Skapande av murina experimentell abdominellt aortaaneurysm med Elastase

Summary

Denna video visar hur man förmå bukaortaaneurysm (AAA) i möss via övergående intraluminal infusion av svin bukspottskörteln elastas i infrarenala delen av bukaorta. Modellen har möjlighet att lägga till bred inblick i patobiologi av AAA på grund av uppkomsten av många transgena och gener möss knockout.

Abstract

Övergående intraluminal infusion av svin bukspottskörteln elastas i infrarenala segment av bukaorta är den mest använda djurmodell av bukaortaaneurysm (AAA) ända sedan den först beskrevs hos råttor av Anidjar och kollegor. ¹ Grunden för dess utveckling baseras på stört typ av elastin som observerats i AAA. Denna råtta modell har modifierats för att producera AAA i infrarenala aorta regionen möss. ² Modellen har möjlighet att lägga till bred inblick i patobiologi av AAA på grund av uppkomsten av många transgena och gener möss knockout. Dessutom är det en livskraftig plattform för att testa potentiella terapeutiska agenter för AAA. I denna video visar vi de elastas infusionen AAA förfarande som används i vårt laboratorium.

Möss är sövda med 2,5% isofluran, och en laparotomi utförs under sterila förhållanden. Buken aortais isolerade med hjälp av ett operativsystem stereomikroskop (Leica). Efter att tillfälliga ligaturer kring den proximala och distala aorta, är en aortotomy skapas på bifurkationen med spetsen på en 30-gauge-nål. En värme-koniska segment av PE-10 polyeten slangen förs genom aortotomy och säkras. Den aorta lumen därefter perfusion i 5-15 minuter vid 100 mm Hg med saltlösning som innehåller typ I svin bukspottkörteln elastas (4,5 U / mL, Sigma Chemical Co). Efter att perfusionen kateter, är aortotomy repareras utan förträngning av lumen.

Protocol

1. Möss bedövas med inhalerade isofluran 2,0-3.0ml / L.
2. Buken är rakat och skrubbas med alkohol och Betadine.
3. Musen placeras liggande på det operativa området.
4. Sterila handskar bärs av kirurgen, och de instrument som används har steriliserats med heta pärla autoklav.
5. En lång mittlinjen buksnitt görs. Buken innehållet är tillbaka utanför buken med steril gasbinda för att exponera bukaorta.
6. Den bukaorta är isolerad från nivån vänster renal ven till bifurkation.
7. Grenarna av bukaorta är utsatta och knyts ihop med 10-0 suturer. Alla aorta filialer inom 1.0cm av bifurkation är knyts ihop.
8. Tillfälliga 6,0 siden ligaturer är placerade runt om i proximala och distala delar av aorta
9. En aortotomy skapas vid bifurkationen med en 30-gauge-nål.
10. Värme-avsmalnande polyeten slang (PE-10) introduceras genom aortotomy och säkras med en slips.
11. Med hjälp av en saltlösning påse hängde på höjden av 136 cm för att kalibrera 100 mmHg, är aortan fylld med koksaltlösning som innehåller 4,5 U / ml Typ I svin bukspottkörteln elastas. Aortan dilaterar normalt till 150-170% av sin ursprungliga diameter under 5-15 minuter elastas perfusion.
12. Den perfusionen Katetern tas sedan bort och aortotomy avslutades med en 10-0 sutur för att undvika sammandragning.
13. Efter att aortotomy är stängd är den distala ligatur bort.
14. Om det finns liten eller ingen blödning från reparerade aortotomy är den proximala ligatur bort. Den utökade aorta fylls med blod omedelbart.
15. Tarmen återförs till buken, och såret är stängt i två skikt med 6-0 nylon / polypropylen sutur.
16. 0,25% Bupivicaime droppar (appx en droppe för varje centimeter av snittet storlek) placeras på såret och en dos av Caprofen (5mg/kg) ges subkutant.
17. Musen placeras på en varm yta och oftast återhämtar sig inom 15 minuter.

Figur 1. Representativt resultat av Elastase inducerad AAA.

Discussion

Tidigare studier har noterat betydande hel-till-mycket variation i AAA utveckling från olika kommersiella elastas förberedelser ^3. Därför är det viktigt att övervaka produktionen massor samt att ha lämpliga kontrollgrupper för att dokumentera förmåga att förbereda för att inducera AAA.

Intressant är känsligheten för AAA utvecklingen i denna modell beror på musstam använt ^3. Musen används i den aktuella videon är på C57BL / 6 stam som har konsekvent utveckling av AAA använder beskrivs protokollet. Elastas koncentration och / eller inkubationstid kan anpassas för att rymma andra stammar.

Även om tekniken att skapa AAA med elastas i möss är tekniskt utmanande, det är en viktig teknik för att studera de bakomliggande molekylära mekanismerna för AAA bildning och utveckling. Praktik och tekniska förändringar har resulterat i en framgång på över 90% i vårt laboratorium. Vi tror att videon och den medföljande texten kommer att bidra till att minska inlärningskurvan för laboratorier som vill använda denna teknik.

Felsökning

1. Grenarna av bukaorta bör knyts ihop med 10-0 suturer, förebygga blödning under operationen och otillräcklig expansion under elastas infusion på grund av läckage.
2. Det är viktigt att ha en tydlig och expansiv verksamhet fältet. Därför använder 6-0 sutur i stället för klämmor för att tillfälligt täppa till aorta
3. Lumen i bukaorta bör rensas med koksaltlösning för att förhindra blodpropp efter operationen.
4. Det är viktigt att toppen av värmen koniska PE-10 röret bör vara släta för att undvika att repa endothelial lagret när de sätts.
5. Luftbubblor inne i fartygen bör undvikas när infundera elastas liksom när aortotomy är stängd.

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Type I porcine pancreatic elastase	Reagent	Sigma-Aldrich	E1250
polyethylene tubing (PE-10)		BD Biosciences	427400
CHANGE-A-TIP		Bovie Medical Corporation	18010-00 (FST)	cautery knife
LEICA MZ6		Leica Microsystems		stereomicroscope
LEICA DFC290HD		Leica Microsystems		USB camera
Image Pro Express ver. 6.0		Media Cybernetics Inc.		software