Summary
Dans cet article nous présentons un protocole général pour la mesure de la durée de vie des nématodes maintenu sur un support solide avec UV-tué alimentaire bactérienne.
Abstract
Le vieillissement est un processus dégénératif caractérisé par une détérioration progressive des composants cellulaires et des organites résultant de la mortalité. Le nématode
Protocol
Partie 1: Préparer la croissance des médias nématodes (NGM) plaques
Cette section décrit la préparation des plaques NGM solide pour une utilisation dans l'expérience la durée de vie. Une expérience de vie de base durée nécessite deux types de plaques: les plaques NGM standard, qui ne contiennent pas d'additifs, et Amp / FUDR plaques, qui ont à la fois à l'ampicilline (Amp) et fluorodésoxyuridine (FUDR) ajouté à l'assemblée générale nationale. L'ampicilline est utilisée pour prévenir la contamination bactérienne étrangers. FUDR inhibe la division cellulaire, réduit la production d'œufs, et empêche les oeufs d'éclore. L'utilisation de FUDR pour l'analyse de longévité n'affecte pas la durée de vie adulte et élimine la nécessité de transférer les vers tous les quelques jours afin de les séparer de la larve en croissance. Les deux types de plaques sont ensemencés avec E. coli OP50 bactéries, qui est ensuite tué par l'exposition aux UV.
- Préparer NGM (voir section 5 pour la recette et les notes de stockage) et des boîtes de Pétri étiquette. Vous aurez besoin d'une plaque de Pétri de 60 mm par 10 mL d'NGM. Si vous commencez avec le NGM solide préalablement préparées, passez à l'étape 1.2. Si vous commencez avec le NGM fraîchement autoclavés, passez à l'étape 1.4.
- Fondre complètement NGM solide en micro-ondes sur le haut dans 30 secondes impulsions. Swirl média entre les impulsions pour éviter les bulles de gaz sous pression de s'accumuler.
- NGM Placez liquide dans 55 ° C ou bain d'eau sur le banc pour refroidir.
- Une fois atteint NGM 55 ° C ajouter 33 ul de 150 mM FUDR et 100 pi de 100 mg / ml d'ampicilline par 100 mL NGM (pour Amp / FUDR plaques) et agiter pour mélanger. Pour les plaques NGM sans médicaments supplémentaires procéder directement à l'étape 1.5.
- En utilisant une technique stérile, une pipette 10 ml NGM dans chaque assiette de 60 mm de Pétri. Eviter la formation de bulles si possible. Si des bulles se forment, ils peuvent être sauté à l'aide d'une pipette.
- Laisser les plaques sur le banc avec des couvercles sur NGM pour permettre de solidifier et sécher. Si possible, laissez les plaques sur le banc pour 2 jours avant d'ajouter les bactéries, mais un jour ne fonctionnera que si les plaques sont nécessaires plus tôt.
- Le jour avant que les plaques terminer le séchage, la culture LB semences liquide avec une seule colonie d'une strie frais de E. coli OP50 bactéries sur une gélose LB. Vous devez préparer au moins 1 mL d'une nuit OP50 culture par 60 plaques mm.
- Placer OP50 culture à 37 ° C shaker et permettent aux bactéries de croître durant la nuit (la culture doit atteindre la saturation).
- Pellet OP50 bactéries par centrifugation à 3500 g pendant 10 minutes.
- Retirer 90% des bactéries surnageant et remettre à concentrer la culture 10x.
- Pipeter 100 uL de 10x concentrée OP50 la culture dans le centre des assiettes NGM solidifié. Agiter doucement les plaques pour étaler la culture de bactéries, si nécessaire (idéalement bactéries devraient couvrir la zone centrale de la NGM sans venir près des murs plaque). Essayez d'éviter de toucher la pointe de la pipette sur la surface de l'assemblée générale nationale, comme des défauts dans la surface du média permettent les vers s'enfouissent dans le NGM.
- Laisser les plaques sur le banc durant la nuit pour permettre la culture des bactéries à sécher sur la NGM solides (prend environ 24 heures).
