Summary
该视频演示了如何通过瞬态下腹段腹主动脉腔内灌注到猪胰弹性蛋白酶诱导小鼠腹主动脉瘤（AAA）的。该模型已添加到AAA的病理学由于出现了大量的转基因和基因敲除小鼠的广泛的洞察力的能力。
Abstract
瞬态猪胰弹性蛋白酶的腔内注入到下腹段腹主动脉腹主动脉瘤（AAA）是最广泛使用的动物模型，自从它第一次描述Anidjar和他的同事在大鼠1的理由是其发展的基于打乱弹性蛋白的性质，观察在美国科学促进会。此大鼠模型已被修改，在小鼠产生下腹主动脉地区的美国科学促进会。2模型的能力添加到病理学，由于出现了大量的转基因和基因敲除小鼠的AAA广泛的洞察力。此外，它是一个可行的的平台来测试潜在的治疗药物为AAA。在这个视频中，我们展示在我们的实验室中使用的弹性蛋白酶输液AAA过程。
小鼠是使用2.5％异氟醚麻醉和开腹手术是在无菌条件下进行。腹部aortais独立经营体视显微镜（莱卡）的援助。在近端和远端的主动脉周围放置临时连字，一个aortotomy是建立在与30号针头的针尖分叉。一个PE - 10聚乙烯管材热锥形段是通过aortotomy介绍和担保。主动脉管腔随后灌注盐水含I型猪胰弹性蛋白酶（4.5 U /毫升; Sigma公司）在100毫米汞柱为5-15分钟。灌注导管取出后，aortotomy是无管腔收缩修复。
Protocol
- 小鼠麻醉与吸入异氟醚2.03.0毫升/ L。
- 腹部是剃光，用酒精和优碘擦洗。
- 鼠标放在仰卧于手术视野。
- 无菌手套戴由外科医生，并已与热珠灭菌消毒的法器。
- 是一个长期的中线腹部切口。外面用无菌纱布，露出腹主动脉腹部缩回腹腔内容。
- 腹主动脉是孤立的左肾静脉水平分叉。
- 外露，用10-0缝线结扎腹主动脉的分支。结扎主动脉分叉1.0厘米内的所有分行。
- 临时6.0丝连字周围放置主动脉近端和远端的部分
- 一个aortotomy是创建在30号针头的分叉。
- 热圆锥聚乙烯管材（PE - 10）是通过aortotomy引入和领带担保。
- 使用盐水袋挂在136厘米校准100毫米汞柱的高度，主动脉与含有4.5 U / mL的I型猪胰弹性蛋白酶的生理盐水填充。通常的主动脉扩张到150-170％，其原直径在5-15分钟的弹性蛋白酶灌注。
- 灌注导管，然后取出aortotomy 10-0缝合，以避免收缩封闭。
- aortotomy关闭后，远端结扎被删除。
- 如果有出血很少或没有修复aortotomy，近端结扎被删除。扩大主动脉立即与血液填充。
- 肠子都返回到腹部，用6-0尼龙/聚丙烯缝合伤口是在两层封闭。
- （为5mg/kg）皮下注射0.25％Bupivicaime滴（APPX每厘米的切口大小的一滴）放置在伤口和Caprofen一剂。
- 鼠标放在一个温暖的地方，通常在15分钟内恢复。
图1。弹性蛋白酶诱导AAA代表性的结果。
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Discussion
以前的研究已经指出了显着的变化很多AAA级发展到很多不同的商业弹性蛋白酶制剂3。因此，至关重要的是，监察批量生产以及有相应的对照组，以文件的编制能力，促使美国科学促进会。
有趣的是，在此模型中，AAA级发展的易感性是依赖于使用3的小鼠品系。在当前的视频用鼠标AAA一致的开发利用概述协议C57BL / 6株。弹性蛋白酶浓度和/或培养时间可能会有所调整，以适应其他菌株。
创建AAA级弹性蛋白酶在小鼠的技术虽然在技术上是具有挑战性，这是一个AAA的形成和发展的分子机制研究的重要技术。实践和技术改进，导致在我们的实验室在90％以上的成功率。我们相信，视频和附文，将有助于降低学习曲线为希望使用这项技术的实验室。
故障排除
- 应结扎腹主动脉的分支，用10-0缝线，防止在操作过程中的出血和弹性蛋白酶灌注期间不足的扩张，因为泄露。
- 重要的是有一个清晰和广阔的经营领域。因此，使用6-0缝合的夹子暂时闭塞主动脉
- 腹主动脉管腔应与盐溶液，以防止手术后的血栓清除。
- 这一点很重要，应光滑，以避免刮伤内皮细胞层，当插入热锥PE - 10管的尖端。
- 时注入弹性蛋白酶以及aortotomy是关闭时，应避免气泡内的船只。
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Acknowledgments
这项工作是支持SCCOR授予“AAA级疾病：机制，分层，与治疗”，由美国国立卫生研究院（P50 HL083800 - 03）
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Type I porcine pancreatic elastase | Reagent | Sigma-Aldrich | E1250 | |
| polyethylene tubing (PE-10) | BD Biosciences | 427400 | ||
| CHANGE-A-TIP | Bovie Medical Corporation | 18010-00 (FST) | cautery knife | |
| LEICA MZ6 | Leica Microsystems | stereomicroscope | ||
| LEICA DFC290HD | Leica Microsystems | USB camera | ||
| Image Pro Express ver. 6.0 | Media Cybernetics Inc. | software |
References
- Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
- Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
- Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).
