Summary
Bu video infrarenal abdominal aort segmentine domuz pankreatik elastaz geçici intraluminal infüzyonu ile farelerde abdominal aort anevrizması (AAA) ikna etmek için nasıl gösterir. Modeli birçok transgenik ve gen knockout farelerde ortaya çıkması nedeniyle AAA patobiyolojisi geniş bir fikir eklemek için yeteneğine sahiptir.
Abstract
Infrarenal abdominal aort segmentine domuz pankreatik elastaz Geçici intraluminal infüzyon ilk Anidjar sıçan ve meslektaşları tarafından açıklanan bu yana abdominal aort anevrizması (AAA) en yaygın olarak kullanılan hayvan modelinde kendi gelişimi için 1 mantık tabanlı elastin bozulmuş doğa AAA'ların gözlenen. Bu sıçan modelinde infrarenal aort bölgede farelerin AAA'ların üretmek için modifiye edilmiştir. 2 modeli birçok transgenik ve gen knockout farelerde ortaya çıkması nedeniyle, AAA patobiyolojisi geniş bir fikir eklemek için yeteneğine sahiptir. Ayrıca, AAA için potansiyel terapötik ajanların test etmek için geçerli bir platform. Bu video, laboratuarda kullanılan elastaz infüzyonu AAA prosedürü göstermektedir.
Fare izofluran 2.5% anestezi ve laparotomi steril koşullar altında yapılır. Karın aortais bir işletim stereomikroskopta (Leica) yardımı ile izole edilmiştir. Proksimal ve distal aorta çevresinde geçici ligatür yerleştirdikten sonra, 30-gauge bir iğne ucu ile bifurkasyon aortotomy oluşturulur. PE-10 polietilen boru ısı konik bir segment aortotomy ile tanıştırdı ve güvence altına alınmıştır. Aort lümeni daha sonra 5-15 dakika tuzlu su içeren tip I domuz pankreatik elastaz (Sigma Chemical Co 4.5 U / ml) ile 100 mm Hg perfüze. Perfüzyon kateteri çıkardıktan sonra, aortotomy lümeninde daralma olmadan onarılır.
Protocol
- Fare ile anestezi inhalasyon izofluran 2.0-3.0ml / L.
- Karın traş ve alkol ve betadin ile temizlendi.
- Fare operasyon alanında sırtüstü yerleştirilir.
- Cerrah tarafından steril eldiven giyilir, kullanılan aletler ve sıcak boncuk sterilizatör ile sterilize edilmiştir.
- Uzun bir orta hat abdominal kesi yapılır. Karın içeriği abdominal aorta maruz steril gazlı bez ile karın dışında geri çekilir.
- Abdominal aorta, sol renal ven seviyesinden çatallanma izole edilir.
- Abdominal aorta dalları maruz kalan ve 10-0 sütür ile bağlandı. Bifurkasyonunun 1.0cm içinde tüm aort dalları bağlandı.
- Geçici ipek 6.0 ligatür aort proksimal ve distal kısımları etrafına yerleştirilen
- Bir aortotomy 30-gauge iğne ile bifurkasyon oluşturulur.
- Isı konik polietilen boru (PE-10) aortotomy ile tanıtıldı ve bir beraberlik ile güvence altına alınmıştır.
- 100 mmHg kalibre için 136 cm yükseklikte asılı tuzlu bir çanta kullanımı, aort 4.5 U / mL Tip I domuz pankreatik elastaz içeren tuzlu su ile doldurulur. Aort genellikle 5-15 dakika elastaz perfüzyon sırasında orijinal çapının% 150-170 genişletir.
- Perfüzyon kateteri sonra kaldırılır ve aortotomy daralma önlemek için 10-0 sütür ile kapatıldı.
- Aortotomy kapatıldıktan sonra, distal ligatür kaldırılır.
- Onarılan aortotomy çok az veya hiç kanama varsa, proksimal ligatür kaldırılır. Genişletilmiş aort hemen kan ile doldurur.
- Bağırsaklar karın iade edilir ve yara 6-0 naylon / polipropilen sütür ile iki kat kapalı.
- 0.25% Bupivicaime damla (yaklaşık kesi boyutu her santimetre için bir damla) Caprofen yara ve bir doz yerleştirilir (5mg/kg) subkutan verilir.
- Fare sıcak bir alan üzerine yerleştirilen ve genellikle 15 dakika içinde kurtarır.
Şekil 1 elastaz indüklenen AAA Temsilcisi Sonucu.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Önceki çalışmalar, farklı ticari elastaz hazırlıkları 3 AAA gelişiminde önemli bir parti için çok varyasyon kaydetti var. Böylece, üretim çok izlemek için AAA'ların ikna etmek için hazırlık yeteneği belgelemek için uygun kontrol gruplarının yanı sıra kritik öneme sahiptir.
İlginçtir ki, bu modelde AAA geliştirme yatkınlığı 3 kullanılan fare suşu bağlıdır. Geçerli video kullanılan fare hatlarıyla protokolünü kullanarak AAA tutarlı kalkınma C57BL / 6 suşu. Elastaz konsantrasyon ve / veya inkübasyon süresi diğer suşları karşılamak için ayarlanabilir.
Farelerde elastaz AAA oluşturma tekniği teknik olarak oldukça zor olmakla birlikte, altta yatan moleküler mekanizmaları AAA oluşumu ve gelişimi eğitimi için önemli bir tekniktir. Uygulama ve teknik modifikasyonlar, laboratuvarda% 90'ın üzerinde bir başarı oranı ile sonuçlanmıştır. Video ve eşlik eden metin, bu tekniği kullanmak için isteyen laboratuarlar için öğrenme eğrisi azaltmaya yardımcı olacağına inanıyoruz.
Sorun Giderme
- Abdominal aorta dalları nedeniyle sızıntı elastaz infüzyonu sırasında operasyon ve yetersiz genişleme sırasında kanamayı önlemek, 10-0 sütür ile bağlandı olmalıdır.
- Açık ve geniş bir çalışma alanına sahip olmak önemlidir. Bu nedenle, geçici olarak aort kapamak için 6-0 sütür yerine kelepçeler
- Abdominal aorta lümen ameliyat sonrası tromboz önlemek için serum fizyolojik ile temizlenmiş olmalıdır.
- Bu ısı, konik PE-10 tüp ucu takıldığında endotel tabaka çizilmesini önlemek için yumuşak olması önemlidir.
- Elastaz gibi beslerken aortotomy kapalı olduğunda damarların içinde hava kabarcıkları kaçınılmalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Ulusal Sağlık Enstitüleri (P50 HL083800-03): Bu çalışma SCCOR hibe "Mekanizmalar, Tabakalaşma ve Tedavi AAA Hastalığı" desteklenmiştir.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Type I porcine pancreatic elastase | Reagent | Sigma-Aldrich | E1250 | |
| polyethylene tubing (PE-10) | BD Biosciences | 427400 | ||
| CHANGE-A-TIP | Bovie Medical Corporation | 18010-00 (FST) | cautery knife | |
| LEICA MZ6 | Leica Microsystems | stereomicroscope | ||
| LEICA DFC290HD | Leica Microsystems | USB camera | ||
| Image Pro Express ver. 6.0 | Media Cybernetics Inc. | software |
References
- Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
- Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
- Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).