- Une fois sec, exposer la surface des plaques à une dose d'UV suffisante pour arrêter la croissance de la bactérie. Si vous utilisez un Stratalinker UV Stratagene 2400:
- Plaques place dans le Stratalinker et enlever les couvercles
- Fermez la porte et tournez sur la Stratalinker
- Appuyez sur «l'énergie»
- Entrez '9999 'aide du clavier
- Appuyez sur 'Démarrer'
- Les plaques seront exposées aux UV pendant environ 5 minutes
- Plaques avec des bactéries tuées UV peuvent être stockés à l'envers à 4 ° C pour un maximum de 1 mois.
Partie 2: Effectuer un oeuf chronométré prévoyant d'acquérir un âge synchronisé population d'animaux
Dans cette section, nous générons une population de vers de terre avec une trappe à jour commun. Ceci est accompli en permettant aux adultes reproducteurs actifs pour pondre leurs œufs sur un plateau pour une période de temps définie et permettant ces oeufs à se développer.
- (Facultatif) Le transfert d'environ 20 vers adultes jeunes à une plaque de NGM frais sans FUDR. Laisser les plaques à 25 ° C afin de permettre à des vers pour se propager et à manger dans toute la nourriture bactérienne. Après la nourriture bactérienne a été consommé vers nouvellement éclos entrera dans le stade de croissance arrêtée Dauer. Vous allez commencer à voir la larve dauer autour d'ici une semaine, selon le nombre de vers de vous transférer à la plaque de départ. Dauer larve peut être utilisé pour les prochaines étapes pour un maximum de 1 mois.
- (Facultatif) larve dauer transfert 20 à 30 à une plaque NGM frais sans FUDR. En présence de nourriture dauer larves deviendront des adultes reproducteurs actifs dans les 2 jours et restent reproducteurs actifs pendant quelques jours puis à 25 ° C.
- Transfert de 10 à 15 adultes reproducteurs actifs à une plaque de NGM frais sans FUDR. Cette plaque est appelée la ponte chronométrés (TEL) la plaque.
- Laisser la plaque TEL à 25 ° C pendant 6 heures afin de permettre à til temps de vers de terre pour pondre leurs œufs.
- Retirer de la plaque vers adultes TEL. Plaque peut être inspecté visuellement pour les oeufs avant de retirer les adultes. Si les vers n'ont pas mis un nombre suffisant d'oeufs de la plaque TEL peut être laissé à 25 ° C jusqu'à un total de 24 heures avant d'enlever les vers adultes.
- Placer la plaque TEL à 20 ° C jusqu'à ce que les oeufs ont éclos et les vers ont développé jusqu'au stade L4 larvaire (ce qui prend généralement deux jours pour les sauvages de type C. elegans, mais peut prendre plus de temps pour les souches de phénotypes de développement lent).
Partie 3: Les animaux score pour la durée de vie
Dans cette section, nous suivons l'âge synchronisée de la population de vers de la partie 2 jusqu'à ce qu'ils meurent. Worms sont maintenus sur Amp / FUDR plaques pour empêcher la production d'œufs et de la contamination bactérienne et sont considérés comme morts quand ils échouent à répondre aux stimuli externes.
- Transfert L4 larve à ensemencé Amp / FUDR plaques. Pour chaque souche ou la condition d'être testé, il est typique de mettre en place les plaques 2-3 avec 25-30 vers par assiette. Images du C. étapes de la vie elegans sont fournis à titre de référence (figure 1) 1.
- Placez Amp / FUDR plaques à 20 ° C pendant 24 heures.
- Après 24 heures, évaluer visuellement les vers, les médias, et les bactéries. Transfert vers de nouvelles Amp / FUDR plaques si l'un des suivants est observé:
- Worms ont mangé la plupart de la nourriture bactérienne. Tôt dans la vie des vers de l'expérience durée devront être transférés 1 à 2 fois par semaine pour empêcher les bactéries d'être épuisées.
- Un nombre important de larves sont présentes. C'est habituellement un signe que les vers ont été transférés aux plaques Amp / FUDR que les jeunes adultes au lieu d'L4S et ont pu poser quelques oeufs avant la FUDR a pris effet. Le FUDR sera généralement d'éviter les larves de devenir des adultes pleinement, mais parfois un peu de devenir des adultes et de se confondre avec les animaux de laboratoire.
