Summary
Biz Amerikan ıstakoz mide brüt diseksiyon tarif (
Abstract
Amerikan ıstakoz mide (
Protocol
- Diseksiyonu önce ıstakoz, hayvan uyutmak için 30 dakika buz gömülü olmalıdır.
- Istakoz seks ilk yüzgeç şekline bakarak tespit edilebilir. Erkeklerde kemik swimmerets ve kadın tüylü swimmerets var.
- Cephalothoraksın ayırın.
- Ön pençeleri rip off bir kıvırma hareketi kullanın.
- Cephalothoraksın ve karın arasında derin bir kesik yapmak için büyük bir makas kullanarak karın (kuyruk bölümünü) çıkarın. Bu kuyruk flip yanıtı kontrol eden dev bir lif yolları keser. Sonra karın kesmeye devam edin.
- Makasla onları kırparak antenler kaldırın ve bacak ve üçüncü maxillipeds bükün.
- (Yani servikal groove ve kürsüden arasında baş bölgesi), midenin etrafına karapaksla çıkarın.
- Kırmızımsı yatan hipodermis zedelemeden, bu bölümü kullanabilirsiniz rongeurs ve dikkatli bir şekilde sabit karapaksla kaldırmak için spatula lateral kenarında başlatılıyor. Spatula karapaksta rongeurs kopmuş böylece katmanları ayırmak için yararlıdır.
- Ikili hafifçe kalsifiye küçük oval plakaları (IIIa kemikçikler) bulabilirsiniz gözünde doğru ilerliyor. Bu kemikçikler mümkün olduğunca yakın olarak, küçük bir makas kullanarak ossicles dikkatle kas ayırın.
- Spatula ve rongeurs gözleri ve kuyruk kısmı (yaklaşık 1 santimetre) arasında kürsüden karapaksla çıkarın.
- Yüz (gözler dahil olmak üzere bölge ve kürsüden) ayırın.
- Küçük makas kullanmak Exoskeleton ayırmak için kürsüden en rostral maruz kalan doku genelinde yatay bir kesim olun. Sonra dikkatlice IIIa kemikçikler düzeyini geçmiş, sadece kaudal doku rulo makas ve / veya spatula kenarına kullanın.
- Dorsal başlayarak, yüz Exoskeleton kalan doku ayırmak için küçük bir makas kullanın. Ağız merkezi ve ek yakın durur, mümkün olduğunca sabit karapaksla yakın olarak kesin.
- Ventral görünümünde çene kemiklerini kolayca görünür olmalıdır. Kalan maxillipeds ayırın.
- Altçenelerini altında yumuşak bir dudak bulun.
- Mide bağlı dudak yüz tutarken ayırmak için yan keser olun. (Hafif kavisli bir kılavuz olarak kullanılabilecek bir mavimsi dış ağız parçası vardır.)
- Mide ayırın ve çıkarın.
- Elinizi yukarı ve böylece dirsek ön sonuna doğru olduğunu ventral tarafında avuç ıstakoz tutun.
- Hemostat dudak takın ve yerçekimi hemostat ve dudak ventral vücut duvarından aşağı çekme ve uzak.
- Küçük bir makas kullanarak çene kemiklerini kesip.
- , Dudak ve mide için ventral sert bir "raf" oluşturan ventral vücut duvarı, sırt tarafında bulun. "Raf" altında Kes, tüm medial-lateral orta hat boyunca çok, vücut duvarına yakın. Midenin tüm ventral tarafta artık vücut duvarından müstakil olmalıdır.
- Dorsal yüzü yukarı olacak şekilde ıstakoz açın. Karapaksla kaldırıldı servikal oluk, rostral kenarı boyunca kesin ve mide yavaşça ortaya çıkarır.
- Herhangi bir ekstra bağırsak, mide bağlı kalır ayırın.
- Mide açın ve bağlantılarını hazırlamak.
- Mide aşağı hipodermis tarafı ile elinizin avuç tutun. Hemostat hala dudak bağlı olmalı ve parmaklar arasında yalan gerekir.
- Pilorusta ventral taraf aracılığıyla ağız açıklığı (dudak altında) sığ bir ön-arka kesim yapmak için küçük makas kullanın.
- Midede daha da açmak için, mide merkezi boyunca çalışan kemikçikler boyunca iki yan keser olun.
- Soğuk tuzlu su görünürlüğünü artırmak ve mide içeriğinin dışarı atmak için mide dökülür olabilir.
- Diseksiyon çanak düz koymak için hazırlık üç mide dişleri düzeltmek için küçük makas kullanmak için.
- Diseksiyon çanak mide aşağı pin.
- Mide, hipodermis yüzü yukarı, tuzlu su dolu bir diseksiyon çanak yerleştirin.
- Böcek dudak pimleri ve mide açıldığında oluşturulan dört köşe yerleştirin. Yer pimleri ve yüksek kenarına yakın ön köşeleri için commissural ganglionlar veya alt özofagus sinirler rahatsız etmeyecek. Pilorik dilatör kas rahatsız olarak biraz yüksek arka köşelerde yer pimleri.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Istakoz mide laboratuvar diseksiyonu stomatogastric sinir sistemi, mide ritmik kasılmaları kontrol eden bir ağ erişim için yapılır. Istakoz mide anatomisinin daha önce 5-7 tarif edilmiştir, ve biz anatomi aşina hale öneririz. Bunu yapmak, hassas sinir ve kas zarar riskini azaltacaktır.
Mide diseksiyon tamamlanmasının ardından, STNS çeşitli bölümlerini daha disseke olabilir. Örneğin nöromüsküler kavşak, STNS sinirlerin ve çalışma innervates kas izole olabilir. Stomatogastric ganglion izole nöronların stomatogastric ganglion somata kayıtları veya moleküler çalışma için erişilebilir. Diseksiyonu STNS stomatogastric gangliyon ve sinirler dahil olmak üzere, 4 üncü maddede bir arkadaşınız vallahi belgelenmiş oldu.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Biz danışmanı Dr. Havva Marder kabul etmek istiyorum. Bu araştırma, AE T. Ulusal Sağlık Eve Marder ve NS059255 hibe NS17813 Enstitüsü tarafından desteklenen
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Homarus americanus | Commercial Lobster | Can be purchased from any lobster supplier, We specifically request chicken” lobsters. | |
| Black Sylgard 170 | Dow Corning | 170 | |
| Preparation Dish | Fisher Scientific | 08-807 | Fill 2" with Black Sylgard 170. |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Insect Pins size 6 | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Mayo Scissors | This is a common product offered by many suppliers of dissecting tools. | ||
| Micro-Spatula | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | This is a very common product offered by many suppliers of lab tools. |
| Rongeurs | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Plastic hemostat | This is a common product offered by many suppliers of dissecting or jewelry making tools. |
References
- Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
- Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
- Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
- Tobin, A. E., Bierman, H. S. Homarus americanus stomatogastric nervous system dissection. J Vis Exp. 27, (2009).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
- Herrick, F. H. Natural history of the American Lobster. U.S. Bur. Fish. , 219-252 (1909).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
