Summary
We beschrijven de bruto-dissectie van de maag van de Amerikaanse kreeft (
Abstract
De maag van de Amerikaanse kreeft (
Protocol
- Voor dissectie van de kreeft moet worden begraven in het ijs gedurende 30 minuten om het dier te verdoven.
- Het geslacht van de kreeft kan worden bepaald door te kijken naar de vorm van de eerste swimmeret. Mannen hebben boney swimmerets en de vrouwtjes hebben vederlicht swimmerets.
- Isoleer de cephalothorax.
- Gebruik een draaiende beweging te rippen uit de voorste klauwen.
- Verwijder de buik (staart gedeelte) door gebruik te maken van de grote schaar om een diepe snee tussen het kopborststuk en de buik te maken. Hierdoor wordt de reus vezel traktaten het beheersen van de staart flip reactie. Ga dan verder af te snijden van de buik.
- Verwijder de antennes door knippen ze af met een schaar, en draai de benen en de derde maxillipeds.
- Verwijder het schild van rond de maag, (dwz het hoofd gebied tussen de cervicale groef en het podium).
- Beginnend op de laterale rand van deze paragraaf gebruik rongeurs en spatel voorzichtig verwijderen van de harde schaal, terwijl de rode onderliggende hypodermis intact. De spatel is handig voor het scheiden van de lagen, zodat het schild kan worden afgebroken met de rongeurs.
- Bewegen in de richting van de ogen vindt u bilaterale licht verkalkte kleine ovale borden (IIIa gehoorbeentjes). Zo dicht mogelijk bij deze gehoorbeentjes, voorzichtig los te maken van de spier van de gehoorbeentjes met de kleine schaar.
- Met behulp van spatel en rongeurs verwijderen rugschild van tussen de ogen en de staart gedeelte (ca. 1 centimeter) van het rostrum.
- Los het gezicht (regio, zoals de ogen, en rostrum).
- Met behulp van kleine schaar maken een horizontale dwars door de meest rostrale blootgesteld weefsel in het rostrum tot aan het los te maken van het exoskelet. Dan gebruik rand van de schaar en / of spatel voorzichtig caudaal rollen weefsel, net voorbij het niveau van de IIIa gehoorbeentjes.
- Vanaf dorsaal, gebruik maken van kleine schaar om de resterende weefsel los te maken van het gezicht exoskelet. Gesneden zo dicht mogelijk bij de harde schild mogelijk te maken, stoppen als je dicht bij het centrum en bevestiging van de mond.
- Van ventrale bekijk de kaken moet gemakkelijk zichtbaar zijn. Los de resterende maxillipeds.
- Zoek zachte lip onder de kaken.
- Maak lateraal bezuinigingen op het gezicht los terwijl de lip aan de maag. (Er is een licht gebogen blauwe buitenkant mond deel dat kan worden gebruikt als een gids.)
- Los en verwijder de maag.
- Houd de kreeft in de palm van je hand, buik-kant naar boven en zo dat het voorste einde is in de richting van je elleboog.
- Bevestig een hemostat aan de lip en laat de zwaartekracht trekt de hemostaat en de lip naar beneden en weg van de ventrale lichaam muur.
- Met behulp van een klein schaartje knippen kaken.
- Zoek de dorsale zijde van de ventrale lichaam muur, die een harde "shelf" ventraal aan lip en maag vormen. Juist onder de "shelf", zeer dicht bij het lichaam muur, over de gehele mediale-laterale middellijn. De hele ventrale zijde van de maag moet nu worden losgemaakt van het lichaam muur.
- Draai de kreeft, zodat de dorsale zijde is up. Snijd langs de rostrale rand van de cervicale groef, waar het schild werd verwijderd, en zachtjes trekt de maag uit.
- Los eventuele extra darmen die gehecht blijven aan de maag.
- Open de maag, en bereiden het voor pinnen.
- Houd de maag in de palm van uw hand met de hypodermis naar beneden. De hemostat moet nog worden bevestigd aan de lip en moet liggen tussen je vingers.
- Gebruik maken van kleine schaar om een ondiep anterior-to-posterior snijden te maken uit de mondopening (onder de lip) naar beneden door de ventrale zijde van de pylorus.
- Verder open te de maag, maken twee zijdelingse sneden langs de gehoorbeentjes die dwars over het midden van de maag.
- Koude zoutoplossing kan worden gegoten in de maag om de zichtbaarheid te verbeteren en te verdrijven maaginhoud.
- Zodat de voorbereiding op plat in het ontleden schotel gebruik maken van de kleine schaar om de drie maag tanden trim.
- Speld de maag in de dissectie schotel.
- Plaats de maag, hypodermis-kant naar boven, in een zoutoplossing gevulde dissectie schotel.
- Plaats insect pennen in de lip en de vier hoeken gemaakt wanneer de maag werd opengesteld. Voor de voorste hoeken plaats pinnen hoog en dicht bij de rand, niet te commissural ganglia of minderwaardig oesofageale zenuwen verstoren. Voor de achterste hoeken plaats pinnen enigszins hoog te voorkomen dat de pyloris dilatator spieren verstoren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
In ons laboratorium dissectie van de kreeft maag wordt gedaan om de stomatogastric zenuwstelsel, een netwerk dat de ritmische samentrekkingen van de maag regelt de toegang. De anatomie van kreeft maag is goed eerder 5-7 beschreven, en we raden om vertrouwd te raken met de anatomie. Daarmee vermindert het risico op beschadiging van de delicate zenuwen en spieren.
Na voltooiing van de maag dissectie, kunnen verschillende delen van de STNS verder worden ontleed. Bijvoorbeeld om neuromusculaire verbindingen, een van de STNS zenuwen studie en de spier innerveert het kan worden geïsoleerd. De somata van neuronen in de stomatogastric ganglion kan worden benaderd voor opnames of moleculaire werk door het isoleren van de stomatogastric ganglion. De dissectie van de STNS, inclusief de stomatogastric ganglion en zenuwen, is gedocumenteerd in een metgezel Jove artikel 4.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
We willen graag onze adviseur, dr. Eva Marder erkennen. Dit onderzoek werd ondersteund door het National Institute of Health beurzen NS17813 tot Eva Marder en NS059255 naar AE T.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Homarus americanus | Commercial Lobster | Can be purchased from any lobster supplier, We specifically request chicken” lobsters. | |
| Black Sylgard 170 | Dow Corning | 170 | |
| Preparation Dish | Fisher Scientific | 08-807 | Fill 2" with Black Sylgard 170. |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Insect Pins size 6 | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Mayo Scissors | This is a common product offered by many suppliers of dissecting tools. | ||
| Micro-Spatula | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | This is a very common product offered by many suppliers of lab tools. |
| Rongeurs | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Plastic hemostat | This is a common product offered by many suppliers of dissecting or jewelry making tools. |
References
- Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
- Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
- Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
- Tobin, A. E., Bierman, H. S. Homarus americanus stomatogastric nervous system dissection. J Vis Exp. 27, (2009).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
- Herrick, F. H. Natural history of the American Lobster. U.S. Bur. Fish. , 219-252 (1909).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