- Des bactéries vivantes / de croissance sont observés. Généralement, la combinaison de l'AMP et UV-tuant s'assurera qu'aucun des bactéries vivantes contaminent l'expérience, mais parfois il se produit.
- La croissance des champignons est observée sur les médias. Si dépisté assez tôt, la croissance des champignons peuvent généralement être coupés à l'aide d'une pipette ou une spatule. Une fois qu'il pousse à être plus grand que quelques millimètres de diamètre, il est généralement plus facile de transférer les vers de terre pour une nouvelle plaque.
- Utilisation du champ de dissection, de déterminer si chaque ver est vivant ou mort.
- Tapoter doucement la plaque. Le ver est vivante si elle se déplace en réponse à la mise sur écoute.
- Si le ver ne répond pas à exploiter la plaque, un zoom sur la tête de la région.
- Tapoter doucement la tête de la vis sans fin avec le transfert de ramasser platine. Score le ver comme mort si elle ne répond pas en déplaçant sa tête.
- Vers morts peut être retiré de la plaque.
- Notez la date et le nombre de vers qui sont vivants et morts.
- Retour des plaques à 20 ° C.
- Répétez les étapes 3.3 à 3.6 tous les 2 à 3 jours jusqu'à ce que tous les vers sont morts.
Partie 4: résultats représentatifs.
Les données brutes produites par une expérience de durée de vie des nématodes est une liste de dates avec chiffres correspondants de vers qui sont vivants et morts pour chaque souche testée. Le nombre de vers qui meurent chaque jour est généralement inversé pour calculer la proportion de vers vivants chaque jour (figure 2A), qui est tracée graphiquement comme une courbe de survie (figure 2B, le jour de la ponte chronométré est considéré comme jour 0 ). La durée de vie de chaque individu dans le ver de l'étude peut être calculée à partir du nombre de vers qui meurent chaque jour et utilisées pour calculer la durée de vie moyenne et la médiane pour la comparaison entre les souches. Le comptage du nombre de vers vivants chaque jour n'est pas utilisé directement dans l'analyse de la durée de vie. Worms maintenu sur un support solide sera l'occasion «fuir», ou ramper soit sur le mur de la plaque ou vers le bas sous le support. Le nombre de vers vivants chaque jour peut être utilisée pour déterminer combien les vers fui pendant toute la durée de l'expérience. Worms qui fuient sont généralement retirés de l'analyse. Comme point de repère, la durée de vie typique médiane de N2, le C. elegans souche de type sauvage, maintenue sur le rayonnement UV-tué les bactéries à 20 ° C est d'environ 25 jours, mesurée à partir d'oeufs.
Partie 5: Solutions
| Croissance nématode médias (NGM), 100 ml: | |
| Combiner: | |
| 0,3 g | NaCl |
| 0,25 g | Peptone |
| 2 g | Agar |
| Autoclave pendant 40 minutes et laisser refroidir à 55 ° C, puis ajouter: | |
| 100 uL | 1 M MgSO 4 |
| 100 uL | 5 mg / ml de cholestérol |
| 100 uL | 1 M de CaCl2 |
| 1,625 ml | 1,5 M pH 6,0 KPi |
| NGM liquide peut être utilisé immédiatement pour verser des plaques ou des permis de solidifier et stockées à long terme à la température ambiante | |
| Luria Broth (LB), 1L: | |
| 10 g | Bactotryptone |
| 5 g | Extrait de levure |
| 10 g | NaCl |
| 10 ml | Tris 1 M pH 8,0 |
| 1 L | l'eau déminéralisée |
| Autoclave et conserver à température ambiante. | |
| 1 M MgSO 4, 300 ml: | |
| 73,95 g | MgSO 4 |
| 300 ml | l'eau déminéralisée |
| Autoclave et conserver à température ambiante. | |
| 5 mg / ml de cholestérol, 200 ml: | |
| 1 g | le cholestérol |
| 200 ml | 100% d'éthanol |
| Filtre stériliser et stocker à température ambiante. | |
| 1 M de CaCl 2, 500 ml: | |
| 27,75 g | CaCl 2 |
| 500 ml | l'eau déminéralisée |
| Filtre stériliser et stocker à température ambiante. | |
| 1,5 M pH 6,0 KPi, 1L: | |
| Combiner: | |
| 31,4 g | KPi dibasique |
| 179,6 g | KPi monobasique |
| 850 ml | l'eau déminéralisée |
