Summary
هذا الفيديو وثائق أساليب جمع عينات من المياه الساحلية البحرية وتجهيزها لتطبيقات مختلفة بما في ذلك المصب تركيز الكتلة الحيوية ، وحمض النووي تنقية ، ووفرة الخلية ، والمغذيات وتحليل الغاز التتبع.
Abstract
هذا الفيديو وثائق أساليب جمع عينات من المياه الساحلية البحرية وتجهيزها لتطبيقات مختلفة بما في ذلك المصب تركيز الكتلة الحيوية ، وحمض النووي تنقية ، ووفرة الخلية ، والمغذيات وتحليل الغاز التتبع. لعينات مظاهرة اليوم تم جمعها من سطح التشغيل سفينتى جون ستريكلاند في مدخل Saanich. ويستخدم إطار A - ديريك ، مع ونش متعددة الأغراض ونظام الكابل ، وبالاشتراك مع Niskin أو الذهاب فلو أخذ العينات زجاجات المياه. وتستخدم أيضا الموصلية ، درجة الحرارة ، والعمق (CTD) أجهزة الاستشعار لأخذ عينات من المياه الكامنة الشامل. للحد من إطلاق الغازات ، ويتم جمع عينات الغاز تتبع الأولى. ثم ، يتم تحديد المواد الغذائية ، كيمياء المياه ، وعدد الخلايا. أخيرا ، يتم جمع المياه لترشيح الكتلة الحيوية. في الوقت المحدد ومتابعة التحصيل ليلقي احد هو ~ 1.5 ساعات في أقصى عمق 215 متر. لذا ، هناك حاجة عموما ما مجموعه 6 ساعات لإكمال سلسلة جمع الموصوفة هنا.
Protocol
الجزء 1 : جمع المياه
- يتم تعيين أعماق كل الزهر.
- لأخذ عينات الأعماق ، ونحن مصممون على أن يكون مجموع حجم جمعت ليلقي الحالي.
- هو التأكد من أن الذهاب فلو والزجاجات Niskin مفتوحة ، وأن يتم إغلاق الصمامات وصنابير.
- يتم تحميل CTD على الجزء السفلي من الخط ، وانخفاض في الماء.
- زجاجة لعمق أعمق في عينات يلقي الأول هو تحميلها على السطر بعد CTD ؛ هو التأكد من أن يتم تركيبها بشكل صحيح في خط قوس وتشديد الخناق.
- وترد على كل زجاجة الرسول (باستثناء أعمق واحد) قبل خفض.
- يتم تخفيض خط المسافة بين عمق الأول والتالي ، ثم يتم تحميل زجاجة أخرى. تجدر الإشارة إلى أنه بالنسبة للأعماق حيث يتم جمع 20L للترشيح ، يتم تحميل ما مجموعه 2 الزجاجات 12L تباعا عن 0.75 متر عن بعضها البعض.
- مرة واحدة كل الزجاجات على الخط ، وخفضت الخط إلى العمق المطلوب ويسمح لتمرير 2 دقيقة.
- ورسولا إلى أسفل وسمح لبضع دقائق لتمريرها إلى التأكد من أن جميع وثيق الزجاجات.
- وملفوف في خط ويتم تفريغ زجاجات لأنها تأتي حتى على الرفوف.
- للأعماق التي تتطلب عينات 20L عن DNA و RNA ، يتم جمع الزجاجات Niskin اثنين. يستخدم زجاجة واحدة لعينة المعلمات الكيميائية (أنظر أدناه) ، في حين ينضب الآخر في الدامجانة زجاجة كبيرة. ويتم جمع الحمض النووي الريبي على الفور من Niskin الثانية. كما يتم تصريف ما تبقى من لأول مرة في الدامجانة زجاجة كبيرة لإعطاء ~ 20L الحجم النهائي. لمحدودي القرار عينات تم تعيين 1L الوحيد للمياه المخصصة للترشيح في زجاجات معقمة Nalgene.
الجزء 2 : غاز جمع العينات
- إذا كانت هناك حاجة عينات الأكسجين ، ويتم جمعها الأول.
- وعلق قطعة من أنبوب رفيع إلى Niskin / يوضع الذهاب فلو حنفية وعلى الطرف الآخر من الأنبوب مكان في قوارير الزجاج المصل.
- يتم شطف الزجاجة المصل 3 مرات مع عينة المياه ، وملأت الى فيضان بحيث لا فقاعات الهواء موجودة.
- يتم إضافة كلوريد الزئبق 50μl (HgCl 2) لزجاجة المصل بطريقة لا أعرض عن فقاعات الهواء في العينة.
- وختم زجاجة مع سدادة مطاطية ومجعد مع غطاء الألومنيوم ، ويتم تخزينها بعد ذلك على الجليد في برودة.
الجزء 3 : مغذيات جمع العينات
- يتم شطف ألف حقنة سم مكعب مع 60 عينة مياه ، ترفق (0.2 ميكرومتر) في سطر ودفعت بعض الماء من خلال acrodisc.
- يتم شطف زجاجة المياه البولي ايثيلين مع ~ 10 مل 3 مرات تصفية (يهز زجاجة عند الشطف).
- يضاف تصفية المياه في زجاجات عينة ، على بعد حوالى ¾ الكامل.
