Summary
אנו מתארים את לנתיחה ברוטו של הקיבה של לובסטר האמריקאית (
Abstract
הבטן של לובסטר האמריקאית (
Protocol
- לפני לנתיחה לובסטר צריך להיות קבור בקרח במשך 30 דקות כדי להרדים את החיה.
- הסקס של לובסטר ניתן לקבוע על ידי הסתכלות בצורה של swimmeret הראשונה. יש זכרים ונקבות swimmerets בוני יש swimmerets כנוצה.
- לבודד את cephalothorax.
- השתמש תנועת פיתול לקרוע את הטפרים הקדמי.
- הסר את הבטן (חלק הזנב) באמצעות מספריים גדולים כדי לבצע חתך עמוק בין cephalothorax ובבטן. זה חותך את שטחי ענק סיבים שליטה על התגובה להעיף הזנב. ואז להמשיך לחתוך את הבטן.
- הסר את האנטנות על ידי זמירה אותם במספריים, ולסובב את הרגליים ואת maxillipeds השלישי.
- הסר את שריון מרחבי בבטן, (כלומר, האזור בין ראש גרוב צוואר הרחם ואת דוכן הנואמים).
- החל בקצה הלטרלי של זה להשתמש rongeurs סעיף ו מרית בזהירות כדי להסיר את שריון קשה, תוך השארת ובהיפודרמיס הבסיסית אדמדם ללא שינוי. מרית שימושי הפרדת שכבות, כך שריון ניתן לשבור את עם rongeurs.
- העברת לעבר בעיני אתה מוצא בין שתי המדינות צלחות מסויד קלות סגלגל קטן (IIIa ossicles). כפי קרוב ככל האפשר ossicles אלה, בזהירות לנתק את השריר מן ossicles באמצעות מספריים קטנים.
- בעזרת מרית ו rongeurs להסיר שריון מבין העיניים החלק הזנב (כ 1 ס"מ) של הבמה.
- ניתוק הפנים (כולל אזור העיניים, דוכן).
- בעזרת מספריים קטנים עושים חתך אופקי על פני הרקמה החשופה מקורי ביותר דוכן לנתק אותו שלד חיצוני. לאחר מכן השתמש קצה של מספריים ו / או מרית בזהירות גליל רקמות caudally, רק בעבר לרמה של ossicles IIIa.
- החל dorsally, להשתמש במספריים קטנים לנתק רקמות שנותר שלד הפנים. גזור קרוב שריון קשה ככל האפשר, לעצור כאשר אתה מקבל ליד מרכז והתקשרות של הפה.
- מנקודת מבט הגחון הלסתות צריך להיות גלוי בקלות. ניתוק maxillipeds הנותרים.
- אתר שפתיים רכות תחת הלסתות.
- לבצע חתכים לרוחב כדי לנתק את הפנים תוך שמירה על השפה מחוברת בבטן. (יש פה עקום מעט כחלחל החלק החיצוני שיכול לשמש כמדריך.)
- ניתוק ולהסיר את הקיבה.
- החזק את לובסטר בכף היד, בצד הגחוני מעלה כך בסוף הקדמי הוא כלפי המרפק שלך.
- צרף hemostat אל השפה ולתת הכבידה למשוך את hemostat שפתיים למטה מהקיר הגוף הגחון.
- בעזרת מספריים קטנים לגזור הלסתות.
- אתר את צד הגב לקיר הגוף הגחון, המהווה "מדף" קשה הגחון לשפה ובבטן. גזור ממש מתחת "מדף", קרוב מאוד לקיר הגוף, על פני קו האמצע המדיאלי-לרוחב כולו. בצד הגחון כולו של הקיבה אמור כעת להיות מנותקת מן הקיר הגוף.
- סובבו את לובסטר כך את הצד הגבי הוא למעלה. גזור לאורך הקצה מקורי של חריץ צוואר הרחם, שם שריון הוסר, בעדינות מושך את הבטן החוצה.
- ניתוק כל המעיים נוספים שנותרו מחוברים בבטן.
- פתח את הקיבה, ולהכינו מצמיד.
- החזיקו את הבטן בכף היד שלך עם תופעות ובהיפודרמיס למטה. Hemostat עדיין צריך להיות מחובר השפה ויש שקר בין האצבעות.
- השתמש במספריים קטנים לבצע חתך רדוד הקדמי אל האחורי של פתיחת הפה (מתחת לשפה) במורד דרך הצד הגחוני של השוער.
- כדי להמשיך לפתוח את הבטן, בשני חתכים לרוחב לאורך ossicles רץ החוצה את מרכז הבטן.
- מלוחים הקרה ניתן שפכו לתוך הקיבה כדי לשפר את הנראות לגרש את תוכן הקיבה.
- על מנת לאפשר את הכנת להניח בצלחת שטוחה לנתח להשתמש במספריים קטנים לקצץ את שלוש שיניים קיבה.
- הצמד את הבטן כלפי מטה בצלחת לנתיחה.
- מניחים את הקיבה, ובהיפודרמיס בצד למעלה, בתוך צלחת מלוחים מלא לנתיחה.
- המקום סיכות חרקים על השפה ואת ארבע הפינות שנוצרו כאשר הבטן נפתח. עבור פינות הקדמי סיכות מקום גבוה קרוב לקצה, לא להפריע הגרעינים commissural או עצבים הוושט נחות. עבור הפינים פינות האחורי במקום גבוה מעט לא להפריע את השריר המרחיב השוער.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ב לנתיחה במעבדה שלנו הקיבה לובסטר נעשה כדי לגשת למערכת העצבים stomatogastric, רשת השולט התכווצויות קצובות של הקיבה. האנטומיה של הקיבה לובסטר תוארה גם בעבר 5-7, ואנו ממליצים היכרות עם האנטומיה שלו. פעולה זו תפחית את הסיכון של פגיעה בעצבים עדין שריר.
עם השלמת לנתיחה את הבטן, חלקים שונים של STNS עשוי להיות גזור נוסף. לדוגמה ללמוד בצמתים neuromuscular, אחד העצבים ועל השרירים STNS innervates זה יכול להיות מבודד. Somata של נוירונים הגנגליון stomatogastric ניתן לגשת להקלטות או לעבוד מולקולרית ידי בידוד הגנגליון stomatogastric. דיסקציה של STNS, כולל הגנגליון והעצבים stomatogastric, תועד יופיטר לוויה סעיף 4.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
ברצוננו להודות יועץ שלנו, ד"ר איב מרדר. מחקר זה מומן על ידי המכון הלאומי לבריאות מענקים NS17813 אל וחוה מרדר ו NS059255 אל AE ט
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Homarus americanus | Commercial Lobster | Can be purchased from any lobster supplier, We specifically request chicken” lobsters. | |
| Black Sylgard 170 | Dow Corning | 170 | |
| Preparation Dish | Fisher Scientific | 08-807 | Fill 2" with Black Sylgard 170. |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Insect Pins size 6 | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Mayo Scissors | This is a common product offered by many suppliers of dissecting tools. | ||
| Micro-Spatula | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | This is a very common product offered by many suppliers of lab tools. |
| Rongeurs | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Plastic hemostat | This is a common product offered by many suppliers of dissecting or jewelry making tools. |
References
- Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
- Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
- Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
- Tobin, A. E., Bierman, H. S. Homarus americanus stomatogastric nervous system dissection. J Vis Exp. 27, (2009).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
- Herrick, F. H. Natural history of the American Lobster. U.S. Bur. Fish. , 219-252 (1909).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
