Summary
Farelerde böbrek transplantasyonu, başarı için dikkatli post-operatif bakım ve tedavi gerektiren bir teknik olarak oldukça zor bir işlemdir.
Abstract
Farelerde ortotopik Böbrek transplantasyonu teknik olarak oldukça zor bir işlemdir. Farelerde ilk böbrek nakli (1) önce 30 yılı aşkın Russell ve arkadaşları tarafından yapılan ve yıllar sonra Zhang ve ark (2) rafine olmasına rağmen, dünyada kaç kişi bu yordamı hakim olması. Laboratuarımızda 1200 ortotopik böbrek transplantasyon>% 90 hayatta kalma oranı ile başarıyla gerçekleştirdik. Başarı için kilit noktaları, hem usul ve transplantasyon sonrası sırasında reperfüzyon hasarı, kanama ve tromboz, sıkı kontrol ve anastomozlar için 10-0, 11-0 sütür yerine.
Alıcının Post-operatif bakım ve tedavi başarı ve değerlendirme nakli son derece önemlidir. Tüm böbrek greft alıcıları hemen penisilin enjeksiyon sonrası sürekli olarak içme suyu nakli ve sulfatrim şeklinde antibiyotik alırsınız. Genel hayvan sağlığı, günlük ve tam kan kreatinin analizler greft fonksiyonunu değerlendirmek için bir taşınabilir I-STAT makine ile rutin olarak yapılmaktadır değerlendirilir.
Protocol
Donör Organ Harvest (2):
- 65mg/kg pentobarbital IP kullanarak donör anestezi, anestezi İsofluranın (% 2-3) tarafından yapılmaktadır.
- Donör karın girin ve sağ tarafındaki yanal bağırsak hareket ettirerek sol böbrek maruz sternum pubis için bir orta hat kesi olun.
- 8-0 ipek sütür ile adrenal ve testis damarlarının ligating ve bölünmesi ile sol böbrek izole edin.
- , Renal arter ve ven ile bileşkenin üzerindeki aorta seferber.
- Renal arter ve ven ile kavşak yukarıda ve aşağıda inferior vena kava (IVC) harekete geçirmek.
- Kanamayı en aza indirmek için 8-0 ipek sütür ile renal arter ve ven altına aort Arter.
- Sol üreter, böbrek hilusta, mesane parçalara ayır.
- Mesane kubbesi caudad retraksiyon kullanarak üreterovezikal bileşke Açığa.
- Mesane sol üreterovezikal kavşak, idrar mesane mesane anastomoz ile yeniden inşası için kullanılan içeren Vergi, eliptik küçük bir yama. Sağ üreter, mesane dahil değildir.
- 8-0 ipek sütür ile renal arter ve ven altına IVC Arter.
- , Renal arter ve ven yukarıda aort Arter ve yavaş yavaş 0.2-0.4ml soğuk in situ greft serpmek, infrarenal aorta yoluyla Ringer laktat solüsyonu heparinize.
- 8-0 ipek sütür ile renal arter ve ven yukarıdaki IVC Arter.
- IVC, kavşakta renal ven transect.
- Renal arter altında yaklaşık 2mm, oblik aort bölün.
- Böbrek ve üreter ile en bloc mesane yama bağlı vasküler kaynağı çıkarın. Ringer laktat solüsyonu buz üzerinde saklayın.
- Anestezi altında servikal dislokasyon ile donör fare Euthanize.
Alıcı Nakli (2):
- 65 mg / kg pentobarbital IP ile alıcı anestezisi ve İsofluranın tarafından anestezi (% 2-3) korumak.
- Bir orta hat kesi ıslak bir gazlı bez ile bağırsak kapak ve sol tarafında dikkatlice geri çekin.
- Sağ üreter, renal arter ve ven Arter ve sağ böbrek kaldırmak.
- Dikkatle lomber dal ligasyonundan sonra otörler iki adet 4 mm microvasular kelepçeli infrarenal aorta ve IVC izole ve kros-klemp.
- Aorta tam kalınlığı ile 10-0 naylon dikiş yerleştirin ve tek bir kesim (damarın çapı yaklaşık beşte birinin) eliptik bir aortaotomy yapmak için geri çekme.
