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Biology

小鼠肾移植程序

doi: 10.3791/1150 Published: July 10, 2009

Summary

在小鼠肾移植在技术上是一个具有挑战性的过程,需要仔细的术后护理和治疗的成功。

Abstract

在小鼠肾原位移植是一个技术上具有挑战性的过程。 Russell等人虽然进行了第一次肾脏移植在小鼠体内超过30年的前(1)张等年后(2)精制而成,在世界上少数几个人已经掌握了此过程。在我们的实验室中,我们已成功地执行1200> 90%的存活率原位肾移植。成功的关键点包括再灌注损伤,出血及血栓形成,无论是在程序和移植后,严格控制,并吻合,而不是使用的10-0 11-0缝合。

手术后的护理和治疗的收件人,移植成功和评估是非常重要的。所有肾移植受者接受抗生素注射青霉素立即移植后,在饮水中不断sulfatrim。每天和全血中肌酐常规分析评估移植肾功能与便携机的I - STAT的整体动物健康评估。

Protocol

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捐赠者的器官丰收(2):

  1. 麻醉使用65mg/kg戊巴比妥IP捐助;异氟醚(2-3%)维持麻醉。
  2. 一个从胸骨到耻骨正中切口进入捐助者的腹部,暴露左肾,大肠侧向移动到右侧。
  3. 用8-0丝线缝合肾上腺和睾丸血管结扎和分裂隔离的左肾。
  4. 调动的主动脉与肾动脉和静脉交界处以上。
  5. 动员与肾动脉和静脉交界处的上方和下方的下腔静脉(IVC)。
  6. 结扎肾动脉和静脉用8-0丝线缝合,以尽量减少出血以下的主动脉。
  7. 解剖肾门左侧输尿管膀胱。
  8. 公开输尿管交界处,对膀胱圆顶caudad回缩。
  9. 海关一个小,椭圆形的斑块含有左输尿管交界处,用于通过尿膀胱膀胱吻合重建膀胱。不包括右输尿管与膀胱。
  10. 下腔静脉结扎肾动脉和静脉用8-0丝线缝合以下。
  11. 结扎肾动脉和静脉,主动脉以上,慢慢地与0.2 -0.4毫升冷灌注原位移植,肝素林格乳酸钠溶液通过下腹主动脉。
  12. 下腔静脉结扎肾动脉和静脉用8-0丝线缝合以上。
  13. 断面肾静脉与下腔静脉交界处。
  14. 划分的主动脉斜刺,约比肾动脉2毫米。
  15. 取出肾脏和输尿管血管供应整块膀胱修补。在林格乳酸钠溶液冰的商店。
  16. 安乐死在麻醉状态下颈椎脱位的捐助鼠标。

收件人移植(2):

  1. 麻醉用65毫克/公斤苯巴比妥知识产权的收件人,并维持以异氟醚麻醉(2-3%)。
  2. 请正中切口,用湿纱布覆盖的小肠,并小心地缩回它的左侧。
  3. 结扎右输尿管,肾动脉和静脉,并删除右侧肾脏。
  4. 仔细分离和交叉钳结扎腰分行后的两个4毫米microvasular夹具下腹主动脉和下腔静脉。
  5. 通过主动脉全层放置一个10-0尼龙缝线和收回,由单一的削减(血管直径约五分之一)一个椭圆形的aortaotomy。
  6. 请用30号针头刺入的下腔静脉,并适当延长使用microscissors一纵venotomy。
  7. 主动脉和下腔静脉与肝素生理盐水冲洗,以清除腔内的血液或血块。
  8. 从冰中取出供肾,腹腔内,并放置在鼠标的右侧。供肾是用冷盐水浸泡过的纱布保持湿润。
  9. 放置在与捐助者主动脉袖口的受助aortaotomy的近端和远端心尖两呆缝线。
  10. 请捐助主动脉袖口和受助aortaotomy前壁之间的最终侧吻合,使用2〜3个连续的10-0尼龙缝线在主动脉外。
  11. 转动体供肾移植到收件人的左翼。重复前面的过程之间的捐助主动脉袖口和受助aortaotomy后壁
  12. 执行的供肾静脉和受助人下腔静脉后壁之间的端到端的端侧吻合术,下腔静脉内使用4至5个连续的10-0尼龙缝线。然后对下腔静脉和捐助者肾静脉前壁4〜5以外的下腔静脉连续缝合封闭。
  13. 静脉和动脉吻合,必须在20分钟内完成。
  14. 冲洗用冷盐水多次在吻合的移植。
  15. 除以收件人膀胱圆顶,并停止与烧灼出血。
  16. 拱顶上做一个小切口。
  17. 放置两个留10-0尼龙缝线anastomize捐助者与受助人膀胱圆顶小膀胱修补。 8〜10连续缝线缝合吻合口的每一方。
  18. 在两层连续4-0育,人工合成可吸收薇乔缝合关闭的腹部。
  19. 在手术间歇注射IV期间给受体小鼠0.4毫升温盐水。

