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Biology

Creación de murino Experimental aneurismas de aorta abdominal con elastasa

doi: 10.3791/1280 Published: July 23, 2009

Summary

Este video muestra cómo inducir a los aneurismas de aorta abdominal (AAA) en ratones a través de la infusión intraluminal transitoria de la elastasa pancreática porcina en el segmento infrarrenal de la aorta abdominal. El modelo tiene la capacidad de agregar visión completa de la biopatología de la AAA, debido a la aparición de numerosos transgénicos y ratones knock-out de genes.

Abstract

Infusión intraluminal transitoria de la elastasa pancreática porcina en el segmento infrarrenal de la aorta abdominal es el modelo animal más utilizado del aneurisma de aorta abdominal (AAA) desde que fue descrita por primera vez en ratas por Anidjar y sus colegas. 1 El fundamento de su desarrollo se basó sobre la naturaleza de la elastina interrumpido observado en AAA. Este modelo de rata ha sido modificado para producir AAA en la región de la aorta infrarrenal de los ratones. 2 El modelo tiene la capacidad de agregar visión completa de la biopatología de la AAA, debido a la aparición de numerosos transgénicos y ratones knock-out de genes. Por otra parte, es una plataforma viable para probar agentes terapéuticos potenciales para la AAA. En este video, que demuestre el procedimiento de infusión elastasa AAA utilizada en nuestro laboratorio.

Los ratones son anestesiados utilizando isoflurano al 2,5%, y una laparotomía se realiza en condiciones estériles. El aortais abdominal aislado con la ayuda de un microscopio estereoscópico de funcionamiento (Leica). Después de colocar las ligaduras temporales alrededor de la aorta proximal y distal, una aortotomía se crea en la bifurcación con la punta de una aguja de calibre 30. Un segmento de calor en forma de cono de la tubería de polietileno PE-10 se introduce a través de la aortotomía y seguro. La luz de la aorta es posteriormente perfundidos durante 5-15 minutos a 100 mm Hg con el tipo de solución salina con que la elastasa pancreática porcina (4,5 U / ml, Sigma Chemical Co.). Después de retirar el catéter de perfusión, el aortotomía ha sido reparada sin la constricción de la luz.

Protocol

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  1. Los ratones son anestesiados con isoflurano inhalado 2,0 3,0 ml / l.
  2. El abdomen se rasura y limpia con alcohol y betadine.
  3. El ratón es colocado en posición supina en el campo operatorio.
  4. Guantes estériles son usados ​​por el cirujano, y los instrumentos utilizados han sido esterilizados con agua caliente esterilizador de cuentas.
  5. Una larga incisión en el abdomen línea media se hace. Contenido abdominal se retraen fuera del abdomen con una gasa estéril para exponer la aorta abdominal.
  6. La aorta abdominal es aislado del nivel de la vena renal izquierda hasta la bifurcación.
  7. Las ramas de la aorta abdominal se exponen y se liga con 10-0. Todas las ramas de la aorta en 1,0 cm de la bifurcación se ligan.
  8. Temporal 6,0 ligaduras de seda se colocan alrededor de las porciones proximales y distales de la aorta
  9. Un aortotomía se crea en la bifurcación con una aguja de calibre 30.
  10. El calor en forma de cono tubo de polietileno (PE-10) se introduce a través de la aortotomía y asegurado con un empate.
  11. Usando una bolsa de solución salina colgado a la altura de 136 cm para calibrar 100 mmHg, la aorta se llena con la solución salina que contenía 4,5 U / ml Tipo I elastasa pancreática porcina. La aorta se dilata normalmente a 150-170% de su diámetro original durante la perfusión de la elastasa de 05.15 minutos.
  12. El catéter se retira la perfusión y la aortotomía cierra con una sutura 10-0 para evitar la constricción.
  13. Después de la aortotomía está cerrada, la ligadura distal se retira.
  14. Si hay poco o ningún sangrado de la aortotomía reparado, la ligadura proximal se elimina. La aorta ampliado se llena de sangre inmediatamente.
  15. Los intestinos se introducen en el abdomen, y la herida se cierra en dos capas con 6-0 nylon / polipropileno de sutura.
  16. 0,25% Bupivicaime gotas (aprox una gota por cada centímetro del tamaño de la incisión) se coloca sobre la herida y una dosis de Caprofen (5mg/kg) se administra por vía subcutánea.
  17. El ratón es colocado en un sitio caliente y se recupera en 15 minutos.