- 30 gauge iğne ile IVC piercing ve uygun microscissors kullanarak uzanan uzunlamasına bir venotomi olun.
- Intraluminal kan pıhtıları temizlemek için hem aorta ve IVC heparinize salin ile yıkayınız.
- Buz donör böbrek çıkarın ve farenin sağ kanadını intra-abdominal yerleştirin. Donör böbrek soğuk tuzlu batırılmış gazlı bezle nemli tutulmalıdır.
- Donörlerin aort manşet alıcıların aortaotomy proksimal ve distal apeks iki kalış sütür.
- Donör aort manşet ve alıcıların aortaotomy ön duvar arasında bir uç-yan anastomoz, 2 ~ 3 sürekli 10-0 naylon sütürlerle aort dışında kullanarak olun.
- Alıcının sol kanadını üzerinden donör böbrek greft açın. donör aort manşet ve alıcıların aortaotomy arka duvar arasında önceki prosedürü tekrarlayın
- Donör renal ven ve alıcıların IVC arka duvar arasında bir uç-yan anastomoz, IVC iç 4 ila 5 sürekli 10-0 naylon sütürler kullanarak gerçekleştirin. IVC ve donörlerin renal ven ön duvar ve ardından 4 ~ 5 IVC dışında sürekli dikişlerle kapatılır.
- 20 dakika içinde her iki ven ve arter anastomoz bitmiş olmalıdır.
- Ile greft anastomozu sırasında soğuk tuzlu birkaç kez durulayın.
- Alıcı mesane kubbesi Böl ve koter ile kanamayı durdurmak.
- Kubbenin üzerindeki küçük bir kesim olun.
- Alıcıların mesane kubbe ile donörlerin küçük mesane yama anastomize iki kalış 10-0 naylon sütürler yerleştirin. 8 ~ 10 sürekli dikiş ile anastomoz Her iki taraf sütüre edilir.
- Sürekli 4-0 steril, sentetik emilebilir Vicryl dikiş ile iki kat karın kapatın.
- Aralıklı enjeksiyon IV tarafından ameliyat sırasında alıcı fareler 0.4ml ılık tuzlu su verin.
Alıcı Post-operatif Bakım
- Karın kapattıktan sonra, penisilin (500U/10g) tek bir intramüsküler enjeksiyon (2) uygulanır.
- Buna ek olarak, alıcılar gün 0 ve 1 gün cerrahi sonrası ağrı için 0.05 mg / kg intramusküler buprenorfin verilmektedir. Deney te kadar ameliyatı takiben, transplant alıcıları sulfatrim (100mg/kg) içeren su almakrminated.
- Ameliyat sonrası ilk 24 saat için fareler inkübatör kontrollü bir sıcaklık tutulur.
- Fareler genellikle 1 saat içinde operasyon anestezi kurtarmak ve düzenli olarak yiyecek ve su ad libitum verilmiştir.
- Cilt dikişler ameliyattan sonra 2 hafta kaldırılır.
Alıcı Nefrektomi
- 65 mg / kg pentobarbital IP alıcı 4 ~ 7 gün sonrası böbrek nakli anestezi, anestezi İsofluranın (% 2-3) tarafından yapılmaktadır.
- Karın orta hat kesi ile açın.
- Kapak tuzlu batırılmış gazlı bez ile bağırsak ve dikkatle sağ tarafına geri çekin.
- Sol üreter, böbrek ven ve arter ligasyonundan sonra otörler sol böbrek çıkarın.
- Sürekli 4-0 sentetik emilebilir Vicryl dikiş ile iki kat karın kapatın.
Tam Kan Kreatinin Ölçümleri
- 0.2 cc den az iki haftada bir kan toplama haftalık ya submandibularly İsofluranın anestezi altında ya da retro-orbitally anestezi olmadan yapılır.
- Kantitatif bütün kan kreatinin seviyeleri I-Stat Taşınabilir Klinik Analyzer (Heska Corp, Fort Collins, CO) ile belirlenir.
