Summary
هذا الفيديو يبين كيف للحث على تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني (AAA) في الفئران عن طريق التسريب داخل اللمعة عابر إيلاستاز البنكرياس الخنازير في الجزء infrarenal من الشريان الأورطي البطني. نموذج لديه القدرة على رؤية واسعة إضافة إلى البيولوجيا المرضية من AAA نظرا لظهور العديد من الفئران المعدلة وراثيا خروج المغلوب الجينات.
Abstract
التسريب داخل اللمعة عابر إيلاستاز البنكرياس الخنازير في الجزء infrarenal من الشريان الأورطي البطني هو النموذج الحيواني الأكثر استخداما على نطاق واسع من الأبهر البطني (AAA) منذ ذلك الحين وصفت لأول مرة في الفئران عن طريق Anidjar والزملاء ، واستند (1) الأساس المنطقي لتنميتها على طبيعة متقطعة من الإيلاستين التي لوحظت في AAAS. وقد تم تعديل هذا النموذج الفئران لانتاج AAAS في المنطقة الأبهر infrarenal من الفئران. (2) نموذج لديه القدرة على رؤية واسعة إضافة إلى البيولوجيا المرضية من AAA نظرا لظهور العديد من الفئران المعدلة وراثيا خروج المغلوب الجينات. وعلاوة على ذلك ، بل هو منصة قابلة للاختبار وكلاء العلاجية المحتملة لAAA. في هذا الفيديو ، ونحن لشرح إجراءات ضخ إيلاستاز AAA المستخدمة في المختبر لدينا.
يتم تخدير الفئران باستخدام 2.5 ٪ isoflurane ، ويتم تنفيذ عملية فتح البطن تحت ظروف معقمة. وaortais البطن المعزولة بمساعدة من stereomicroscope التشغيل (لايكا). بعد وضع الحروف المركبة مؤقتة حول الشريان الأورطي القريبة والبعيدة ، يتم إنشاء بضع الأبهر في التشعب مع غيض من إبرة عيار 30. وقدم قطعة للحرارة مدبب من أنابيب البولي اثيلين PE - 10 خلال بضع الأبهر والمضمون. هو perfused لاحقا لمعة الأبهر 5-15 دقائق في 100 ملم زئبق مع المياه المالحة التي تحتوي على نوع الأول الخنزيري إيلاستاز البنكرياس (4.5 U / مل ؛ سيغما كيميكال). بعد إزالة القسطرة التروية ، يتم إصلاح بضع الأبهر دون انقباض في التجويف.
Protocol
- الفئران هي تخدير مع استنشاق isoflurane L. / 2.0 - 3.0ml
- وحلق البطن و تنظيفها بالكحول وbetadine.
- يتم وضع الماوس مستلق على الحقل المنطوق.
- يتم ارتداء قفازات معقمة من قبل الجراح ، وجرى تعقيم الأدوات المستخدمة معقمة مع حبة الساخنة.
- يتم إجراء شق البطن طويلة خط الوسط. وتراجع محتويات البطن خارج البطن مع شاش معقم لفضح الشريان الأورطي البطني.
- يتم عزل الشريان الأورطي البطني من مستوى الوريد الكلوي الأيسر إلى التشعب.
- يتعرض لها فروع الشريان الأورطي في البطن وligated مع 10-0 الغرز. و تربط جميع فروع داخل الأبهر 1.0cm من التشعب.
- توضع الأربطة الحريرية 6.0 مؤقتة حول أجزاء الدانية والقاصية من الشريان الأورطي
- يتم إنشاء بضع الأبهر في التشعب مع إبرة قياس 30.
- هو عرض للحرارة أنابيب البولي ايثيلين مدبب (PE - 10) خلال بضع الأبهر والمضمون مع ربطة عنق.
- باستخدام كيس معلق المالحة في ذروة من 136 سم الى 100 مم زئبق معايرة ، يتم تعبئة الأبهر مع المياه المالحة التي تحتوي على 4.5 U / مل نوع البنكرياس الخنزيري إيلاستاز أنا. الأورطى يتوسع عادة إلى 150-170 ٪ من حجمه الأصلي خلال نضح إيلاستاز 5-15 دقيقة.
