Summary
Это видео показывает, как вызвать аневризмы брюшной аорты (ААА) у мышей с помощью переходных внутрипросветный вливание эластазы поджелудочной железы свиньи в инфраренального сегмент брюшной аорты. Модель имеет возможность добавлять широкий понимание патобиологии AAA в связи с появлением многочисленных трансгенных мышей и гена нокаутом.
Abstract
Переходные внутрипросветный вливание эластазы поджелудочной железы свиньи в инфраренального сегмент брюшной аорты является наиболее широко используемой модели животных аневризмы брюшной аорты (ААА) с тех пор как он был впервые описан у крыс Anidjar и коллег. 1 обоснованием для его развития была основана по нарушается характер эластина наблюдается в Зенитных орудий. Это крыса модель была модифицирована для производства Зенитных орудий в инфраренального области аорты мышей. 2 модели имеет возможность добавить широкую понимание патобиологии AAA в связи с появлением многочисленных трансгенных мышей и гена нокаутом. Более того, жизнеспособную платформу для тестирования потенциальных терапевтических агентов для AAA. В этом видео, мы демонстрируем эластазы инфузии AAA процедура, используемая в нашей лаборатории.
Мыши наркозом использованием 2,5% изофлуран и лапаротомии осуществляется в стерильных условиях. Брюшной aortais изолированы с помощью операционной стереомикроскопа (Leica). После размещения временных лигатуры вокруг проксимальных и дистальных аорты, aortotomy создается в области бифуркации с кончика 30-иглы. Тепло-конический сегмент ПЭ-10 полиэтиленовые трубы вводится через aortotomy и закреплены. Просвет аорты впоследствии перфузии в течение 5-15 минут при 100 мм рт физиологическим раствором содержащего типа я свиной поджелудочной эластазы (4,5 Ед / мл, Sigma Chemical Co.) После удаления катетера перфузии, aortotomy отремонтирован без сужения просвета.
Protocol
- Мыши анестезии ингаляционными изофлуран 2,0-3.0ml / L.
- Живот побрился и удалено с алкоголем и бетадин.
- Мышь находится на спине на операционном поле.
- Стерильные перчатки носят хирургом, и инструменты, используемые были стерилизованы горячим стерилизатор шарик.
- Долго средней линии брюшной надрез. Брюшной содержимое убираются вне брюшной полости стерильной марли, чтобы разоблачить брюшной аорты.
- Брюшной аорты изолирован от уровня левой почечной вены до развилки.
- Ветвей брюшной аорты подвержены и лигировали с 10-0 швов. Все аорты ветвях в пределах 1,0 см от бифуркации лигировали.
- Временные 6,0 лигатуры шелка расположены вокруг проксимальных и дистальных отделов аорты
- Aortotomy создается в области бифуркации с 30-иглы.
- Тепло-конических полиэтиленовых труб (ПЭ-10) вводится через aortotomy и закрепляется с галстуком.
- Использование солевых мешок висел на высоте 136 см для калибровки 100 мм рт.ст., аорты заполнен солевым содержащий 4,5 Ед / мл Тип I свиной поджелудочной эластазы. Аорты обычно расширяется до 150-170% от своего первоначального диаметра в течение 5-15 минут эластазы перфузии.
- Перфузии катетер удаляется и aortotomy закрыта с 10-0 шва, чтобы избежать сужения.
- После aortotomy закрыт, дистальной лигатуры удаляется.
- Если нет или почти нет кровотечения из отремонтированных aortotomy, проксимальных лигатуры удаляется. Расширены аорты наполняется кровью немедленно.
- Кишечник возвращаются в брюшную полость, и рана закрыта в два слоя с 6-0 нейлон / полипропилен шва.
- 0,25% Bupivicaime капель (appx одной капле за каждый сантиметр разрез размером) размещены на раны и одну дозу Caprofen (5mg/kg) дается подкожно.
- Мыши помещается на теплое место и обычно восстанавливается в течение 15 минут.
Рисунок 1. Представителю Результат эластазы индуцированных ААА.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Предыдущие исследования отметили значительные партии к много изменений в ААА развития различных коммерческих препаратов эластазы 3. Таким образом, очень важно следить партий изделий, а также иметь соответствующие контрольные группы для того, чтобы документ способность подготовку, чтобы побудить Зенитных орудий.
Интересно, что восприимчивость к AAA развития в этой модели зависит от мыши штамма использовали 3. Мыши, используемые в текущий видео из C57Bl / 6 штамм, который имеет последовательное развитие AAA использованием изложенных протокола. Концентрация эластазы и / или времени инкубации может быть отрегулирована для размещения других штаммов.
Хотя Техника создания AAA с эластазы у мышей является технически сложной задачей, это важный метод для изучения основных молекулярных механизмов AAA становления и развития. Практика и технические изменения привели к успеху составляет более 90% в нашей лаборатории. Мы считаем, что видео и сопроводительный текст поможет сократить время обучения для лабораторий, которые хотели бы использовать эту технику.
Поиск неисправностей
- Ветвей брюшной аорты следует лигировали с 10-0 швов, предотвращая кровотечение во время операции и недостаточной расширения при эластазы вливания из-за протечки.
- Важно иметь четкую и экспансивный операционной области. Таким образом, использование 6-0 шва вместо зажимов временно закрывают аорты
- Просвет брюшной аорты должна быть очищена с физиологическим раствором для предотвращения тромбоза после операции.
- Важно, чтобы кончик тепла конические ПЭ-10 трубка должна быть гладкой, чтобы избежать царапин эндотелиальных слой при вставке.
- Пузырьки воздуха внутри сосудов следует избегать вливания эластазы, а также при aortotomy закрыт.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Работа выполнена при поддержке гранта SCCOR "AAA заболевания: механизмы, стратификация, и лечение» (P50 HL083800-03) из Национального института здоровья
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Type I porcine pancreatic elastase | Reagent | Sigma-Aldrich | E1250 | |
| polyethylene tubing (PE-10) | BD Biosciences | 427400 | ||
| CHANGE-A-TIP | Bovie Medical Corporation | 18010-00 (FST) | cautery knife | |
| LEICA MZ6 | Leica Microsystems | stereomicroscope | ||
| LEICA DFC290HD | Leica Microsystems | USB camera | ||
| Image Pro Express ver. 6.0 | Media Cybernetics Inc. | software |
References
- Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
- Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
- Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).
