Overview
罗伯特 m Rioux & 刘志峰, 宾夕法尼亚州立大学, 宾夕法尼亚大学公园, PA
灭菌是实验室中最常用的净化方法之一。用高压灭菌剂净化的最常见的物品是那些接触生物样品 (通常是那些含有微生物的)。高压釜的工作原理是利用加压高温蒸汽杀灭载入材料中存在的微生物。充分的蒸汽流动和传热对于高效的灭菌是必不可少的, 这是包装材料时要考虑的关键原则。在使用高压釜工作时, 需要考虑安全问题, 因为压力和温度过高, 这也限制了材料的相容性, 并且在包装、装卸材料时可能要特别注意。.
Principles
灭菌利用高温 (121 和 #176; C), 高压蒸汽 (至少 15 psi), 至少30分钟, 以达到净化。它通过在严酷的条件下脱水细胞来杀死微生物。排气速率取决于负载的性质。对于干固体材料, 可以达到快速排气循环。然而, 液体和生物废物需要缓慢的排气循环, 以避免过热液体沸腾。指示器磁带通常用于验证灭菌的有效性。这些指标使用热敏化学标记来观察高压釜是否符合温度要求 (121 和 #176; C)。指示器磁带的颜色变化意味着有效的灭菌, 而没有颜色变化表示负载不会被净化。但是, 不要使用该指示带作为唯一的来源, 以证据的净化, 因为磁带不会反映是否微生物被杀害, 但只有当高压釜符合温度要求。工作条件也限制了哪些材料是适当的, 哪些构成了安全问题。原则上, 避免在高温高压条件下容易燃烧、熔化或爆炸的材料。在装和卸压釜时要小心, 以免被蒸汽或热水烫伤。为了达到足够的净化, 确保有足够的热量转移和流动的蒸压釜, 袋子和材料包装时。
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Procedure
1. 穿戴适当的个人防护设备 (PPE)
在灭菌期间遇到的高压和温度操作条件会造成潜在的热烧伤或爆炸风险。适当的 PPE 包括实验室大衣、安全眼镜、耐热手套和闭趾鞋;在从高压釜装卸物料时, 必须佩戴这些材料。当处理液体样品时, 戴上围裙和面罩作为额外的 PPE.
2. 准备要加载的材料
- 识别高压釜相容材料和高压釜不相容材料
虽然灭菌代表了一种用于净化的常用和经济方法, 但并非所有材料适用于灭菌由于高压和温度的工作条件。一般而言, 所有在 high-pressurized 蒸汽下蒸发或融化的材料都不符合灭菌。这些材料包括有机溶剂、耐热性较差的塑料, 如聚苯乙烯、聚乙烯和不含不锈钢的金属。切勿高压易燃、易腐蚀、有毒、无反应或放射性化学品。适合灭菌的材料包括 Pyrex 或 I 型硼硅酸盐玻璃、聚丙烯、聚碳酸酯、手套、不锈钢、吸管贴士、纸 (放在高压釜袋内) 和介质解决方案. - 包装材料
在确定了与高压釜相容的材料后, 适当的包装也很重要, 因为它确保安全和高效的灭菌。以下是包装材料的基本原理:- 总是使用由聚丙烯或不锈钢制成的二次容器.
- 对于液体样品, 请将瓶子装满并 #189; 完全松开瓶盖或使用通风关闭。永远不要填满满2/3 的容器, 盖子完全拧紧.
- 检查玻璃容器以确保没有裂缝。如果发现裂缝, 在适当的容器中处理玻璃器皿。 从不 高压釜一种已知的破碎玻璃容器.
- 始终使用高压釜兼容袋来包装废料。袋子应该有指示胶带对此, 并且在装货之前应该在末端打开, 以便允许蒸汽在袋子之内.
- 切勿将袋子或容器超载, 以允许足够的蒸汽流进行完全灭菌。在项目之间留出空间.
- 不 #39; 不要混合不兼容的材料.
- 切勿在垃圾袋中放置锋利的物品.
3。加载材料
- 检查高压釜和 #39 的内部, 以确保前一个用户没有潜在的危险.
- 在加载物料之前清洗排水管, 以便进行良好的循环.
- 确保袋子不要碰到高压釜的内壁, 以免熔化.
- 液体和干物料需要不同的循环, 需要分别进行蒸压.
- 牢固地关闭门.
4。高压釜操作
- 只有训练有素的人员才应允许操作高压釜。如果需要, 请参阅设备手册, 因为不同的高压灭菌器之间的操作协议有所不同.
- 确保高压釜门牢固关闭后, 将灭菌温度设置为121和 #176; C 并保持至少 15 psi 的压力.
- 要设置高压釜的时间和周期, 需要考虑以下因素:
- 制造商和 #39 手册中的设备建议.
- 内装物料的类型: 干燥或液体.
- 加载的材料数量.
- 所用容器的形状和大小.
- 容器和材料的导热性.
- 净化的目的.
5。卸载蒸压材料 (s)
- 按照上面的说明穿戴适当的 PPE.
- 确保高压釜的温度和压力恢复到安全范围.
- 站在门后, 小心地打开门, 将蒸压釜内的任何残余蒸汽放进房间.
- 允许高压釜内的材料站立10分钟, 释放被困在材料内的任何蒸汽或热气.
- 将液体材料从高压釜中取出时不要摇动。如有必要, 请将材料标签为热的, 以避免对可能不知道材料最近被蒸压的个人造成热灼伤.
- 在实验室内或实验室外运输之前, 请等待物料冷却至室温。在这两种情况下, 一定要使用适当的容器来运输.
- 记录用户和 #39 的日志中的材料和灭菌条件的详细信息.
灭菌是实验室中用于净化目的的最常用方法之一.
许多科学家, 特别是那些与生物样品一起工作的人, 需要灭菌设备和介质, 而高压灭菌器提供了一种快速、经济的方法来净化材料。他们使用蒸汽在高温和压力下杀死微生物。然而, 由于这些极端的条件, 必须谨慎使用它们.
此视频将说明高压灭菌的工作方式以及如何正确使用.
在高压釜中, 材料在至少15平方的压力下以蒸汽加热至摄氏121度的温度在至少30分钟后, 这些条件会脱水并杀死细胞.
高压釜可以对液体和固体材料进行消毒, 但必须考虑不同的操作设置。液体需要更长的时间比固体用尽蒸汽, 为了防止一刹那煮沸。此外, 大量的液体材料需要更长的时间来加热到正确的温度.
并非所有材料都能承受高压釜内的温度。因此, 永远不要压釜任何融化, 燃烧, 爆炸, 或液体, 将蒸发。此外, 不要压釜有毒或放射性化学品.
现在, 我们将告诉您如何准备样品的高压釜和如何操作之一.
首先, 选择要灭菌的材料, 并且只使用兼容的容器和工具。Pyrex、硼硅酸盐玻璃、不锈钢、聚丙烯和聚碳酸酯可用于灭菌.
其他常见的实验室材料 (如吸管提示和盒) 也兼容。纸可以在蒸压釜兼容袋.
固体废弃物也可以在适当的袋子中蒸压。在这个袋子里留出空间, 让蒸汽循环, 并把两端绑起来。最后, 在灭菌之前, 一定要在袋子里创建一个小开口, 让蒸汽进入.
对于水介质和其它相容的液体样品, 使用完好无损的容器, 无任何裂纹。将容器填满约半满, 不超过2/3 满.
将气体从液体容器中通风, 松开瓶盖。如果没有盖子, 用铝箔松散地覆盖以防止蒸压材料的污染.
将所有材料放入由聚丙烯或不锈钢制成的二次容器中。将固体和液体材料分开蒸压。在材料之间留出空间, 不要溢容器.
最后, 将一张高压胶带贴在所有垫子上erials此磁带具有温度敏感指示器, 如果已达到足够的温度, 则会变黑。
当使用高压釜时, 应佩戴适当的个人防护设备以抵御高温和压力风险。这包括标准 PPE-安全眼镜, 实验室大衣, 和封闭脚趾鞋和耐热手套。在处理液体样品时, 使用围裙和面罩.
在高压釜中, 首先打开车门, 检查内部是否有任何危险。分别装载液体和干物料, 因为它们需要不同的高压釜循环.
防止熔化确保材料不接触墙壁。通过保持足够的物料间距来确保良好的热量流动。最后, 关闭并密封门.
不同的高压釜有不同的操作说明。可以通过手动设置温度和时间来设置周期, 或者从预设列表中进行选择。一般情况下, 请使用建议的周期来净化所用的材料类型.
固体和液体的各种循环, 以及不同数量的材料和废料被蒸压。当您运行一个周期, 确保温度达到至少121摄氏度和压力至少15平方的
循环结束后, 请确保压力已恢复为零, 而高压釜已冷却。小心打开门, 让剩余的蒸汽。然后, 允许材料站立10分钟释放任何热气体。高压釜胶带现在应该有黑色的条纹或说蒸压, 虽然这不是一个保证, 灭菌已经发生.
穿戴适当的 PPE, 取出材料, 确保不摇晃任何液体样品。记下您在日志中的用法, 包括所遇到的物质类型和任何特殊情况。最后, 将物料输送到安全区域或层流罩以冷却。
你刚才看了朱庇特介绍的压釜。你现在应该了解什么材料可以蒸压, 如何准备它们, 以及如何安全地使用仪器。谢谢收看!
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Applications and Summary
与化学或辐射净化方法相比, 灭菌是实验室最经济实用的方法。然而, 为了确保安全 (避免熔化, 热烧伤, 或爆炸), 确定与高压釜相容的材料和实践适当的包装, 装卸。确保足够的净化效率要求容器或袋材料和足够的空间之间的材料在蒸压釜。需要定期对高压釜进行维护和检查, 以确保高压灭菌设备正常运行.
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References
- Autoclave Safety and Operation, 2015, Division of Research Safety, University of Illinois. at Autoclave Use, Environmental Health & Safety, Princeton University. atProper Use of a Steam Autoclave, 2016, Environmental Health & Safety, Arizona State University.
- Fact Sheet: Using Autoclaves Safely, Environmental Health & Safety, California State University, Los Angeles.
- Guideline for the Safe Use of Autoclaves, 2003, Environmental Health and Safety Service, University of Ottawa.