| Chauffer tout en mélangeant afin de permettre KPi de dissoudre dans la solution. Ajuster le pH à 6,0 avec NaOH 10 N. | |
| Ajouter de l'eau déminéralisée à 1 L. | |
| Autoclave et conserver à température ambiante. | |
| Tris 1 M, pH 8,0: | |
| 60,57 g | Tris |
| 400 ml | l'eau déminéralisée |
| Ajuster le pH à 8,0 avec HCl. | |
| Ajouter de l'eau déminéralisée à 500 mL. | |
| Filtre stériliser et stocker à température ambiante. | |
| 150 mM fluorodésoxyuridine (FUDR), 10 ml: | |
| 0,3693 g | FUDR |
| 10 ml | l'eau stérile déionisée |
| Conserver à -20 ° C. | |
| 100 mg / ml d'ampicilline (Amp), 10 ml: | |
| 1 g | Ampicilline |
| 10 ml | l'eau stérile déionisée |
| Conserver à -20 ° C. | |
| 50 mg / ml de carbénicilline (Carb), 10 ml: | |
| 500 mg | Carbénicilline |
| 10 ml | l'eau stérile déionisée |
| Conserver à -20 ° C. | |
| 1 M isopropylique β-D-thiogalactopyranoside (IPTG), 10 ml: | |
| 2,38 g | IPTG |
| 10 ml | l'eau stérile déionisée |
| Conserver à -20 ° C. | |
Images Figure 1. Fond clair de C. étapes de la vie elegans, y compris les œufs, les quatre stades larvaires (L1 - L4), et l'adulte. Tous les panneaux montrent les hermaphrodites, sauf le coin inférieur droit, qui montre un mâle adulte (Image tirée du bois (1988)).
Les résultats représentatifs Figure 2. À partir d'un C. expérimentation elegans durée de vie comparant sauvages N2 souche de type à une souche contenant une mutation dans le gène daf-2. (A) Un tableau présentant les données recueillies, y compris nombre de jours depuis les vers étaient des œufs, du nombre de vers morts observées chaque jour, et le pourcentage de l'échantillon initial restant en vie à chaque jour (tel que calculé à partir des chiffres quotidiens de vers morts) . (B) courbes de survie correspondant à la durée de vie des données fournies dans (A).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Le contrôle génétique de la longévité a été largement étudié en C. elegans, largement dû à la facilité et la rapidité avec laquelle la durée de vie peut être déterminée. Le protocole abordées dans cet article décrit un cadre de base pour obtenir des données reproductibles durée de vie en C. elegans et peut également être appliquée à des espèces relatednematode. 2 En faisant quelques simples modifications de ces procédures peuvent être adaptés pour mesurer la durée de vie sous une variété de conditions. Ici, nous allons discuter de plusieurs variations communes, y compris des bactéries vivantes, l'interférence ARN (ARNi), une restriction alimentaire par la privation des bactéries, et sans drogue NGM.
Probablement la variante la plus courante de ce protocole est le maintien de vers sur des bactéries vivantes. Ceci peut être accompli en faisant quelques changements mineurs. Premièrement, le changement de la procédure à suivre pour l'ensemencement des plaques avec des bactéries (étapes 1.7 à 1.13). Au lieu de cultiver des cultures OP50 de la saturation, poussent à la mi-phase log et la pipette 200 ul sur les plaques directement à partir de la culture liquide. Permettent aux bactéries de se développer sur les plaques pendant la nuit et omettre l'exposition aux UV. Ampicilline devraient également être exclus des plaques avec des FUDR. Un avantage d'utiliser des bactéries vivantes est que les vers ne doivent pas être transférées comme souvent à de nouvelles plaques, puisque la nourriture bactérienne est vivant et en pleine croissance. L'inconvénient de la nourriture bactérienne vivons est que OP50 est pathogène pour les C. elegans. Worms 3 cultivés sur des bactéries vivantes ont une courte durée de vie que les vers cultivés sur les UV tué les bactéries, les trois qui pourraient éventuellement masque de phénotypes durée de vie associée au vieillissement. Durée de vie médian des bactéries vivantes est d'environ 20 jours.
