Summary
Descriviamo la dissezione lordo dello stomaco del aragosta americana (
Abstract
Lo stomaco della aragosta americana (
Protocol
- Prima della dissezione l'aragosta deve essere sepolto nel ghiaccio per 30 minuti per anestetizzare l'animale.
- Il sesso del aragosta può essere determinato osservando la forma della swimmeret prima. I maschi hanno swimmerets boney e femmine hanno swimmerets pennuto.
- Isolare il cefalotorace.
- Utilizzare un movimento rotatorio per strappare gli artigli anteriori.
- Rimuovere l'addome (parte posteriore) utilizzando le forbici grandi per fare un taglio profondo tra il cefalotorace e l'addome. Questo riduce i tratti in fibra gigante controllo della risposta coda flip. Quindi procedere a tagliare l'addome.
- Rimuovere il antenne da taglio via con le forbici, e sviti le gambe e il maxillipeds terzo.
- Togliere il carapace di tutto lo stomaco, (cioè la regione della testa tra il solco cervicale e la tribuna).
- A partire dal bordo laterale della Rongeurs utilizzare questa sezione e spatola per rimuovere con attenzione la corazza dura, lasciando l'ipoderma rossastro sottostante intatto. La spatola è utile per separare gli strati in modo che il carapace può essere rotto con il Rongeurs.
- Andando verso gli occhi si trovano bilaterali piastre leggermente calcificate ovale piccolo (IIIa ossicini). Il più vicino possibile a questi ossicini, con attenzione staccare il muscolo dal ossicini utilizzando le forbicine.
- Utilizzando una spatola e Rongeurs rimuovere dal carapace tra gli occhi e la porzione caudale (circa 1 centimetro) del rostro.
- Staccare il volto (regione, tra cui gli occhi, e tribuna).
- Utilizzando piccole forbici un taglio orizzontale attraverso il tessuto più rostrale esposto in tribuna per staccarlo dal esoscheletro. Quindi utilizzare bordo di forbici e / o spatola a rotolare con attenzione tessuto caudalmente, appena passato il livello degli ossicini IIIa.
- A partire dorsalmente, usare forbicine per staccare il tessuto residuo dal esoscheletro viso. Tagliati il più vicino al carapace duro possibile, fermandosi quando si arriva vicino al centro e l'attaccamento della bocca.
- Dal punto di vista ventrale le mandibole devono essere facilmente visibili. Staccare maxillipeds rimanenti.
- Individuare labbro morbido sotto le mandibole.
- Fare dei tagli laterali per staccare il volto mantenendo il labbro attaccato allo stomaco. (C'è un po 'curvo parte bluastro della bocca esterna che può essere usato come guida.)
- Staccare e togliere lo stomaco.
- Tenere l'aragosta nel palmo della tua mano, lato ventrale e in modo che l'estremità anteriore è verso il gomito.
- Collegare un hemostat al labbro e lasciare che la gravità tirare la hemostat e labbro verso il basso e lontano dalla parete ventrale del corpo.
- Utilizzando piccole forbici tagliare mandibole.
- Individuare il lato dorsale della parete del corpo ventrale, che forma un duro "scaffale" ventrale al labbro e nello stomaco. Tagliato appena sotto il "scaffale", molto vicino alla parete del corpo, su tutta la linea mediana medio-laterale. Tutta la parte ventrale dello stomaco dovrebbe essere staccato dalla parete del corpo.
- Girare l'aragosta in modo che il lato dorsale è alto. Tagliare lungo il bordo rostrale del solco cervicale, dove era stato rimosso il carapace, e tira dolcemente la pancia fuori.
- Staccare ogni intestino in più che rimangono attaccati allo stomaco.
- Aperto lo stomaco e prepararlo per il pinning.
- Tenere lo stomaco nel palmo della vostra mano con l'ipoderma rivolto verso il basso. Il hemostat deve essere ancora attaccato al labbro e dovrebbe essere compreso tra le dita.
- Usare le forbici piccola per poter essere superficiale antero-posteriore tagliato dalla apertura della bocca (sotto il labbro) verso il basso attraverso il lato ventrale del piloro.
- Per aprire ulteriormente lo stomaco, fare due tagli laterali lungo la ossicini che attraversa il centro dello stomaco.
- Salina fredda può essere versato nello stomaco per migliorare la visibilità ed espellere il contenuto dello stomaco.
- Al fine di consentire la preparazione di laici piatto nel piatto dissezione utilizzare le forbicine per tagliare le tre denti gastrico.
- Pin lo stomaco giù nel piatto dissezione.
- Posto lo stomaco, ipoderma rivolta verso l'alto, in una soluzione salina piatto dissezione.
- Luogo perni insetti al labbro e ai quattro angoli creati quando lo stomaco è stato aperto. Per gli angoli anteriori perni luogo alto e vicino al bordo, per non disturbare gangli commissurali o inferiore nervi esofageo. Per i perni posteriori posto angoli leggermente alto per non disturbare il muscolo pilorico dilatatore.
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Discussion
Nel nostro laboratorio di dissezione dello stomaco aragosta viene fatto per accedere al sistema stomatogastric nervoso, una rete che controlla le contrazioni ritmiche dello stomaco. L'anatomia dello stomaco aragosta è stata ben descritta in precedenza 5-7, e si consiglia di familiarizzare con la sua anatomia. In questo modo si riduce il rischio di danneggiare i nervi delicati e muscolare.
Al termine della dissezione stomaco, varie parti del STNS possono essere ulteriormente sezionati. Ad esempio, per studiare giunzioni neuromuscolari, uno dei nervi STNS e il muscolo che innerva possono essere isolati. Il somata dei neuroni del ganglio stomatogastric è possibile accedere per la registrazione o il lavoro molecolare, isolando il ganglio stomatogastric. La dissezione del STNS, compreso il ganglio stomatogastric e nervi, è stato documentato in un Giove compagno articolo 4.
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Acknowledgments
Vogliamo ringraziare il nostro consulente, il dottor Eve Marder. Questa ricerca è stata finanziata dal National Institute of concede Salute NS17813 a Eve Marder e NS059255 di AE T.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Homarus americanus | Commercial Lobster | Can be purchased from any lobster supplier, We specifically request chicken” lobsters. | |
| Black Sylgard 170 | Dow Corning | 170 | |
| Preparation Dish | Fisher Scientific | 08-807 | Fill 2" with Black Sylgard 170. |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Insect Pins size 6 | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Mayo Scissors | This is a common product offered by many suppliers of dissecting tools. | ||
| Micro-Spatula | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | This is a very common product offered by many suppliers of lab tools. |
| Rongeurs | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Plastic hemostat | This is a common product offered by many suppliers of dissecting or jewelry making tools. |
References
- Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
- Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
- Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
- Tobin, A. E., Bierman, H. S. Homarus americanus stomatogastric nervous system dissection. J Vis Exp. 27, (2009).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
- Herrick, F. H. Natural history of the American Lobster. U.S. Bur. Fish. , 219-252 (1909).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