Figura 1
Figura 1. Resultados Representante de la elastasa inducida AAA.

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Discussion

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Estudios anteriores han observado importantes de lote a lote de variación en el desarrollo de diferentes preparaciones de AAA elastasa comercial 3. Por lo tanto, es fundamental para controlar los lotes de producción, así como tener grupos de control adecuados a fin de documentar la capacidad de la preparación para inducir la AAA.

Curiosamente, la susceptibilidad al desarrollo de la AAA en este modelo depende de la cepa de ratón utilizada 3. El ratón utilizado en el vídeo actual es de la cepa C57Bl / 6, que tiene un desarrollo coherente de la AAA con el protocolo descrito. La concentración de elastasa y / o tiempo de incubación puede ser ajustado para acomodar otras cepas.

A pesar de la técnica de creación de la AAA con elastasa en ratones es técnicamente difícil, es una técnica importante para el estudio de los mecanismos moleculares subyacentes de la formación de AAA y el desarrollo. Modificaciones técnicas y la práctica han resultado en una tasa de éxito de más del 90% en nuestro laboratorio. Creemos que el video y el texto que acompaña ayudará a reducir la curva de aprendizaje para los laboratorios que deseen utilizar esta técnica.

Solución de problemas

  1. Las ramas de la aorta abdominal debe ser ligado con 10-0, la prevención de la hemorragia durante la operación y expansión insuficiente durante la infusión de la elastasa, debido a una fuga.
  2. Es importante tener un campo de trabajo clara y expansiva. Por lo tanto, el uso de sutura 6-0 en lugar de pinzas para ocluir temporalmente la aorta
  3. La luz de la aorta abdominal debe ser limpiado con una solución salina para prevenir la trombosis después de la operación.
  4. Es importante que la punta del calor cónica del tubo de PE-10 debe ser suave para evitar rayar la capa endotelial cuando se inserta.
  5. Las burbujas de aire dentro de los vasos deben ser evitados cuando la infusión de la elastasa, así como cuando el aortotomía está cerrado.

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Acknowledgments

Este trabajo fue apoyado la concesión SCCOR "Enfermedad de AAA: Mecanismos, estratificación y tratamiento" (P50 HL083800-03) de los Institutos Nacionales de Salud

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Type I porcine pancreatic elastase Reagent Sigma-Aldrich E1250
polyethylene tubing (PE-10) BD Biosciences 427400
CHANGE-A-TIP Bovie Medical Corporation 18010-00 (FST) cautery knife
LEICA MZ6 Leica Microsystems stereomicroscope
LEICA DFC290HD Leica Microsystems USB camera
Image Pro Express ver. 6.0 Media Cybernetics Inc. software

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References

  1. Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82, (3), 973-973 (1990).
  2. Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105, (11), 1641-1641 (2000).
  3. Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33, (6), 1255-1255 (2001).
Creación de murino Experimental aneurismas de aorta abdominal con elastasa
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Cite this Article

Azuma, J., Asagami, T., Dalman, R., Tsao, P. S. Creation of Murine Experimental Abdominal Aortic Aneurysms with Elastase . J. Vis. Exp. (29), e1280, doi:10.3791/1280 (2009).More

Azuma, J., Asagami, T., Dalman, R., Tsao, P. S. Creation of Murine Experimental Abdominal Aortic Aneurysms with Elastase . J. Vis. Exp. (29), e1280, doi:10.3791/1280 (2009).

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