Summary
我们描述了罚款清扫stomatogastric从胃的美国龙虾的神经系统（
Abstract
了解神经系统的生产活动和应对环境的目标，神经学家模型系统表现出兴趣的活动和实验方法，并且可以。 stomatogastric神经系统（STNS）（美国龙虾
Protocol
龙虾的肚子开始前这个协议必须从动物中删除，并准备在同伴朱庇特的文章（比尔曼与托宾2009年）所述。下面列出的步骤大部分是根据解剖镜下进行。
我隔离的连合核
- 东方的菜，所以，前年底（唇）远离您和后部（幽门）对你。
- 确保胃固定，使菜就在于尽可能持平。
- 唇两侧，牵制食道。
- 如果有必要，重新排列放置在总剥离的其他引脚。
- 取出的皮下组织。
- 抓斗皮下组织附近的gm2/gm3肌肉，这些肌肉分离和前方向轻轻拉。
- 剪断任何连接，从底层的脂肪分离皮下组织。的使用增加了照顾围绕中央动脉，其中封闭的stomatogastric神经系统的重要组成部分。保留完好的约0.5厘米半径的stomatogastric节，位于之间的gm1b肌肉内的皮下组织。
- 切断分离皮下组织。
- 从底层组织分离的大脑。
- 确定两个大型项目由前脑的部分双边在胃的前部连合神经节连合神经。
- 让这些神经完好无损，用血管钳轻轻提起大脑和削减其他组织分开的大脑。要小心，因为你这样做，stomatogastric神经是大脑和下必须保持完整。
- 从周围的组织分离的连合核。
- 一个连合神经连合神经节之一。
- 确定离子和儿子 -这些神经必须保持不变。连合节将有许多神经，辐射出来。剪下其中的大部分（ 除离子和儿子），但留下一个额外的附加 举行的地方连合神经节，当你完成剥离的神经。
- 重复与其他连合神经节。
- 清洁离子和儿子从外侧向内侧。离开唇神经完整无缺地锚的神经系统，胃。食管神经节位于离子小号相交。您可以清除它下面抓住伪劣心室神经拉起切底。
第二部分隔离Stomatogastric节（STG）和剩余的神经。
- 从周围的组织分离的STG。
- STG坐在里面gm1b肌肉上下的gm2a，B肌肉之间运行的动脉。寻找附近的gm2a，B肌肉动脉切开结束。
- 拉和前方的动脉切开年底，揭露DVN。继续向上提拉，直到您到达其余皮下组织的水平。一旦分离，动脉可修剪的水平，倒是其余皮下组织。
- 切断位于肌皮瓣在主席台上的龙虾。
- 抬起皮下组织以上的动脉，观察动脉内脂肪以上STG的隧道。把里面的动脉你的剪刀刀片和削减它上面的肌肉。检查，你可以看到DVN，你砍，以确保您安全STG以上。继续向前切割，下面的动脉。正如您上面STG切，你将能够看到的STN从STG和俯冲而下进入肌肉产生前方。继续切割前方以上STG肌肉完全独立。
- 清除任何组织离了STN。
- 从周围组织中分离 AGN小号。 （即使你不打算从AGN记录，你将需要一个完整的神经部分牵制神经节细胞内录音。）
- 为了更好地看到 AGN小号，除去剩余的皮下组织和一层薄薄的底层肌肉。
- 就在STG后，发现一个黑暗的隧道中的脂肪和肌肉的DVN两侧。
- 坚持一个隧道内的剪刀刀片，切断上述神经组织。继续横向切割，神经，孤立。 （一对夫妇毫米足以寄希望于神经节，但如果您打算从它来记录，揭露至少5毫米的 AGN。 ）
- 由它支配的肌肉分离，切割连接 AGN 。
- 在另一侧，重复隔离其他 AGN 。
- 一旦双方AGN有被解剖，切断所有连接STG胃的肌肉和组织。
- 隔离MVN号他们是一双小神经分支LVN和横向穿越下方的脂肪双边。
- 无论是用剪刀或两个钳穿过脂肪的DVN的一侧，靠近它分支到两个 LVN第在这里，你是远离MVN小号，并不会削减他们的风险。
- 抬起的脂肪层，并确定下面的小 MVN 。这些神经运行内侧的gm1b肌肉水平横向后。
- 拆下的MVN以上的脂肪层，使神经不变，所以现在也不会成为纠缠不清。关闭胃解剖结束，您将削减其外侧端。
- 重复对方的过程中，隔离等 MVN 。
- 隔离的LVN S和后部的神经。
- 开始LVN s分支横向关闭的DVN，后续通过削减它上面的脂肪LVN。根据编制，有时整个脂肪层以上的神经被拉断。
- 继续揭示，直到在PSN分支点的LVN。
- 隔离的pyn。
- 找到的pyn，它是一种神经向后行驶超过幽门。
- 取下薄膜覆盖本地区。
- 切割幽门的一小部分，附着的 pyn 隔离 pyn 。
- 轻轻抬起幽门部分，并剪去的 pyn两侧组织，直到您到达分支连接到 PDN 。
- 隔离PDN。
- 找到PDN，它是一个向后行驶到幽门扩张肌的神经。
- 幽门扩张肌肉切一小部分，连接到PDN。
- 轻轻抬起幽门扩张肌节，剪去的PDN两侧的组织，直到你到达分支的 pyn重视。
- 隔离腹LVN，pyn和PDN连接的LVN。
- 在三角形的分支点 pyn 和 PDN连接到腹侧 LVN，隔离任何一小部分神经分支， 如 vpln，关腹 LVN 。这将是作为一个处理拉腹LVN。
- 电梯上的处理和剪去腹LVN两侧的组织，工作前的方向，直到您到达 PSN分行关闭的地步。
- 重复步骤10 - 13，在另一侧的隔离 LVN和后的神经。
