Summary
यह वीडियो दस्तावेजों तटीय समुद्री पानी के नमूने इकट्ठा करने और उन्हें बायोमास एकाग्रता, न्यूक्लिक एसिड शुद्धि, सेल बहुतायत, पोषक तत्व और ट्रेस गैस विश्लेषण सहित विभिन्न बहाव के अनुप्रयोगों के लिए प्रसंस्करण के लिए तरीकों.
Abstract
यह वीडियो दस्तावेजों तटीय समुद्री पानी के नमूने इकट्ठा करने और उन्हें बायोमास एकाग्रता, न्यूक्लिक एसिड शुद्धि, सेल बहुतायत, पोषक तत्व और ट्रेस गैस विश्लेषण सहित विभिन्न बहाव के अनुप्रयोगों के लिए प्रसंस्करण के लिए तरीकों. आज के प्रदर्शन के नमूने लिए Saanich Inlet में एचएमएस जॉन Strickland के संचालन के डेक से एकत्र किए गए थे. डेरिक चरखी बहुउद्देश्यीय और केबल प्रणाली के साथ, एक फ्रेम, Niskin के साथ संयोजन में उपयोग किया जाता है या जाओ फ़्लो पानी के नमूने की बोतलें. चालकता, तापमान, और गहराई सेंसर (CTD) भी अंतर्निहित पानी जन नमूना किया जाता है. Outgassing कम से कम करने के लिए, ट्रेस गैस के नमूने पहले एकत्र कर रहे हैं. फिर, पोषक तत्वों, पानी, रसायन शास्त्र और सेल मायने रखता है निर्धारित कर रहे हैं. अंत में, जल बायोमास निस्पंदन के लिए एकत्र कर रहे हैं. एक एकल कलाकारों के लिए सेट अप और संग्रह समय 215 मीटर की अधिकतम गहराई पर ~ 1.5 घंटे है. इसलिए, 6 घंटे के कुल आम तौर पर यहाँ वर्णित संग्रह श्रृंखला को पूरा करने की जरूरत है.
Protocol
भाग 1: जल संग्रहण
- गहराई प्रत्येक कलाकारों को सौंपा हैं.
- गहराई को जांचा जा करने के लिए और कुल वर्तमान कलाकारों के लिए एकत्र किया जा मात्रा निर्धारित कर रहे हैं.
- यह सुनिश्चित है कि जाओ फ़्लो और Niskin बोतलों खुले हैं, और उनके वाल्व और spigots बंद हो जाती हैं.
- CTD रेखा के नीचे पर भरी हुई है और पानी में कम है.
- कलाकारों में गहरी नमूना गहराई के लिए एक बोतल पहले CTD के बाद लाइन पर लोड किया जाता है, यह सुनिश्चित है कि लाइन ठीक ब्रैकेट में फिट है और शिकंजा कड़ा कर रहे हैं.
- एक दूत प्रत्येक बोतल से जुड़ा हुआ है, कम से पहले (गहरी एक को छोड़कर).
- लाइन पहली गहराई और अगले के बीच की दूरी कम है, एक और बोतल तो भरी हुई है. यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि गहराई जहां 20L निस्पंदन के लिए एकत्र कर रहे हैं के लिए कुल 2 12L बोतलों की एक 0.75 मीटर के बारे में लगातार लोड कर रहे हैं के अलावा.
- एक बार लाइन पर सभी की बोतलें हैं, लाइन वांछित गहराई कम है और 2 मिनट के पारित करने के लिए अनुमति दी जाती है.
- एक दूत नीचे भेजा है और कुछ ही मिनटों के लिए कि सभी बोतलों करीब सुनिश्चित पारित करने के लिए अनुमति दी जाती है.
- लाइन में reeled है और बोतलों के रूप में वे रैक पर आ उतार रहे हैं.
- गहराई है कि डीएनए और आरएनए के लिए 20L नमूने की आवश्यकता के लिए, दो Niskin बोतलें एकत्र कर रहे हैं. एक बोतल के लिए रासायनिक पैरामीटर (नीचे देखें) नमूना प्रयोग किया जाता है, जबकि अन्य काबोइ में सूखा है. शाही सेना तुरंत दूसरे Niskin से एकत्र की है. पहले के शेष ~ 20L अंतिम मात्रा दे काबोइ में भी सूखा है. कम संकल्प के नमूने के लिए केवल पानी की 1L अलग निस्पंदन के लिए बाँझ Nalgene बोतल में सेट कर दिया जाता है.
भाग 2: गैस नमूना संग्रह
- यदि ऑक्सीजन के नमूने की जरूरत है, वे पहले एकत्र कर रहे हैं.
- पतली टयूबिंग की एक टुकड़ा Niskin से जुड़ा हुआ है / जाओ फ़्लो पानी की कल और टयूबिंग के दूसरे छोर गिलास सीरम बोतलों में जगह रखा जाता है.
- बोतल सीरम नमूना पानी के साथ 3 बार rinsed है, और ऐसी है कि कोई हवाई बुलबुले मौजूद हैं ढेर भरा.
- 50μl पारा क्लोराइड (2 HgCl) एक तरीका है कि हवा बुलबुले के नमूने में परिचय नहीं करता में सीरम बोतल के लिए जोड़ रहे हैं .
- बोतल रबड़ डाट और एक एल्यूमीनियम टोपी के साथ crimped के साथ बंद है, और है तो एक कूलर में बर्फ पर संग्रहीत है.
भाग 3: पोषक तत्व नमूना संग्रह
- एक 60 सीसी सिरिंज नमूना पानी से rinsed है, एक (0.2 सुक्ष्ममापी) लाइन में जुड़ा हुआ है और कुछ पानी acrodisc के माध्यम से धक्का दिया है.
- एक polyethylene बोतल ~ 10 मिलीलीटर पानी फ़िल्टर के साथ 3 बार rinsed है (बोतल हिला जब rinsing).
- छनित नमूना पानी की बोतलें के लिए जोड़ा जाता है, के बारे में ¾ भरा.
- नमूना कूलर में बर्फ पर संग्रहीत है.
भाग 4: अमोनिया नमूना संग्रह
- नमूना ट्यूबों नमूना पानी से rinsed हैं.
- नमूना ट्यूबों नमूना पानी के साथ पूरी तरह से भर रहे हैं.
- नमूना पानी की 5ml एक 10ml pipet का उपयोग कर बाहर ले रहे हैं, ट्यूब में पानी के बाकी खारिज कर दिया है और pipet टिप में 5ml नमूना ट्यूब में प्रतिस्थापित कर रहे हैं.
- अमोनियम काम कर अभिकर्मक के 7.5ml प्रत्येक ट्यूब करने के लिए जोड़ा जाता है एक बार सभी गहराई से नमूने एकत्र किया गया है.
भाग 5: सेल गणन के लिए नमूना संग्रह
- 4% की एक अंतिम एकाग्रता के लिए शीर्ष पर एक पूर्व लेबल 50 मिलीलीटर फाल्कन 5.4 मिलीलीटर 37% formaldehyde युक्त ट्यूब भरा है. देखभाल करने के लिए नहीं गिर करने के लिए लिया जाता है.
भाग 6: हाइड्रोजन सल्फाइड माप के लिए नमूना संग्रह
- एक पूर्व लेबल 50 मिलीलीटर फाल्कन के 20% जिंक एसीटेट (Zn (2 हे सीसीएच 3) 2) युक्त ट्यूब शीर्ष पर भर जाता है . देखभाल करने के लिए नहीं गिर करने के लिए लिया जाता है.
भाग 7: बायोमास एकाग्रता के लिए लघु मात्रा संग्रह
- एक लीटर की बोतलों शीर्ष भर रहे हैं.