Inactivation de gènes par RNAi est facilement accompli en C. elegans en modifiant leur alimentation bactérienne afin qu'il produise l'ARN double brin correspondant au gène d'être renversé. Deux bibliothèques ARNi bactériennes sont disponibles qui couvrent plus de 90% des cadres ouverts de lecture dans le C. génome elegans. 4-9 Pour utiliser l'ARNi dans le contexte de la durée de vie, remplacer les bactéries OP50 avec le clone d'intérêt ARNi et suivre les modifications discutées dans le paragraphe précédent pour mesurer la durée de vie des bactéries vivantes. Les bibliothèques d'ARNi utiliser un système d'expression plasmidique base. Le plasmide est sélectionné pour l'aide d'une cassette de résistance à la carbénicilline et l'expression de l'ARN double brin est induite par isopropylique β-D-thiogalactopyranoside (IPTG). Les deux carbénicilline et IPTG doivent être inclus dans les plaques NGM. Modifier l'étape 1.4 en ajoutant 100 uL 1 M IPTG et 50 ul de 50 mg / ml de carbénicilline par 100 ml d'NGM deux types de plaques. Ampicilline n'a pas besoin d'être ajouté à n'importe quel type de plaque, puisque carbénicilline remplit le même rôle.
La restriction alimentaire est l'intervention la plus largement étudiée pour ralentir le vieillissement à travers les espèces évolutivement divergentes. Dans C. elegans, l'extension maximale durée de vie sur le support solide est observée lorsque la source de nourriture bactérienne est complètement enlevée à l'âge adulte, une forme de restriction alimentaire appelle la privation bactérienne (BD). 9, 10 Afin de mesurer la durée de vie dans le contexte de la BD, apporter deux modifications le protocole ci-dessus. Premièrement, préparer un troisième type de plaque. Ces plaques doivent être identiques aux plaques Amp / FUDR exception manque la source de nourriture bactérienne. Deuxièmement, modifier la partie 3 pour y inclure une étape supplémentaire entre l'étape 3.2 et l'étape 3.3. Sur le 4ème jour de l'âge adulte (4 jours après le transfert des larves L4 à Amp / FUDR) le transfert vers BD Amp / FUDR plaques manquent bactéries. Une complication associée à cette forme de restriction alimentaire est le ver "tendance à fuir. En l'absence de nourriture aux vers ne sera pas rester près du centre de la plaque, mais va augmenter leur zone d'exploration à la recherche de nourriture. En conséquence, une plus grande fraction des vers rampent sur les murs de la plaque et se dessèchent. Nous voyons souvent 50% à 70% des animaux fuient après avoir été transférés à des plaques de BD. Pour remédier à ce problème, démarrez avec trois fois plus nombreux vers dans le but d'avoir un nombre important restant sur les assiettes après le vol. BD peut également être combiné avec de la nourriture bactérienne vivre sans modifications supplémentaires, ou avec l'ARNi avec une modification supplémentaire. Pour les BD avec des ARNi, un antibiotique supplémentaire doit être ajouté aux plaques sans bactéries pour empêcher les bactéries transférées avec les vers de se développer et de fournir une source de nourriture non désirés. Deux exemples sont la tétracycline et à la kanamycine, soit de ce qui peut être ajouté aux plaques FUDR sans nourriture bactérienne durant l'étape 1.4. BD peut également être initiée dès 2 jours de l'âge adulte ou aussi tard que 14 jours de l'âge adulte, sans impact significatif sur la durée de vie 10.
La modification finale que nous allons discuter est la mesure de la durée de vie sur des plaques NGM sans médicaments supplémentaires (par exemple l'ampicilline ou FUDR). Ceci peut être accomplisimplement ne pas ajouter les médicaments à l'étape 4 lors de NGM et en ajoutant une étape supplémentaire dans la partie 3. Sans FUDR les vers continueront à pondre et la production de larves. Pendant leur phase de reproduction (environ la première semaine de l'âge adulte) tous les vers expérimentaux devront être transférées à des plaques de frais tous les 2 jours pour les séparer de leur progéniture.