- 从胃分离stomatogastric的神经系统。
- 要充分分离胃LVN，拉PSN和LVN和腹侧LVN，除为 PDN 和 pyn，削减所有的组织和神经。在另一边重复这个过程。
- 剪下每个MVN外侧端。电梯外侧端，降低神经和底层的胃组织之间的任何多余的附件。
- 前年底，削减任何多余的附件的连合核，每边切唇神经。
- 目视扫描stomatogastric神经系统的系统来识别，然后切胃组织的任何其他附件。
- 抓斗上的两个连合神经前结束，以上的连合核，剥离stomatogastric关闭胃的神经系统，将其移动到一侧的菜。当你这样做，削减任何剩余的附件，以免费的神经系统。
- 准备小Sylgard菜。
- Sylgard小碟表面彻底擦些胃组织。这将减少对Sylgard的疏水性，使生理盐水将均匀分布在菜。
- 用冷冻盐水冲洗，并填写Sylgard菜。
- 抓住两个连合神经前结束，解除神经系统的大型盘，和铺设在小碟子里，神经系统转移的准备Sylgard菜。
- 引脚小碟STNS使用minuten引脚和钨丝，切更薄引脚的组合。
- 确保编制背侧检查，劣质心室神经指向距离的Sylgard。
- 取出大脑和引脚连合神经。
- 轻轻拉动拉在PSN S的后方和侧面，寄托他们神经系统的紧张和平面。
- 删除从PDN小号幽门扩张的肌肉，和针 PDN第
- 取出幽门段pyn小号，和PIN pyn号
- 牵制任何其余孤立的神经，如唇神经，MVN s和AGN号
- Desheath的STG。
- 确保STG是平对Sylgard和横向AGN S，前STN和后DVN举行绷紧。
- 排列的灯光，使可视化的轴突内的 DVN 。
- 使用小针或细的钨针，使一个浅孔小，在周围的天柏，只是后的STG鞘。
- 拉整个DVN针，背的轴突，神经鞘创建一个横向撕裂。
- 抓住皮瓣神经鞘后的STG和向前拉删除的STG背侧鞘。
| 缩写： | |
| STNS | Stomatogastric神经系统 |
| STG | Stomatogastric节 |
| COG | 连合神经节 |
| STN | stomatogastric神经 |
| MVN | 内侧心室神经 |
| 离子 | 劣质食管神经 |
| 儿子 | 优越的食管神经 |
| AGN | 前胃神经 |
| DVN | 背心室神经 |
| LVN | 侧脑室神经 |
| PSN | 后胃神经 |
| vpln | 腹后外侧神经 |
| pyn | 幽门神经 |
| PDN | 幽门扩张神经 |
Discussion
龙虾胃的解剖和STNS已经很好地描述以前 5,6，并且已在许多研究利用这一解剖过程中的变化。我们建议变得熟悉5-7 STNS 5,8前开始解剖胃 的解剖。这种熟悉会减少意外损坏的神经和组织的风险。
为了保持健康的准备，它是一个很酷的温度保持在编制的关键。这是很容易实现交换生理盐水与4˚彗星生理盐水在冰箱中保持每30分钟一班。当沉浸在冰冷的生理盐水，隔离STNS准备是可行的多个小时。在相关Homarus钩虾的录音表现出平稳有节奏的活动从STG各地在体外 九日类似的稳健性已在 H americanus（人数OBS）。。
从连合核STG调变输入需要保存正在进行的电机模式。因此，要保持一个正常的节奏这些活动节和离子，儿子， 和 STN神经，必须保持完整。我们所描述的解剖保留了一些运动神经（含运动神经元轴突）：AGN小号的（含胃磨（GM）的轴突），MVN S（含横向胃（LG）和劣质的心脏（IC）的轴突 ） ，pyn小号（含幽门神经元（PY）轴突），PDN S（含幽门扩张器（PD）轴突）， 和 LVN S（含横向幽门（LP），内侧胃（MG），液化石油气轴突以及那些从通用汽车公司， PD和PY）。通过解剖额外的（或不同）的神经，运动神经元轴突可能被记录下来。每个运动神经元轴突的个人可单独录制，通过解剖和记录从神经支配的肌肉，这种类型的神经元项目。
本制剂可用于各种研究侧重于神经系统的功能。使用somata或轴突细胞内，夏普电极录音，或通过记录电脉冲从神经细胞外的神经元的活动可能会被记录。部分已在许多STG神经元离子通道的克隆和表达，可以从手动拉 somata 10,11测量。
Acknowledgments
我们要感谢我们的顾问，博士除夕黄鼠狼。这项研究是由国家卫生赠款NS17813前夕黄鼠狼和NS059255研究所的支持曝光T。
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter) | Tool | California Fine Wire Company | Cut into 1-2mm pieces to use as fine pins. | |
| Forceps #5 | Tool | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Minuten Pins | Tool | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Moria Spring Scissors (7mm blades) | Tool | Fine Science Tools | 15370-52 | These are the top of the line. There are more economical spring scissors available from the same company. |
