Summary
וידאו זה מראה כיצד לגרום מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) בעכברים באמצעות עירוי intraluminal חולף של elastase הלבלב חזירי לתוך מגזר infrarenal של אבי העורקים בבטן. המודל יש את היכולת להוסיף תובנות לתוך pathobiology רחב של AAA בשל הופעתה של מהונדס רבים נוקאאוט בעכברים גנים.
Abstract
עירוי intraluminal חלוף של elastase הלבלב חזירי לתוך מגזר infrarenal של אבי העורקים בבטן הוא מודל החיה הנפוצה ביותר של מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) מאז זה תוארה לראשונה על ידי Anidjar ועמיתיו בחולדות. 1 הרציונל הפיתוח שלה התבססה על אופי שיבשו של ואלסטין שנצפתה AAAS. מודל זה עכברוש שונתה כדי לייצר AAAS באזור infrarenal אבי העורקים של עכברים. 2 מודל יש את היכולת להוסיף תובנה רחבה לתוך pathobiology של AAA בשל הופעתה של מהונדס רבים נוקאאוט בעכברים גנים. יתר על כן, היא פלטפורמה מעשית לבדוק סוכני טיפולית פוטנציאל AAA. בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את הליך עירוי elastase AAA בשימוש במעבדה שלנו.
עכברים מורדמים באמצעות isoflurane 2.5%, ו laparotomy מבוצעת בתנאים סטריליים. Aortais בטן מבודד בסיוע stereomicroscope ההפעלה (לייקה). לאחר הצבת חיבורי אותיות זמני סביב האאורטה הפרוקסימלית ומ דיסטלי, aortotomy נוצר ב הסתעפות עם קצה מחט 30-מד. קטע חום מחודדות של צינורות פוליאתילן PE-10 הוא הציג דרך aortotomy ומאובטחת. לומן העורקים היא perfused לאחר מכן ב 100 מ"מ כספית עם סוג המכיל תמיסת מלח אני elastase חזירי הלבלב (4.5 U / mL: Sigma כימית ושות') במשך 5-15 דקות. לאחר הסרת הקטטר זלוף, aortotomy הוא תוקן ללא התכווצות של לומן.
Protocol
- עכברים מורדמים עם בשאיפה isoflurane 2.0-3.0ml / ל '
- הבטן היא מגולח מצוחצח עם אלכוהול בבטאדין.
- העכבר מונח פרקדן על שדה הניתוח.
- כפפות סטריליות שחוקים על ידי המנתח, ואת הכלים המשמשים כבר מעוקר עם מעקר חרוז חם.
- חתך ארוך בבטן קו האמצע הוא עשה. תכולת הבטן הם חזר בו מחוץ הבטן עם גזה סטרילית לחשוף את אבי העורקים בבטן.
- אבי העורקים בבטן מבודד ברמה של עורק הכליה משמאל הסתעפות.
- הסניפים של אבי העורקים בבטן חשופים ligated עם 10-0 התפרים. סניפים כל אבי העורקים בתוך 1.0cm של הסתעפות הם ligated.
- זמניים 6.0 חיבורי אותיות משי ממוקמים סביב חלקים הפרוקסימלית ומ הדיסטלי של האאורטה
- Aortotomy נוצר ב הסתעפות עם מחט 30-מד.
- חום קוני צינורות פוליאתילן (PE-10) הוא הציג דרך aortotomy ומאובטחת עם עניבה.
- בעזרת שקית מלח תלוי בגובה של 136 ס"מ לכייל 100 מ"מ כספית, אבי העורקים מתמלא מלוחים המכיל 4.5 U / mL אני סוג elastase חזירי הלבלב. אבי העורקים, בדרך כלל, מתרחב אל% 150-170 בקוטר המקורי במהלך זלוף elastase 5-15 דקות.
- קטטר זלוף מוסר אז aortotomy נסגר עם תפר 10-0 כדי למנוע התכווצות.
- לאחר aortotomy סגור, המיתר דיסטלי מוסר.
- אם יש דימום מועט או ללא מ aortotomy המתוקן, ליגטורה הפרוקסימלית מוסר. אבי העורקים התרחב מתמלא בדם באופן מיידי.
- המעיים הם חזרו הבטן, ואת הפצע סגור בשתי שכבות ניילון עם תפר / פוליפרופילן 6-0.
- 0.25% Bupivicaime טיפות (appx טיפה אחת עבור כל סנטימטר של גודל החתך) ממוקמות על הפצע מנה אחת של Caprofen (5mg/kg) ניתנת תת עורי.
- העכבר ממוקם על שטח חמים בדרך כלל מתאוששת בתוך 15 דקות.
באיור 1. תוצאות נציג Elastase המושרה AAA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מחקרים קודמים ציין וריאציה משמעותית הרבה-to-הרבה בפיתוח AAA מ שונה ההכנות elastase מסחרי 3. לכן, חשוב לעקוב אחר המון הייצור וכן יש קבוצות ביקורת מתאימות כדי לתעד את היכולת של התכשיר כדי לגרום AAAS.
מעניין, הרגישות פיתוח AAA במודל זה תלוי המתח העכבר משמש 3. העכבר משמש הווידאו הנוכחי של זן C57Bl / 6 אשר יש התפתחות עקבית של AAA באמצעות פרוטוקול התווה. ריכוז Elastase ו / או זמן הדגירה יכול להיות מותאם כדי להתאים זנים אחרים.
למרות הטכניקה של יצירת AAA עם elastase בעכברים הוא מאתגר מבחינה טכנית, היא טכניקה חשובה לחקר המנגנונים המולקולריים שבבסיס של היווצרות פיתוח AAA ו. עיסוק שינויים טכניים גרמו שיעור הצלחה של מעל 90% במעבדה שלנו. אנו מאמינים כי הווידאו והטקסט המלווה יסייע להפחית את עקומת הלמידה עבור מעבדות המבקשים להשתמש בטכניקה זו.
פתרון בעיות
- הסניפים של אבי העורקים בבטן יש ligated עם 10-0 התפרים, מניעת דימום במהלך המבצע והרחבת מספיק במהלך עירוי elastase בגלל דולף.
- חשוב יש שדה ההפעלה ברורה ורחבה. לכן, להשתמש 6-0 תפר במקום מלחציים זמנית לחסום את אבי העורקים
- לומן של אבי העורקים בבטן יש לפנות עם תמיסת מלח כדי למנוע קרישי דם לאחר הניתוח.
- חשוב לחמם את קצה הצינור קוני PE-10 צריך להיות חלק כדי להימנע מגרד את שכבת האנדותל כאשר מוכנס.
- בועות האוויר בתוך הכלים יש להימנע כאשר יציקת elastase וכן כאשר aortotomy סגור.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה המענק SCCOR "מחלת AAA: מנגנונים, ריבוד, וטיפול" (HL083800 P50-03) מן המכון הלאומי לבריאות
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Type I porcine pancreatic elastase | Reagent | Sigma-Aldrich | E1250 | |
| polyethylene tubing (PE-10) | BD Biosciences | 427400 | ||
| CHANGE-A-TIP | Bovie Medical Corporation | 18010-00 (FST) | cautery knife | |
| LEICA MZ6 | Leica Microsystems | stereomicroscope | ||
| LEICA DFC290HD | Leica Microsystems | USB camera | ||
| Image Pro Express ver. 6.0 | Media Cybernetics Inc. | software |
References
- Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
- Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
- Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).