C. elegans hermaphrodite sont principalement avec les rares cas de mâles. La durée de vie est généralement mesurée par hermaphrodites seulement, mais peut aussi être mesuré pour les hommes. Il ya deux défis associés au travail avec des hommes C. elegans. La première est l'acquisition d'une grande quantité de vers masculins, comme l'auto-fécondation hermaphrodite produit une très petite fraction de la progéniture de sexe masculin (0,1%). 11 Une fois une population contenant des vers masculins est atteint, mâle / hermaphrodites l'accouplement produit nombre approximativement égal d'hommes et de hermaphrodites aussi longtemps que les vers sont maintenues en présence de nourriture. 12 Masculin stocks peuvent être commandés auprès du Centre de Génétique Caenorhabditis ou générées par le dépistage visuel pour les mâles fondateurs produite à partir de l'auto-fécondation hermaphrodite. Le deuxième défi est de sexe masculin de comportement balayage. En l'absence de nourriture ou des partenaires potentiels (hermaphrodites), vers mâles entrer dans un mode de comportement qui consiste à chercher une large gamme de mouvement. 13 Quand maintenu sur les plaques Ce comportement résulte dans une large fraction des vers fuyant les murs plaque et desséchant . La méthode générale pour faire face à cette difficulté est tout simplement de commencer avec des hommes assez qu'un nombre important reste la plupart après avoir fui.
En dehors de la durée de vie, une commune liée à l'âge phénotype est l'accumulation de lipofuscine. Lipofuscine est complexe déchets cellulaires qui ne peuvent pas être dégradés qui s'accumule dans les cellules avec l'âge et est utilisé comme un biomarqueur du vieillissement en C. elegans. 14, 15 fluorescent lipofuscine et peuvent être facilement visualisés en C. elegans utilisant le canal DAPI d'un microscope à fluorescence (figure 3). Lipofuscine d'accumulation peuvent être visualisés dans les vers étant marqué pour la durée de vie directement sur les plaques NGM, permettant la collecte d'un phénotype utiles secondaires en parallèle avec la durée de vie.
En plus de la durée de vie, le protocole décrit dans cet article peut également être utilisé pour marquer la progression phénotypiques liées à l'âge de paralysie en C. elegans modèles de la maladie proteotoxicity. 16 Quand un ver devient paralysé, il devient incapable de ramper à travers la plaque, mais peut encore bouger sa tête. Un ver est notée comme paralysée si elle ne parvient pas à se déplacer par rapport à l'assemblée générale nationale en réponse à plaque taraudée ou aiguillon avec une reprise de transfert de platine, mais ne bouger sa tête. Worms qui meurent généralement de conserver le score paralysie (paralysie ou non paralysé) qu'ils ont été donnés lors de l'observation la plus récente en direct. Type important, même sauvage C. elegans devenue paralysée à l'âge avancé. Pour cette paralysie raison est généralement pas marqué pour les vers de plus que d'environ 20 jours, au-delà de ce point il devient difficile de distinguer entre la paralysie provoquée par le vieillissement normal et la paralysie causée par la progression de la maladie proteotoxicity.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Ce travail a été soutenu par une Percées Glenn / Afar en gérontologie et le Prix des subventions du NIH 1R01AG031108-01 à MKGS est soutenu par le NIH bourse de formation P30AG013280. MK est une Ellison Medical Foundation New Scholar liés au vieillissement.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Agar | Reagent | Fisher Scientific | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillin | Reagent | Gold Biotechnology | C0109 | |
| Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold Biotechnology | I2481C5 | |
| KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific | 5087862 (3252-01) | |
| KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific | DF0886-17-0 (288620) |
References
- Wood, W. B. The Nematode Caenorhabditis elegans. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).
- Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).
- Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. Genetics. 161, 1101-1112 (2002).
- Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 6, 525-523 (2007).
- Curran, S. P., Ruvkun, G. Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability. PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).
- Dillin, A. Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development. Science. 298, 2398-2401 (2002).
- Hamilton, B. A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans. Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).
- Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen. PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).
- Lee, S. S. A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity. Nat Genet. 33, 40-48 (2003).
- Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).
- Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS. Genetics. 91, 67-94 (1979).
- Emmons, S. W., Sternberg, P. W. C. ELEGANS II. Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Springs Harbor, NY. (1997).
- Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate. J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).
- Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans. Biochemistry. 21, 4089-4095 (1982).
- Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
- Steinkraus, K. A. Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 7, 394-404 (2008).