| Petri Dish (100x15mm) | Tool | Fisher Scientific | 08-757-12 | Fill 2-4mm with Sylgard 182. |
| Sylgard 182 | Other | Dow Corning | 182 | |
| Pin Holder | Tool | Fine Science Tools | 26018-17 | Optional. Desheathing can be done with scissors and fine forceps alone. |
| Super fine forceps #5SF | Tool | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Tungsten Needles | Tool | Fine Science Tools | 10130-05 | Optional. Desheathing can be done with scissors or with pins cut from fine tungsten wire. |
| Dissection microscope |
References
- Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
- Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
- Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
- Bierman, H. S., Tobin, A. E. Gross dissection of the stomach of the lobster, Homarus americanus. J Vis Exp. 27, (2009).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
- Herrick, F. H. Natural history of the American lobster. Bull. U.S. Bur. Fish. 29, 219-252 (1909).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
- Bucher, D., Taylor, A. L., Marder, E. Central pattern generating neurons simultaneously express fast and slow rhythmic activities in the stomatogastric ganglion. J. Neurophysiol. 95, 3617-3632 (2006).
- Mizrahi, A., Dickinson, P. S., Kloppenburg, P., Fénelon, V., Baro, D. J., Harris-Warrick, R. M., Meyrand, P., Simmers, J. Long-term maintenance of channel distribution in a central pattern generator neuron by neuromodulatory inputs revealed by decentralization in organ culture. J. Neurosci. 21, 7331-7339 (2001).
- Schulz, D. J., Goaillard, J. M., Marder, E. Variable channel expression in identified single and electrically coupled neurons in different animals. Nat. Neurosci. 9, 356-362 (2006).
- Schulz, D. J., Goaillard, J. M., Marder, E. E. Quantitative expression profiling of identified neurons reveals cell-specific constraints on highly variable levels of gene expression. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 13187-13191 (2007).