收件人的术后护理

  1. 关闭腹部后,单一肌肉注射青霉素(500U/10g)(2)管理。
  2. 此外,收件人收到0.05毫克/公斤丁丙诺啡肌注0天,每天1次手术后疼痛。移植受者接受手术后,水中含有sulfatrim(100mg/kg),直到实验TErminated。
  3. 对于第一个24小时,术后小鼠都保存在一个温度控制的孵化器。
  4. 鼠标操作1小时内麻醉恢复,并给予定期的食物和水自由采食。
  5. 手术2周后皮肤缝线被删除。

收件人肾切除术

  1. 麻醉收件人4〜7天用65毫克/公斤苯巴比妥的IP后肾移植,异氟醚(2-3%)维持麻醉。
  2. 通过正中切口打开腹部。
  3. 用盐水浸泡过的纱布盖住的小肠和小心地缩回它的右侧。
  4. 取出后结扎左侧输尿管,肾静脉和动脉,左肾。
  5. 连续4-0合成吸收薇乔缝合腹部两层关闭。

全血中肌酐测量

  1. 每周双周小于0.2毫升的血液收集执行submandibularly无需麻醉或异氟醚麻醉下加装轨道。
  2. 定量全血中肌酐水平确定使用的I - STAT便携式临床分析仪(Heska公司,柯林斯堡,CO)。
  3. 常规单位(毫克/分升)被转换为传统的单位乘以88.4μmol/ L的SI单位。

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Discussion

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我们已经执行了约1200例肾移植技术的成功率> 90%的小鼠。相比,心脏移植,肾移植的成功率通常比较低。然而,我们的实验室一直保持着较高的肾移植的成功率(> 90%)。成功的关键点,以减少再灌注损伤供肾和受助人,并最大限度地减少出血和血栓形成的整个过程中和手术后。 (三)下列因素可能是最重要的是:(a)减少收件人出血,在手术过程中尽可能通过细心和轻柔的操作可能;(b)尽量减少热缺血和阻断期间供肾的准备和受援国移植时间;用一个小的捐助膀胱修补,防止坏死,血液供应不足和膀胱漏手术后;(四)原生肾延迟肾切除术,直到4〜7天进行移植后允许肾移植手术后恢复功能(E )执行的主动脉减少血栓的发生率外吻合(之间的捐助国主动脉袖口和前壁和的捐助主动脉袖口和收件人的主动脉后壁之间);(F)保持至少受体小鼠的温暖手术后24小时;(G)手术后受体小鼠给予抗生素,以防止潜在的感染。

在这个协议中,我们用10-0 11-0缝合,而不是在不影响生存率。 11-0缝合虽然是理想的,并在许多移植实验室,我们感到,上述因素以及控制10-0缝合只要在肾移植中使用的是足够的。

去除剩余的原生肾是必不可少的,因此,在肾移植肾功能下降,可通过血清肌酐测量监控。所有肾移植受者接受左本土4至7天肾移植肾肾切除术。肾切除术不进行肾移植的时间,因为收件人的特点受到健康状况不佳,或无法生存时,这两个程序在同一时间进行。 4至7天的滞后之间的程序,允许被删除前的原生肾移植肾缺血再灌注损伤中恢复过来。肾移植肾功能评估整体动物健康和血液中的肌酐水平的日常检查。仅供参考,非移植,正常小鼠的约20μmol/ L的肌酐水平肾移植排斥反应是怀疑,当收件人的鼠标有迹象显示疾病和肌酐水平升高近100μmol/ L的时间移植的组织病理学分析收获。

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Disclosures

动物实验是由美国俄亥俄州立大学IACUC规定的准则和法规的规定执行。

Acknowledgments

这些研究支持部分资金,由美国国立卫生研究院R01 AI36532 GAH。我们想确认在移植病理蒂博尔Nadasdy博士提供出色的支持,由已故的查尔斯博士欧罗斯发起这项研究工作提供了宝贵的指导和远见。

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
i-STAT Other HESKA Cat 5101
i-STAT Cartridge Other HESKA CAT 5110-CREA
Sulfatrim Other Actavis R02109
Isoflurane Other NOVAPLUS CA-0474
10-0 Suture Surgery Sharpoint AK0100

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References

  1. Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants. JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).
  2. Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. Improved techniques for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 16, (2), 103-109 (1995).
小鼠肾移植程序
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Cite this Article

Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. Murine Renal Transplantation Procedure. J. Vis. Exp. (29), e1150, doi:10.3791/1150 (2009).More

Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. Murine Renal Transplantation Procedure. J. Vis. Exp. (29), e1150, doi:10.3791/1150 (2009).

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