Summary
Se describe la disección bruto del estómago de la langosta americana (
Abstract
El estómago de la langosta americana (
Protocol
- Antes de la disección de la langosta debe ser enterrado en el hielo durante 30 minutos para anestesiar a los animales.
- El sexo de la langosta puede ser determinado observando la forma de la primera swimmeret. Los varones tienen swimmerets óseas y las hembras tienen swimmerets plumas.
- Aislar el cefalotórax.
- Use un movimiento de torsión para estafar a las garras delanteras.
- Retire el abdomen (parte de la cola) mediante el uso de las tijeras grandes para hacer un corte profundo entre el cefalotórax y abdomen. Esto reduce los tractos de fibras gigantes que controlan la respuesta voltear la cola. A continuación, proceder a cortar el abdomen.
- Quite las antenas por el recorte de ellos con unas tijeras, y giro de las piernas y los maxilípedos terceros.
- Retire el caparazón de todo el estómago, (es decir, la región de la cabeza entre la ranura del cuello uterino y la tribuna).
- A partir del borde lateral de la sección de pinzas para el uso y la espátula para retirar con cuidado el caparazón duro, dejando la hipodermis subyacente rojizo intacto. La espátula es útil para la separación de las capas para que el caparazón se rompió con la gubia.
- Avanzar hacia los ojos a encontrar bilateral ligeramente calcificada placas pequeño óvalo (IIIa huesecillos). Lo más cerca posible a estos huesecillos, separar con cuidado el músculo de los huesecillos del oído con las tijeras pequeñas.
- Usando una espátula y pinzas para quitar caparazón de entre los ojos y la porción caudal (aproximadamente 1 centímetro) de la tribuna.
- Separe la cara (región, incluyendo los ojos y rostro).
- Con la tijera pequeña hacer un corte horizontal a través del tejido más rostral expuestos en la tribuna para separarlo del exoesqueleto. A continuación, utilice el borde de la tijera y / o una espátula para rodar con cuidado el tejido caudal, justo pasado el nivel de la cadena de huesecillos IIIa.
- A partir dorsal, use tijeras pequeñas para separar el tejido restante del exoesqueleto cara. Corte lo más cerca del caparazón duro como sea posible, se detiene cuando usted consigue cerca del centro y el apego de la boca.
- En la vista ventral de las mandíbulas deben ser fácilmente visibles. Separe maxilípedos restantes.
- Localizar los labios suaves en las mandíbulas.
- Haga cortes laterales para separar la cara mientras se mantiene el labio une al estómago. (Hay una parte ligeramente curvada azul boca externa que pueda ser utilizado como una guía.)
- Desmontar y retirar el estómago.
- Mantenga la langosta en la palma de su mano, la cara ventral y para que el extremo anterior se dirige hacia el codo.
- Coloque una pinza hemostática en el labio y dejar que la gravedad tire de la hemostasia y los labios hacia abajo y lejos de la pared ventral del cuerpo.
- Con la tijera pequeña cortada mandíbulas.
- Localice la cara dorsal de la pared ventral del cuerpo, que forma un duro "plataforma" para el labio ventral y el estómago. Corte justo debajo de la "plataforma", muy cerca de la pared del cuerpo, a través de todo medio-lateral la línea media. Toda la parte ventral del estómago ahora debe ser separada de la pared del cuerpo.
- A su vez de la langosta de manera que la parte dorsal está arriba. Corte a lo largo del borde rostral del surco cervical, donde se extirpó el caparazón, y tira suavemente el estómago hacia fuera.
- Separe los intestinos extra que permanecer unidos hasta el estómago.
- Abra el estómago, y prepararlo para la fijación.
- Mantener el estómago en la palma de la mano con la hipodermis hacia abajo. La pinza hemostática aún debe atribuirse a los labios y debe estar entre los dedos.
- Utilice unas tijeras pequeñas para hacer un poco anterior-posterior corte de la apertura de la boca (por debajo del labio) a través de la parte ventral del píloro.
- Para abrir aún más el estómago, hacer dos cortes laterales a lo largo de la cadena de huesecillos que atraviesa el centro del estómago.
- Solución salina fría puede ser vertido en el estómago para mejorar la visibilidad y expulsar el contenido del estómago.
- A fin de permitir la preparación para poner completamente en el plato de la disección de utilizar las tijeras pequeñas para recortar los tres dientes gástrico.
- Pin del estómago hacia abajo en el plato de la disección.
- Coloque el estómago, hipodermis hacia arriba, en un plato de la disección de solución salina.
- Coloque pasadores de insectos en los labios y las cuatro esquinas creado cuando el estómago se abrió. Por las esquinas anterior pines altura y cerca de la orilla, no molestar a los ganglios de la comisura inferior o nervios del esófago. Para los pines esquinas posteriores lugar un poco alta para no molestar el músculo dilatador del píloro.
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Discussion
En nuestro laboratorio, la disección del estómago de langosta se hace para tener acceso al sistema nervioso stomatogastric, una red que controla las contracciones rítmicas del estómago. La anatomía del estómago la langosta ha sido bien descrita previamente por 5-7, y se recomienda familiarizarse con su anatomía. Si lo hace, reducirá el riesgo de dañar los delicados nervios y músculos.
Una vez completada la disección del estómago, varias porciones de la STNS puede ser más disecados. Por ejemplo, para estudiar la unión neuromuscular, uno de los nervios y la STNS musculares que inerva puede ser aislada. Los cuerpos celulares de las neuronas en el ganglio stomatogastric se puede acceder a las grabaciones o en el trabajo molecular mediante el aislamiento del ganglio stomatogastric. La disección de la STNS, incluyendo el ganglio stomatogastric y los nervios, se ha documentado en un Júpiter compañero el artículo 4.
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Acknowledgments
Nos gustaría agradecer a nuestro asesor, el Dr. Eva Marder. Esta investigación fue financiada por el Instituto Nacional de Salud subvenciones NS17813 a Eva Marder y NS059255 a AE T.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Homarus americanus | Commercial Lobster | Can be purchased from any lobster supplier, We specifically request chicken” lobsters. | |
| Black Sylgard 170 | Dow Corning | 170 | |
| Preparation Dish | Fisher Scientific | 08-807 | Fill 2" with Black Sylgard 170. |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Insect Pins size 6 | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Mayo Scissors | This is a common product offered by many suppliers of dissecting tools. | ||
| Micro-Spatula | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | This is a very common product offered by many suppliers of lab tools. |
| Rongeurs | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Plastic hemostat | This is a common product offered by many suppliers of dissecting or jewelry making tools. |
References
- Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
- Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
- Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
- Tobin, A. E., Bierman, H. S. Homarus americanus stomatogastric nervous system dissection. J Vis Exp. 27, (2009).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
- Herrick, F. H. Natural history of the American Lobster. U.S. Bur. Fish. , 219-252 (1909).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
