Murine प्रायोगिक इलास्टेज साथ उदर महाधमनी aneurysms का निर्माण

Summary

इस वीडियो से पता चलता है कैसे उदर महाधमनी के infrarenal खंड में क्षणिक सुअर अग्नाशय इलास्टेज के intraluminal जलसेक के माध्यम से चूहों में उत्पन्न करने के लिए उदर महाधमनी aneurysms (एएए). मॉडल एएए के कई ट्रांसजेनिक और जीन पीटा चूहों के उद्भव के कारण pathobiology में व्यापक अंतर्दृष्टि जोड़ने की क्षमता है.

Abstract

क्षणिक सुअर अग्नाशय इलास्टेज के intraluminal जलसेक उदर महाधमनी के infrarenal खंड में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया उदर महाधमनी धमनीविस्फार (एएए) के पशु मॉडल कभी के बाद से यह पहली बार Anidjar और उनके सहयोगियों द्वारा चूहों में वर्णित ^किया गया था 1 इसके विकास के लिए तर्क के आधार पर किया गया था. elastin के बाधित प्रकृति पर AAAS में मनाया. यह चूहे मॉडल चूहों के infrarenal महाधमनी क्षेत्र में AAAS उत्पादन करने के लिए संशोधित ^किया गया है 2 मॉडल कई ट्रांसजेनिक और जीन पीटा चूहों के उद्भव के कारण एएए के pathobiology में व्यापक अंतर्दृष्टि जोड़ने की क्षमता है. इसके अलावा, यह एक व्यवहार्य एएए के लिए संभावित चिकित्सात्मक एजेंट परीक्षण मंच है. इस वीडियो में, हम इलास्टेज जलसेक एएए हमारी प्रयोगशाला में इस्तेमाल किया प्रक्रिया प्रदर्शित करता है.

चूहे 2.5 isoflurane% का उपयोग anesthetized हैं, और एक laparotomy बाँझ शर्तों के तहत किया जाता है. पेट aortais एक ऑपरेटिंग stereomicroscope (Leica) की सहायता से अलग है. प्रॉक्सिमल और डिस्टल महाधमनी के आसपास अस्थायी ligatures रखने के बाद, एक aortotomy एक 30 गेज सुई की नोक के साथ विभाजन पर बनाया है. पीई 10-पॉलीथीन टयूबिंग की एक गर्मी पतला खंड aortotomy के माध्यम से शुरू की है और सुरक्षित है. महाधमनी लुमेन बाद में खारा युक्त प्रकार मैं सुअर अग्नाशय इलास्टेज (; सिग्मा रासायनिक कं 4.5 यू / एमएल) के साथ 100 मिमी Hg पर 5-15 मिनट के लिए perfused. छिड़काव कैथेटर को हटाने के बाद, aortotomy लुमेन के कसना बिना मरम्मत की है.

Protocol

1. चूहे साँस isoflurane 2.0 3.0ml / एल के साथ anesthetized हैं
2. पेट मुंडा और शराब और betadine साथ झाड़ी है.
3. माउस लापरवाह सहकारी क्षेत्र पर रखा गया है.
4. बाँझ दस्ताने सर्जन द्वारा पहना रहे हैं, और गर्म मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ के साथ इस्तेमाल किया उपकरणों निष्फल गया है.
5. एक लंबे midline पेट चीरा किया जाता है. पेट सामग्री बाँझ पेट महाधमनी बेनकाब धुंध के साथ पेट के बाहर से मुकर रहे हैं.
6. पेट महाधमनी बाएँ गुर्दे की नस के स्तर से विभाजन के लिए अलग है.
7. पेट महाधमनी की शाखाओं को उजागर कर रहे हैं और 10-0 sutures के साथ ligated. विभाजन की 1.0cm के भीतर सभी महाधमनी शाखाओं ligated हैं.
8. अस्थाई 6.0 रेशम ligatures महाधमनी के प्रॉक्सिमल और बाहर का भाग के आसपास रखा जाता है
9. Aortotomy एक 30 गेज सुई के साथ विभाजन पर बनाया है.
10. हीट पतला पॉलीथीन टयूबिंग aortotomy (पीई 10) के माध्यम से शुरू की है और एक टाई के साथ सुरक्षित है.
11. एक नमकीन की थैली का उपयोग 136 100 mmHg जांचना सेमी की ऊंचाई पर लटका, महाधमनी यू 4.5 / एमएल प्रकार मैं सुअर अग्नाशय इलास्टेज युक्त नमक के साथ भरा है. महाधमनी आमतौर पर 5-15 मिनट इलास्टेज छिड़काव के दौरान अपनी मूल व्यास के 150-170% के लिए फैल जाती है.
12. छिड़काव कैथेटर और फिर हटा दिया जाता है aortotomy एक 10-0 सीवन कसना से बचने के साथ बंद.
13. Aortotomy के बाद बंद कर दिया है, बाहर का संयुक्ताक्षर निकाल दिया जाता है.
14. अगर वहाँ मरम्मत aortotomy से कम या कोई खून बह रहा है, प्रॉक्सिमल संयुक्ताक्षर निकाल दिया जाता है. विस्तार महाधमनी तुरंत खून से भरता है.
15. आंतों पेट को लौट रहे हैं, और घाव दो परतों में 6-0 सीवन / नायलॉन polypropylene के साथ बंद कर दिया है.
16. 0.25% Bupivicaime बूँदें (appx चीरा आकार के प्रत्येक सेंटीमीटर के लिए एक बूंद) घाव और Caprofen की एक खुराक पर रखा जाता है (5mg/kg) subcutaneously दिया जाता है.
17. माउस एक गर्म क्षेत्र पर रखा है और आम तौर पर 15 मिनट के भीतर ठीक है.

