Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Создание мышей экспериментальной аневризмы брюшной аорты с эластазы

doi: 10.3791/1280 Published: July 23, 2009

Summary

Это видео показывает, как вызвать аневризмы брюшной аорты (ААА) у мышей с помощью переходных внутрипросветный вливание эластазы поджелудочной железы свиньи в инфраренального сегмент брюшной аорты. Модель имеет возможность добавлять широкий понимание патобиологии AAA в связи с появлением многочисленных трансгенных мышей и гена нокаутом.

Abstract

Переходные внутрипросветный вливание эластазы поджелудочной железы свиньи в инфраренального сегмент брюшной аорты является наиболее широко используемой модели животных аневризмы брюшной аорты (ААА) с тех пор как он был впервые описан у крыс Anidjar и коллег. 1 обоснованием для его развития была основана по нарушается характер эластина наблюдается в Зенитных орудий. Это крыса модель была модифицирована для производства Зенитных орудий в инфраренального области аорты мышей. 2 модели имеет возможность добавить широкую понимание патобиологии AAA в связи с появлением многочисленных трансгенных мышей и гена нокаутом. Более того, жизнеспособную платформу для тестирования потенциальных терапевтических агентов для AAA. В этом видео, мы демонстрируем эластазы инфузии AAA процедура, используемая в нашей лаборатории.

Мыши наркозом использованием 2,5% изофлуран и лапаротомии осуществляется в стерильных условиях. Брюшной aortais изолированы с помощью операционной стереомикроскопа (Leica). После размещения временных лигатуры вокруг проксимальных и дистальных аорты, aortotomy создается в области бифуркации с кончика 30-иглы. Тепло-конический сегмент ПЭ-10 полиэтиленовые трубы вводится через aortotomy и закреплены. Просвет аорты впоследствии перфузии в течение 5-15 минут при 100 мм рт физиологическим раствором содержащего типа я свиной поджелудочной эластазы (4,5 Ед / мл, Sigma Chemical Co.) После удаления катетера перфузии, aortotomy отремонтирован без сужения просвета.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here
  1. Мыши анестезии ингаляционными изофлуран 2,0-3.0ml / L.
  2. Живот побрился и удалено с алкоголем и бетадин.
  3. Мышь находится на спине на операционном поле.
  4. Стерильные перчатки носят хирургом, и инструменты, используемые были стерилизованы горячим стерилизатор шарик.
  5. Долго средней линии брюшной надрез. Брюшной содержимое убираются вне брюшной полости стерильной марли, чтобы разоблачить брюшной аорты.
  6. Брюшной аорты изолирован от уровня левой почечной вены до развилки.
  7. Ветвей брюшной аорты подвержены и лигировали с 10-0 швов. Все аорты ветвях в пределах 1,0 см от бифуркации лигировали.
  8. Временные 6,0 лигатуры шелка расположены вокруг проксимальных и дистальных отделов аорты
  9. Aortotomy создается в области бифуркации с 30-иглы.
  10. Тепло-конических полиэтиленовых труб (ПЭ-10) вводится через aortotomy и закрепляется с галстуком.
  11. Использование солевых мешок висел на высоте 136 см для калибровки 100 мм рт.ст., аорты заполнен солевым содержащий 4,5 Ед / мл Тип I свиной поджелудочной эластазы. Аорты обычно расширяется до 150-170% от своего первоначального диаметра в течение 5-15 минут эластазы перфузии.
  12. Перфузии катетер удаляется и aortotomy закрыта с 10-0 шва, чтобы избежать сужения.
  13. После aortotomy закрыт, дистальной лигатуры удаляется.
  14. Если нет или почти нет кровотечения из отремонтированных aortotomy, проксимальных лигатуры удаляется. Расширены аорты наполняется кровью немедленно.
  15. Кишечник возвращаются в брюшную полость, и рана закрыта в два слоя с 6-0 нейлон / полипропилен шва.
  16. 0,25% Bupivicaime капель (appx одной капле за каждый сантиметр разрез размером) размещены на раны и одну дозу Caprofen (5mg/kg) дается подкожно.
  17. Мыши помещается на теплое место и обычно восстанавливается в течение 15 минут.

Рисунок 1
Рисунок 1. Представителю Результат эластазы индуцированных ААА.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Предыдущие исследования отметили значительные партии к много изменений в ААА развития различных коммерческих препаратов эластазы 3. Таким образом, очень важно следить партий изделий, а также иметь соответствующие контрольные группы для того, чтобы документ способность подготовку, чтобы побудить Зенитных орудий.

Интересно, что восприимчивость к AAA развития в этой модели зависит от мыши штамма использовали 3. Мыши, используемые в текущий видео из C57Bl / 6 штамм, который имеет последовательное развитие AAA использованием изложенных протокола. Концентрация эластазы и / или времени инкубации может быть отрегулирована для размещения других штаммов.

Хотя Техника создания AAA с эластазы у мышей является технически сложной задачей, это важный метод для изучения основных молекулярных механизмов AAA становления и развития. Практика и технические изменения привели к успеху составляет более 90% в нашей лаборатории. Мы считаем, что видео и сопроводительный текст поможет сократить время обучения для лабораторий, которые хотели бы использовать эту технику.

Поиск неисправностей

  1. Ветвей брюшной аорты следует лигировали с 10-0 швов, предотвращая кровотечение во время операции и недостаточной расширения при эластазы вливания из-за протечки.
  2. Важно иметь четкую и экспансивный операционной области. Таким образом, использование 6-0 шва вместо зажимов временно закрывают аорты
  3. Просвет брюшной аорты должна быть очищена с физиологическим раствором для предотвращения тромбоза после операции.
  4. Важно, чтобы кончик тепла конические ПЭ-10 трубка должна быть гладкой, чтобы избежать царапин эндотелиальных слой при вставке.
  5. Пузырьки воздуха внутри сосудов следует избегать вливания эластазы, а также при aortotomy закрыт.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Работа выполнена при поддержке гранта SCCOR "AAA заболевания: механизмы, стратификация, и лечение» (P50 HL083800-03) из Национального института здоровья

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Type I porcine pancreatic elastase Reagent Sigma-Aldrich E1250
polyethylene tubing (PE-10) BD Biosciences 427400
CHANGE-A-TIP Bovie Medical Corporation 18010-00 (FST) cautery knife
LEICA MZ6 Leica Microsystems stereomicroscope
LEICA DFC290HD Leica Microsystems USB camera
Image Pro Express ver. 6.0 Media Cybernetics Inc. software

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82, (3), 973-973 (1990).
  2. Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105, (11), 1641-1641 (2000).
  3. Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33, (6), 1255-1255 (2001).
Создание мышей экспериментальной аневризмы брюшной аорты с эластазы
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Azuma, J., Asagami, T., Dalman, R., Tsao, P. S. Creation of Murine Experimental Abdominal Aortic Aneurysms with Elastase . J. Vis. Exp. (29), e1280, doi:10.3791/1280 (2009).More

Azuma, J., Asagami, T., Dalman, R., Tsao, P. S. Creation of Murine Experimental Abdominal Aortic Aneurysms with Elastase . J. Vis. Exp. (29), e1280, doi:10.3791/1280 (2009).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter