Summary
Vi beskriver de grova dissektion i magen av den amerikanska hummern (
Abstract
Magen av den amerikanska hummern (
Protocol
- Före dissektion hummer bör bli begravd i is i 30 minuter att söva djuret.
- I kön hummer kan bestämmas genom att titta på formen på den första swimmeret. Hanar har Boney swimmerets och kvinnor har fjäderlätt swimmerets.
- Isolera cephalothorax.
- Använd en vridande rörelse för att slita av de främre klorna.
- Ta bort buken (svansen delen) med hjälp av stora saxar för att göra ett djupt snitt mellan de cephalothorax och buken. Detta skär jätten fiber trakter kontrollera svansen flip svar. Fortsätt sedan att skära av buken.
- Ta bort antennerna genom att klippa bort dem med sax, och skruva av benen och den tredje maxillipeds.
- Ta bort ryggskölden från runt magen, (dvs huvudet regionen mellan livmoderhalscancer spåret och i talarstolen).
- Från och med den laterala kanten av denna rongeurs avsnitt bruk och spatel för att försiktigt ta bort det hårda ryggskölden, medan den rödaktiga underliggande underhuden intakt. Spateln är användbart för att skilja lagren, så att ryggskölden kan brytas av med rongeurs.
- Rör sig mot ögonen du hittar bilaterala lätt förkalkade små ovala plattor (IIIa hörselbenen). Så nära som möjligt till dessa hörselbenen, försiktigt loss muskeln från hörselbenen med en liten sax.
- Använda spatel och rongeurs bort ryggskölden från mellan ögonen och den bakre delen (ca 1 cm) i talarstolen.
- Lossa ansiktet (regionen inklusive ögonen, och talarstol).
- Använda en liten sax göra en horisontell spänner över de mest utsatta rostralt vävnad i talarstolen för att ta loss den från exoskelett. Använd sedan kanten av saxar och / eller spatel för att rulla försiktigt vävnaden caudally, precis förbi nivå IIIa hörselbenen.
- Starta dorsalt, använd en liten sax att lösgöra kvarvarande vävnad från ansiktet exoskelett. Skär så nära den hårda ryggskölden som möjligt, stannar när du får nära centrum och fastsättning munnen.
- Från ventrala visa mandibles skall vara väl synliga. Lossa resterande maxillipeds.
- Leta mjuka läppar under mandibles.
- Gör laterala nedskärningar bort ansiktet och samtidigt hålla läppen fäst i magen. (Det finns en lätt böjd blåaktigt yttre munnen del som kan användas som vägledning.)
- Lossa och ta bort magen.
- Håll hummer i handflatan, ventrala uppåt och så att den främre änden är mot din armbåge.
- Bifoga en hemostat på läppen och låta gravitationen dra hemostat och läpp ner och bort från den ventrala kroppen väggen.
- Använda en liten sax klippa ut mandibles.
- Leta ryggsidan av den ventrala kroppen väggen, som utgör en hård "hylla" ventral till läpp och mage. Snitt strax under "hyllan", mycket nära kroppen väggen, över hela mediala-laterala mittlinjen. Hela ventrala sidan av magen ska nu tas bort från kroppen väggen.
- Vänd hummer så att den ryggsidan är uppe. Klipp längs rostralt kanten av livmoderhalscancer spåret, där ryggskölden togs bort, och försiktigt drar magen ut.
- Lossa någon extra tarmar som sitter kvar på magen.
- Öppna magen och förbereda den för fastlåsning.
- Håll magen i handflatan med underhuden och ner. Den hemostat bör fortfarande vara ansluten till läppen och bör ligga mellan fingrarna.
- Använd en liten sax för att göra en ytlig anterior-to-posterior klipp från munnen öppnas (under läppen) ner genom ventrala sidan av pylorus.
- För att ytterligare öppna magen, göra två tvärgående snitt längs hörselbenen som löper över mitten av magen.
- Kallt koksaltlösning kan hällas in i magen för att förbättra sikten och utvisa maginnehållet.
- För att möjliggöra förberedelse att lägga lägenhet i dissekera maträtt använda en liten sax för att trimma de tre mag tänderna.
- Pin magen ner i dissekering skålen.
- Placera magen, underhuden uppåt, i en saltlösning fyllt dissektion skålen.
- Placera insekt stiften i läppen och de fyra hörnen skapas när magen öppnades. För de främre hörnen plats stift hög och nära kanten, att inte störa commissural ganglierna eller sämre matstrupen nerver. För de bakre hörnen plats stift något för högt för att inte störa pyloric dilator muskeln.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I vårt laboratorium dissekering av hummer magen görs för att få tillgång till stomatogastric nervsystemet, ett nätverk som styr rytmiska sammandragningar i magen. Anatomi av hummer magen har blivit väl beskriven tidigare 5-7, och vi rekommenderar att bli bekant med dess anatomi. Om du gör det kommer att minska risken för skador på känsliga nerver och muskler.
Efter avslutad magen dissektion kan olika delar av STNS ytterligare dissekeras. Till exempel för att studera neuromuskulära korsningar, en av de STNS nerver och muskler den innerverar kan isoleras. Den somata av nervceller i stomatogastric ganglion kan nås för inspelningar eller molekylärt arbete genom att isolera stomatogastric ganglion. Dissekering av de STNS, inklusive stomatogastric ganglion och nerver, har dokumenterats i en kamrat JUPITER artikel 4.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Vi skulle vilja att erkänna våra rådgivare, Dr Eva Marder. Denna forskning stöds av National Institute of Health bidrag NS17813 för Eva Marder och NS059255 till AE T.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Homarus americanus | Commercial Lobster | Can be purchased from any lobster supplier, We specifically request chicken” lobsters. | |
| Black Sylgard 170 | Dow Corning | 170 | |
| Preparation Dish | Fisher Scientific | 08-807 | Fill 2" with Black Sylgard 170. |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Insect Pins size 6 | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Mayo Scissors | This is a common product offered by many suppliers of dissecting tools. | ||
| Micro-Spatula | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | This is a very common product offered by many suppliers of lab tools. |
| Rongeurs | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Plastic hemostat | This is a common product offered by many suppliers of dissecting or jewelry making tools. |
References
- Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
- Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
- Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
- Tobin, A. E., Bierman, H. S. Homarus americanus stomatogastric nervous system dissection. J Vis Exp. 27, (2009).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
- Herrick, F. H. Natural history of the American Lobster. U.S. Bur. Fish. , 219-252 (1909).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