भाग 8: बायोमास एकाग्रता के लिए बड़ी मात्रा संग्रह
- 20 लीटर carboys भर रहे हैं.
भाग 9: प्रतिनिधि परिणाम
लगभग 12 भंग ऑक्सीजन के नमूने, 32-48 गैस के नमूने, 16 पोषक तत्व के नमूने, 32 अमोनियम नमूने, 16 हाइड्रोजन सल्फाइड के नमूने, कोशिकाओं की गिनती के लिए 16 नमूने, 6 20 लीटर carboys 16, 1 लीटर की बोतलों में परिणाम नमूने समुद्री जल के अंतिम परिणाम और 4 Sterivex 0.22μm माइक्रोबियल बायोमास युक्त फिल्टर शाही सेना के साथ बाद में संरक्षित है.
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Discussion
कुल मिलाकर, वहाँ नमूने के इस प्रकार के के लिए आवश्यक तैयारी और योजना का एक बड़ा सौदा है, तो बजट 2 दिनों पहले यात्रा आदेश और एक दिन में काम पाने के लिए सब कुछ सफाई के लिए बाद में. सामान्य में, न जाने नमक पानी क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप के साथ संपर्क में या एल्यूमीनियम Zarges फ़ील्ड उपकरण परिवहन के लिए इस्तेमाल किया बॉक्स में आते हैं. सम्मान के साथ उपकरणों समझो और यह अच्छी तरह से एक लंबे समय के लिए आने के लिए प्रदर्शन करेंगे.
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Acknowledgments
हम तटीय और खुले समुद्र के पानी के कम ऑक्सीजन क्षेत्रों पर चल रहे अध्ययन का समर्थन करने के लिए अभिनव, ब्रिटिश कोलंबिया नॉलेज डेवलपमेंट फंड और राष्ट्रीय विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल () NSERC के लिए कनाडा फाउंडेशन धन्यवाद देना चाहूंगा. इसके अलावा, काला कौवा NSERC, किल्लम और तुला माइक्रोबियल विविधता और विकास के लिए वित्त पोषित केंद्र नींव से फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| 20L Carboys | Fisher Scientific | 02-960-15 | ||
| 3/8" Tygon | Cole-Parmer | 06429-36 | ||
| Sterivex filters | Fisher Scientific | SVG010RS | ||
| Prefilter Housing Unit | AMD | 501200 | ||
| Luer Fitting | Cole-Parmer | 31507-27 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 50ml Plastic tubes | ||||
| Glass Serum Bottles | Glass Sample Collection | |||
| Septa and aluminum caps for glass serum bottles | ||||
| Hand Crimper | ||||
| 20-200ul Pipette and Tips | ||||
| Glass Tubes | Ammonium Sample Collection | |||
| 30ml Plastic Bottles | Nutrient Collection | |||
| Acrodisc Filters | EMD Millipore | |||
| 5 ml Tubes | Nitrite Sample Collection | |||
| 37% Formaldehyde | Reagent | For cell count samples | ||
| 20% Zinc Acetate | Reagent | For sulfide samples | ||
| Mercuric Chloride | Reagent | For gas samples | ||
| milliQ water | Reagent | |||
| Ammonium Working Reagent | Reagent | Borate buffer, sodium sulfite, orthophaladialdehyde | ||
| Sulfanilamide | Reagent | 5g into 450ml water and 50ml HCl | ||
| N-(1-naphthy)-ethylenediamine dihydrochloride solution | Reagent | 0.5g into 500ml water |
References
- Cline, J. D. Spectrophotometric determination of hydrogen sulfide in natural waters. Limnology & Oceanography. 14, 454-458 (1969).
- Holmes, R. M., Aminot, A., Kerouel, R., Hooker, B. A., Peterson, B. J. A simple and precise method for measuring ammonium in marine and freshwater ecosystems. Canadian Journal of fisheries and Aquatic Science. 56, 1801-1808 (1999).
