauma。有时, 金属标签会引起耳朵发炎和肿胀。这往往导致感染的耳廓, 并立即治疗应包括删除的标签。
为了去除标签, 用防腐溶液润湿棉签, 并用它去除标签周围的任何碎片。在严重的感染情况下, 动物可能需要麻醉。然后, 使用线切割器, 从边缘到边缘的标签环的顶部切割。重要的是, 不要穿过平坦的表面, 因为这样会压缩标签, 捏耳朵, 并对耳朵造成损害。使用止血, 轻轻地引导耳朵标签进出耳朵。滑动标签, 使卷曲结束没有通过造成创伤和扩大穿孔孔。一旦标签不见了, 用防腐的浸泡过的棉签棍擦拭耳朵, 然后把动物放回笼子里。如果耳朵有脓性分泌物, 则可能需要进行后续治疗, 并建议与兽医人员进行协商以进行评估。
现在, 你知道如何标记实验室动物使用耳标签和拳, 让我们来看看一些实验, 这些方法可以是有用的。使用耳打码的一个主要优点是, 冲头可以作为基因分型的组织样本, 从而减少由于重复处理引起的动物的压力。但是, 如果您计划使用的拳头收集 PCR 样品, 记得首先浸泡在表面去污剂溶液的设备至少3分钟, 以消除残留的 DNA 或 RNA, 然后用酒精冲洗之前使用。
如果实验持续数天, 识别技术的重要性就会进一步提高。例如, 在这个实验中, 科学家首先用金属标签标记了动物, 然后他们用悬浮的基因表达荧光蛋白的转基因肿瘤细胞注射了坐骨神经。其次, 为了量化癌症的进展, 他们拍摄的动物使用生物发光在一, 十和十八天后注射。
你刚刚看了朱庇特的演示, 展示了两种常用的啮齿动物识别方法: 耳标签和耳拳。你现在应该了解耳打码, 知道不同类型的商业可用的啮齿动物耳标签, 并应该能够准确地执行这些程序, 而不会造成重大的动物不适。
记住, 每种技术都有其优缺点, 必须根据您的实验需要来考虑。除了考虑成本, 在选择适当的识别方法时, 动物的技术和疼痛程度也应该是主要考虑因素。一如既往, 感谢收看!
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Applications and Summary
在选择合适的识别方法时, 必须慎重考虑多种因素。每种技术都有优缺点, 必须考虑与实验需要。虽然成本必须与其他因素一起权衡, 但技术的简单性和对动物的不适程度应该是首要考虑。34
在小鼠和大鼠中常用的是耳冲孔/凹槽, 因为成本不高, 操作简单。可以使用的代码数量有限, 大多数代码的上限为100到399。要阅读耳打码, 大多数动物必须掌握在颈背上。然而, 这种拳打可以作为 PCR 基因分型的组织样本, 从而使鉴定和基因组取样能够同时完成, 从而减少对动物重复处理的压力。5
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References
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