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Biology

Dissecação bruta do Estômago da lagosta, Homarus Americanus Published: May 22, 2009 doi: 10.3791/1320

Summary

Descrevemos a dissecção macroscópica do estômago da lagosta americana (

Abstract

O estômago da lagosta americana (

Protocol

  1. Antes de dissecção da lagosta deve ser enterrado no gelo por 30 minutos para anestesiar o animal.
  2. O sexo da lagosta pode ser determinada por olhar para a forma do swimmeret primeiro. Os machos têm pleópodes boney e as fêmeas têm pleópodes feathery.
  3. Isolar o cefalotórax.
    1. Use um movimento de torção para arrancar as garras da frente.
    2. Remover o abdômen (parte da cauda), usando a tesoura grande para fazer um corte profundo entre o cefalotórax e abdômen. Isto reduz os tratos de fibra gigante controlar a resposta da cauda flip. Em seguida, proceder para cortar o abdome.
    3. Remove as antenas aparando-los com uma tesoura, e retire as pernas e os maxilípedes terceiros.
  4. Remover a carapaça de todo o estômago, (ou seja, a região da cabeça entre o sulco cervical e tribuna).
    1. Começando na borda lateral desta seção usam fórceps e espátula para remover cuidadosamente a carapaça dura, deixando a hipoderme avermelhada subjacente intacto. A espátula é útil para separar as camadas para que a carapaça podem ser quebrados com o fórceps.
    2. Se movendo em direção aos olhos você encontra bilateral levemente calcificado placas oval pequena (IIIa ossículos). O mais próximo possível a estes ossículos, cuidadosamente retire o músculo da ossículos usando a tesoura pequena.
    3. Utilizando espátula e remover rongeurs carapaça de entre os olhos ea parte caudal (aprox. 1 centímetro) da tribuna.
  5. Destacar a face (região, incluindo os olhos, e tribuna).
    1. Com uma tesoura pequena fazer um corte horizontal em todo o tecido mais rostral exposta na tribuna para retirá-la do exoesqueleto. Em seguida, use uma tesoura de ponta e / ou espátula com cuidado rolo de tecido caudalmente, basta passar o nível dos ossículos IIIa.
    2. Começando dorsalmente, use uma tesoura pequena para separar tecido que permaneceu no exoesqueleto face. Corte o mais próximo da carapaça dura possível, parando quando chegar perto do centro e fixação da boca.
    3. Do ponto de vista ventral das mandíbulas devem ser facilmente visíveis. Separar maxilípedes restantes.
    4. Localize lábios macios sob a mandíbula.
    5. Faça cortes laterais para destacar o rosto, mantendo o lábio ligado ao estômago. (Há uma parte da boca ligeiramente curvada azulada exterior que pode ser usado como um guia.)
  6. Separar e remover o estômago.
    1. Segure a lagosta na palma da sua mão, o lado ventral para cima e para que a extremidade anterior é em direção ao seu cotovelo.
    2. Anexar um hemostat ao lábio e deixar a gravidade puxar o hemostat e lábio para baixo e longe da parede do corpo ventral.
    3. Com uma tesoura pequena cortada mandíbulas.
    4. Localizar o lado dorsal da parede do corpo ventral, que forma uma "prateleira" hard ventral no lábio e no estômago. Corte logo abaixo da "prateleira", muito perto da parede do corpo, do outro lado da linha média medial-lateral inteira. Todo o lado ventral do estômago deve agora estar destacado da parede do corpo.
    5. Vire a lagosta, para que o lado dorsal é para cima. Corte ao longo da borda rostral do sulco cervical, onde a carapaça foi removido, e gentilmente puxa o estômago para fora.
    6. Desconectar os intestinos extra que permanecer ligado ao estômago.
  7. Abrir o estômago, e prepará-lo para prendendo.
    1. Segure o estômago na palma da sua mão com a hipoderme voltada para baixo. O hemostat ainda deve ser anexado ao lábio e deve ficar entre seus dedos.
    2. Use uma tesoura pequena para fazer um corte anterior para posterior rasa da abertura de boca (abaixo do lábio) para baixo através do lado ventral do piloro.
    3. Para abrir ainda mais o estômago, fazer dois cortes laterais ao longo da ossículos que atravessa o centro do estômago.
    4. Salina fria pode ser derramado para dentro do estômago para melhorar a visibilidade e expulsar conteúdo do estômago.
    5. A fim de permitir a preparação para colocar o plano no prato dissecar usar a tesoura pequena para cortar as três dentes gástrico.
  8. Pin do estômago para baixo no prato dissecção.
    1. Coloque o estômago, hipoderme lado-up, em um prato de dissecção cheios de solução salina.
    2. Coloque os pinos de insetos no lábio e os quatro cantos criado quando o estômago foi aberto. Para os cantos anterior pinos lugar alto e perto da borda, a não perturbar gânglios comissural ou inferior nervos esofágica. Para a posterior pinos cantos lugar um pouco alto para não incomodar o músculo dilatador pilórica.

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Discussion

Em nosso laboratório de dissecção do estômago lagosta é feito para acessar o sistema nervoso stomatogastric, uma rede que controla as contrações rítmicas do estômago. A anatomia do estômago lagosta foi bem descrito anteriormente 5-7, e nós recomendamos familiarizar-se com sua anatomia. Se o fizer, irá reduzir o risco de danificar os delicados nervos e músculos.

Após a conclusão da dissecção do estômago, várias partes do STNS pode ser ainda mais dissecados. Por exemplo para estudar junções neuromusculares, um dos nervos STNS eo músculo que inerva podem ser isoladas. O somata de neurônios no gânglio stomatogastric pode ser acessado para gravações ou trabalhar molecular isolando o gânglio stomatogastric. A dissecção da STNS, incluindo o gânglio stomatogastric e nervos, tem sido documentada em um Júpiter companheiro artigo 4.

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Acknowledgments

Gostaríamos de agradecer nosso consultor, Dr. Eve Marder. Esta pesquisa foi apoiada pelo Instituto Nacional de Saúde concede NS17813 a Eva Marder e NS059255 para AE T.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Homarus americanus Commercial Lobster Can be purchased from any lobster supplier, We specifically request chicken” lobsters.
Black Sylgard 170 Dow Corning 170
Preparation Dish Fisher Scientific 08-807 Fill 2" with Black Sylgard 170.
Fine Scissors Fine Science Tools 14090-09
Insect Pins size 6 Fine Science Tools 26000-65
Mayo Scissors This is a common product offered by many suppliers of dissecting tools.
Micro-Spatula WARD’s Natural Science 15 V 4313 This is a very common product offered by many suppliers of lab tools.
Rongeurs Fine Science Tools 16000-14
Plastic hemostat This is a common product offered by many suppliers of dissecting or jewelry making tools.

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References

  1. Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
  2. Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
  3. Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
  4. Tobin, A. E., Bierman, H. S. Homarus americanus stomatogastric nervous system dissection. J Vis Exp. 27, (2009).
  5. Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
  6. Herrick, F. H. Natural history of the American Lobster. U.S. Bur. Fish. , 219-252 (1909).
  7. Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).

Tags

Neurociência Edição 27 lagosta estômago rede neural dissecação gerador de padrão central
Dissecação bruta do Estômago da lagosta,<em> Homarus Americanus</em
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Bierman, H. S., Tobin, A. GrossMore

Bierman, H. S., Tobin, A. Gross Dissection of the Stomach of the Lobster, Homarus Americanus. J. Vis. Exp. (27), e1320, doi:10.3791/1320 (2009).

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