- ثم تتم إزالة القسطرة ونضح بضع الأبهر مغلقة مع خياطة 10-0 لتجنب انقباض.
- بعد إغلاق بضع الأبهر ، تتم إزالة ربطة القاصي.
- إذا كان هناك نزيف ضئيلة أو معدومة من بضع الأبهر إصلاحه ، يتم إزالة ربطة القريبة. توسيع الشريان الأورطي يملأ مع دم على الفور.
- يتم إرجاع الأمعاء إلى البطن ، ويتم إغلاق الجرح في طبقتين مع خاط النايلون / البولي بروبلين 6-0.
- يتم وضع قطرات Bupivicaime 0.25 ٪ (appx قطرة واحدة لكل سنتيمتر من حجم الجرح) على الجرح وجرعة واحدة من Caprofen (5mg/kg) وتعطى تحت الجلد.
- يتم وضع الماوس على المنطقة الدافئة ويسترد عادة في غضون 15 دقيقة.
الشكل 1. النتيجة ممثل إيلاستاز يسببها AAA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقد لاحظت دراسات سابقة هامة الكثير الكثير إلى التباين في التنمية من مختلف التحضيرات AAA إيلاستاز التجاري 3. وبالتالي ، فمن الأهمية بمكان رصد الكثير الإنتاج ، فضلا عن أن جماعات المراقبة المناسبة بغية توثيق القدرة على إعداد للحث على AAAS.
ومن المثير للاهتمام ، وقابلية للتنمية AAA في هذا النموذج يعتمد على سلالة تستخدم الماوس 3. الماوس المستخدمة في الفيديو الحالي هو من سلالة C57Bl / 6 الذي وضع ثابت من AAA باستخدام بروتوكول المحددة. ويمكن تعديل تركيز إيلاستاز و / أو الوقت لاستيعاب الحضانة السلالات الأخرى.
على الرغم من أن تقنية إنشاء AAA مع إيلاستاز في الفئران تشكل تحديا تقنيا ، وهو أسلوب مهم لدراسة الآليات الجزيئية الكامنة وراء تشكيل AAA والتنمية. وقد أدت الممارسات والتقنية تعديلات في نسبة النجاح أكثر من 90 ٪ في المختبر لدينا. ونحن نعتقد أن الفيديو والنص المصاحب سيساعد في خفض منحنى التعلم للمختبرات التي ترغب في استخدام هذه التقنية.
المشاكل
- وينبغي ligated فروع الشريان الأورطي البطني مع 10-0 خياطة الجروح ، ومنع النزيف أثناء العملية والتوسع غير كافية خلال التسريب إيلاستاز بسبب تسريب المعلومات.
- فمن المهم أن يكون هناك مجال تشغيل واضحة وتوسعية. ولذلك ، استخدم بدلا من خياطة 6-0 المشابك لانسداد الشريان الأورطي مؤقتا
- يجب أن يتم مسح تجويف الشريان الأورطي البطني مع محلول ملحي لمنع تجلط الدم بعد العملية.
- من المهم أن غيض من الحرارة مدبب PE - 10 أنبوب ينبغي على نحو سلس من أجل تجنب خدش الطبقة البطانية عند إدراجها.
- وينبغي تجنب فقاعات الهواء داخل الأوعية عندما غرس إيلاستاز وكذلك عند إغلاق بضع الأبهر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل منحة SCCOR "مرض AAA : آليات ، الطبقات ، والمعالجة" (P50 HL083800 - 03) من المعاهد الوطنية للصحة
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Type I porcine pancreatic elastase | Reagent | Sigma-Aldrich | E1250 | |
| polyethylene tubing (PE-10) | BD Biosciences | 427400 | ||
| CHANGE-A-TIP | Bovie Medical Corporation | 18010-00 (FST) | cautery knife | |
| LEICA MZ6 | Leica Microsystems | stereomicroscope | ||
| LEICA DFC290HD | Leica Microsystems | USB camera | ||
| Image Pro Express ver. 6.0 | Media Cybernetics Inc. | software |
References
- Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
- Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
- Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).