चित्रा 1 इलास्टेज प्रेरित एएए के प्रतिनिधि नतीजे.

Discussion

पिछले अध्ययनों से अलग वाणिज्यिक इलास्टेज तैयारी ³ से महत्वपूर्ण बहुत बहुत एएए विकास में भिन्नता उल्लेख किया है. इस प्रकार, यह उत्पादन बहुत की निगरानी के रूप में के रूप में अच्छी तरह के लिए उपयुक्त नियंत्रण समूहों के क्रम में तैयार करने की क्षमता को AAAS प्रेरित दस्तावेज़ महत्वपूर्ण है.

दिलचस्प है, इस मॉडल में एएए विकास के लिए संवेदनशीलता ³ इस्तेमाल किया माउस तनाव पर निर्भर है. मौजूदा वीडियो में इस्तेमाल किया माउस C57BL 6 / तनाव है जो एएए के अनुरूप विकास उल्लिखित प्रोटोकॉल का उपयोग है. इलास्टेज एकाग्रता और / या ऊष्मायन समय के अन्य उपभेदों को समायोजित करने के लिए समायोजित किया जा सकता है.

हालांकि एएए के साथ चूहों में इलास्टेज निर्माण की तकनीक तकनीकी चुनौती दे रहा है, यह अंतर्निहित एएए गठन और विकास के आणविक तंत्र के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीक है. अभ्यास और तकनीकी संशोधन हमारी प्रयोगशाला में 90% से अधिक की एक सफलता दर में हुई है. हम मानते है कि वीडियो और पाठ के साथ मदद मिलेगी प्रयोगशालाओं कि इस तकनीक का उपयोग करने के लिए इच्छा के लिए सीखने की अवस्था को कम.

समस्या निवारण

1. पेट महाधमनी की शाखाओं 10-0 sutures के साथ ligated होना चाहिए, संचालन और लीक के कारण अपर्याप्त विस्तार इलास्टेज जलसेक के दौरान के दौरान खून बह रहा रोकने है.
2. यह महत्वपूर्ण है के लिए एक स्पष्ट और विशाल ऑपरेटिंग क्षेत्र है. इसलिए, 6-0 के बजाय सिवनी clamps का उपयोग करने के लिए अस्थायी रूप से रोक देना महाधमनी
3. उदर महाधमनी के लुमेन खारा ऑपरेशन के बाद घनास्त्रता रोकने के समाधान के साथ साफ होना चाहिए.
4. यह महत्वपूर्ण है कि पतला ट्यूब पीई 10 गर्मी की नोक चिकनी हो सकता है क्रम में जब डाला endothelial परत scratching से बचने के लिए चाहिए.
5. वाहिकाओं के अंदर वायु बुलबुले जब के रूप में के रूप में अच्छी तरह से इलास्टेज infusing जब aortotomy बंद हो गया है बचा जाना चाहिए.

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Type I porcine pancreatic elastase	Reagent	Sigma-Aldrich	E1250
polyethylene tubing (PE-10)		BD Biosciences	427400
CHANGE-A-TIP		Bovie Medical Corporation	18010-00 (FST)	cautery knife
LEICA MZ6		Leica Microsystems		stereomicroscope
LEICA DFC290HD		Leica Microsystems		USB camera
Image Pro Express ver. 6.0		Media Cybernetics Inc.		software