- Konvansiyonel birimleri (mg / dl) 88.4 geleneksel birimleri çarpılarak mikromol / L SI birimlerine dönüştürülür.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Biz fareler,>% 90 teknik başarı oranı ile yaklaşık 1200 vaka böbrek nakli gerçekleştirdik. Kalp nakli ile karşılaştırıldığında, böbrek nakli başarı oranı genellikle düşüktür. Ancak, laboratuvar, yüksek bir başarı oranı (% 90) böbrek nakli korumuştur. Başarı için kilit noktaları, hem donör böbrek ve alıcıları reperfüzyon yaralanmaları azaltmak ve prosedür ve ameliyat sonrası boyunca kanama ve tromboz en aza indirmek için. (C) aşağıdaki faktörler önemli olabilir: (a), ameliyat sırasında alıcı kanama mümkün olduğunca dikkatli ve nazik bir operasyon ile azaltmak, (b) donör böbrek hazırlanması ve alıcı nakli sırasında sıcak iskemik ve kros-klemp kez en aza indirmek; nekroz, yetersiz kan dolaşımı ve mesane sızıntı sonrası operasyonu önlemek için küçük bir verici mesane yama kullanmak; (d) doğal böbrekte gecikme nefrektomi kadar 4 ~ 7 gün transplantasyon sonrası cerrahi sonrası nakledilen böbrek fonksiyonu kurtarmak için izin vermek; (e ) tromboz sıklığını azaltmak için aort dışında anastomozlar (donör aort manşet ve ön duvar arasında ve donör aort manşet ve alıcının aort arka duvar arasındaki) gerçekleştirmek; (f) en az alıcı fareler sıcak tutmak 24 saat ameliyat aşağıdaki (g) olası enfeksiyonları önlemek için ameliyat sonrası alıcı farelere antibiyotik vermek.
Bu protokol, biz sağkalım oranı etkilemeden yerine 10-0 11-0 sütür kullanabilirsiniz. 11-0 dikiş ideal ve birçok nakli laboratuvarlarda kullanılan olmasına rağmen, yukarıda açıklanan faktörler iyi kontrol dikiş 10-0 sürece böbrek nakli kullanmak için yeterli olduğunu hissediyorum.
Böbrek greft işlevi bu düşüş, serum kreatinin ölçümleri ile takip edilebilir, böylece kalan yerli böbrek kaldırılması esastır. Tüm böbrek greft alıcıları, 4 ve 7 gün böbrek nakli arasında sol ana böbrek nefrektomi. Alıcıların karakteristik sağlık acı veya her iki yöntem de aynı zamanda yapılır hayatta çünkü nefrektomi böbrek nakli anda gerçekleştirilmez. Prosedürleri arasındaki 4 ila 7 gün gecikme yerli böbrek kaldırılmadan önce böbrek greft iskemi ve reperfüzyon hasarı kurtarmak için izin verir. Böbrek greft fonksiyonu genel hayvan sağlığı ve kan kreatinin düzeyleri günlük muayene ile değerlendirildi. Referans için, olmayan bir nakledilen, normal fare yaklaşık 20 mikromol / L. kreatinin düzeyi Böbrek allogreft reddi alıcı fare hastalık belirtileri gösterir ve kreatinin düzeyi 100 mikromol / L zaman greft histopatolojik analiz için hasat hangi yakınında yüksek şüpheleniliyor.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Hayvanlar üzerinde yapılan deneyler, Ohio State Üniversitesi IACUC tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı.
Acknowledgments
Bu çalışmalar GAH için R01 AI36532 NIH tarafından finansman kısmen desteklenmiştir. Biz Dr. Tibor Nadasdy tarafından sağlanan nakli patoloji olağanüstü desteğini kabul etmek ister ve bu araştırma çabası başlatılması merhum Dr. Charles G. Orosz tarafından sağlanan değerli rehberlik ve öngörü.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| i-STAT | Other | HESKA | Cat 5101 | |
| i-STAT Cartridge | Other | HESKA | CAT 5110-CREA | |
| Sulfatrim | Other | Actavis | R02109 | |
| Isoflurane | Other | NOVAPLUS | CA-0474 | |
| 10-0 Suture | Surgery | Sharpoint | AK0100 |
References
- Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants. JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).
- Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. Improved techniques for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).