- يتم تخزين العينة على الجليد في برودة.
الجزء 4 : الأمونيا جمع العينات
- وتشطف بالماء أنابيب العينات عينة.
- يتم تعبئة نموذج أنابيب المياه تماما مع العينة.
- يتم أخذ عينة من المياه 5ml خارج باستخدام الماصة 10ML ؛ يتم تجاهل بقية الماء في الأنابيب ويتم استبدال 5ml في الطرف الماصة في أنبوب العينة.
- يضاف 7.5ml من كاشف الأمونيوم العمل على كل أنبوب مرة واحدة وقد تم جمع عينات من كل الأعماق.
الجزء 5 : جمع العينات لتعداد الخلايا
- يتم تعبئة وصفت قبل 50 مل تحتوي على أنبوب فالكون 5.4 مل الفورمالديهايد بنسبة 37 ٪ إلى الأعلى لتركيز النهائي من 4 ٪. هو الحرص على عدم تسرب.
الجزء 6 : جمع عينات لقياس كبريتيد الهيدروجين
- يتم تعبئة وصفت قبل 50 مل أنبوب فالكون تحتوي على 20 ٪ خلات الزنك (الزنك (O 2 CCH 3) 2) إلى الأعلى. هو الحرص على عدم تسرب.
الجزء 7 : جمع الصغيرة الحجم لتركيز الكتلة الحيوية
- يتم تعبئة قوارير 1 ليتر إلى الأعلى.
الجزء 8 : مجموعة كبيرة الحجم لتركيز الكتلة الحيوية
- تمتلئ 20 لترا carboys.
الجزء 9 : النتائج الممثل
النتيجة النهائية لعينات مياه البحر نتيجة في ما يقرب من 12 عينة الأوكسجين المذاب ، وعينات الغاز 32-48 ، و 16 عينات المواد الغذائية ، وعينات الأمونيوم 32 ، 16 عينة كبريتيد الهيدروجين و 16 عينات لعدد الخلايا ، 6 20 لتر carboys ، 16 1 لتر الزجاجات و 4 Sterivex 0.22μm المرشحات التي تحتوي على الحفاظ على الكتلة الحيوية الميكروبية مع الحمض النووي الريبي لاحقا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وإجمالا ، هناك قدرا كبيرا من التحضير والتخطيط المطلوبة لهذا النوع من العينات ، وبذلك. الميزانية 2 قبل أيام من رحلة الى الحصول على شيء في النظام ، وبعد يوم واحد لتنظيف كل شيء عموما ، لا تدع المياه المالحة تتلامس مع مضخة تمعجية أو في الألومنيوم Zarges مربع تستخدم لنقل المعدات الميدانية. علاج المعدات مع احترام وانها سوف تؤدي بشكل جيد لفترة طويلة قادمة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
نود أن نشكر المؤسسة الكندية للإبداع ، ومعارف كولومبيا البريطانية وصندوق التنمية الوطنية للعلوم والهندسة مجلس البحوث (NSERC) من كندا لدعم الدراسات الجارية على المناطق المنخفضة من الأوكسجين مياه المحيطات والمناطق الساحلية المفتوحة. بالإضافة إلى ذلك ، كان مدعوما من قبل شعبة النهوض بالمرأة من الزمالات NSERC ، Killam ومؤسسة التمويل مركز تولا للتنوع وتطور الميكروبية.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| 20L Carboys | Fisher Scientific | 02-960-15 | ||
| 3/8" Tygon | Cole-Parmer | 06429-36 | ||
| Sterivex filters | Fisher Scientific | SVG010RS | ||
| Prefilter Housing Unit | AMD | 501200 | ||
| Luer Fitting | Cole-Parmer | 31507-27 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 50ml Plastic tubes | ||||
| Glass Serum Bottles | Glass Sample Collection | |||
| Septa and aluminum caps for glass serum bottles | ||||
| Hand Crimper | ||||
| 20-200ul Pipette and Tips | ||||
| Glass Tubes | Ammonium Sample Collection | |||
| 30ml Plastic Bottles | Nutrient Collection | |||
| Acrodisc Filters | EMD Millipore | |||
| 5 ml Tubes | Nitrite Sample Collection | |||
| 37% Formaldehyde | Reagent | For cell count samples | ||
| 20% Zinc Acetate | Reagent | For sulfide samples | ||
| Mercuric Chloride | Reagent | For gas samples | ||
| milliQ water | Reagent | |||
| Ammonium Working Reagent | Reagent | Borate buffer, sodium sulfite, orthophaladialdehyde | ||
| Sulfanilamide | Reagent | 5g into 450ml water and 50ml HCl | ||
| N-(1-naphthy)-ethylenediamine dihydrochloride solution | Reagent | 0.5g into 500ml water |
References
- Cline, J. D. Spectrophotometric determination of hydrogen sulfide in natural waters. Limnology & Oceanography. 14, 454-458 (1969).
- Holmes, R. M., Aminot, A., Kerouel, R., Hooker, B. A., Peterson, B. J. A simple and precise method for measuring ammonium in marine and freshwater ecosystems. Canadian Journal of fisheries and Aquatic Science. 56, 1801-1808 (1999).
