Summary
В этом видео показано, как использовать доклинических недорогой и надежной моделью для изучения патобиологические и патофизиологические процессы в стентов рестеноз развития. Продольные в естественных условиях мониторинг с использованием октября (оптической когерентной томографии) и анализа изображений октября также продемонстрирована.
Abstract
Доклинических моделях рестеноза необходимы, чтобы разгадать патофизиологические процессы, приводящие к в-стент рестеноза и оптимизации существующих и будущих стентов с лекарственным покрытием.
Разнообразие антител и трансгенных и нокаут штаммов имеются у крыс. Следовательно, модель в-стент рестеноза у крыс было бы удобно для патобиологические и патофизиологических исследований.
В этом видео мы представляем полный порядок и пит-падений крысы стента модели, пригодной для высокой пропускной способности стента исследований. Мы покажем, хирургические процедуры установки стента, и оценки в стентов рестеноз использованием самой элегантной техникой октября (Оптическая когерентная томография). Эта технология обеспечивает высокую точность в оценке доска ССП (кросс областях раздел) и хорошо коррелирует с гистологических срезов, которые требуют особого и трудоемким методам вложения и секционирования. Октябрь изображений в дальнейшем позволяет продольной мониторинг развития в стентов рестеноз в течение того же животного по сравнению с одноразовой моментальных снимков с помощью гистологии.
Protocol
Аортального стента
- Мужской Sprague-Dawley крыс весом 550-600 г закупаются у Харлан (Индианаполис, Индиана, США). Дом крыс в обычных условиях, кормили стандартной крыс кормом и водой вволю.
- Обезболить крысы с изофлуран (2%) и кетамина (25 мг / кг). Под микроскопический взгляд, выполняют верхней срединной мини-лапаротомии выявить инфраренального аорты.
- Рассеките брюшной аорты от окружающих тканей, от уровня почечных артерий до развилки. ВНИМАНИЕ: Не нужно препарировать аорты от IVC.
- Используйте microclamps остановить аортального кровотока. Место проксимальных зажим первым, затем дистальная зажимом.
- Открытое аорты с малым поперечным разрезом и промойте аорты с гепарином (200 единиц).
- Эндотелия аорты является оголенный по прохождению 2-французский артериального катетера Фогарти эмболэктомия (Baxter Healthcare, Дирфилд, штат Иллинойс, США).
- Используйте любой человеческой стент размером между 8 мм и 12 мм в длину и 2,5 мм, 3 мм в диаметре. ВНИМАНИЕ: диаметр стента не должна превышать диаметр сосуда более чем на 10%, чтобы избежать пре-и пост-стента стеноза. ВНИМАНИЕ: Не включайте длины стента в рамках одного исследования.
- Развертывание стента использованием соответствующего давления воздушный шар, чтобы достичь желаемого диаметра.
- Небольшой разрез аорты закрыто с 9-0 швов Prolene (Ethicon, Нордерштедт, Германия).
- Закрыть разреза брюшной полости в слоях с 4-0 Викрил работает швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия).
Кожные швы все равно должны быть сняты в течение 7-14 дней, даже если Viacryl используется. - Животные получили Carprofen (6mg/KG) во время операции и в течение 7 Метамизол более дней в питьевой воде.
Оптической когерентной томографии (ОКТ) изображений
Октябрь изображения, полученные с М2 октября визуализации системы (LightLab Imaging, Inc, Westford, штат Массачусетс, США). ImageWire является изображение зонда для доставки свет ткани и собирать сигналы. ImageWire состоит из 0,006 "(0,15 мм), волоконно-оптических ядро, внутри оболочки с максимальной оптической плотности 0,019" (0,48 мм).
- Обезболить крысы с изофлуран (2%) и кетамина (25 мг / кг). Под микроскопический взгляд, выполнить средний лапаротомии повтор подвергать инфраренального аорты.
- Зажим проксимальной аорты и оба подвздошной артерии.
- Выполните поперечный arteriotomy на дистальном конце аорты, на одном уровне с 1 мл PBS использованием катетера 28G и вставить катетер октября и направить его в аорту.
- Моторизованный откат октября изображений осуществляется на откате скоростью 1,0 мм в секунду.
- Получение изображений со скоростью 15 кадров в секунду; изображения отображаются с цветным справочной таблицы и в цифровой архив.
- Закрыть arteriotomy.
- Закрыть брюшной полости и разрезов с 4-0 Викрил работает швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия).
Кожные швы все равно должны быть сняты в течение 7-14 дней, даже если Viacryl используется. - Максимальная образования неоинтимы будет развиваться в течение 6 недель после имплантации стента.
Анализ изображений октября
Октябрь измерения выполняются с помощью LightLab октября изображений проприетарное программное обеспечение с крысой-интерфейс.
- Калибровка системы отражения проволоки октября обработки изображений, которая стандартной методике калибровки для этой системы.
- Трассировка просвет стента и поперечного сечения области (CSA) вручную на каждом 1,0 мм интервалами.
- Рассчитать доска площадь поперечного сечения, как стент CSA вычитается из просвета CSA. Рассчитать процент доска области, как доска делится на CSA CSA стента (%). Рассчитать среднюю областях доска процентов.
Проверка техники октября
Октябрь результаты хорошо коррелируют с гистопатология (рис. 1). Гистологическое ССП доска рассчитываются как описано выше. Гистология показывает гиперплазии интимы с высокой плотностью веретенообразных клеток, и лишь немногие мононуклеарных клеток воспаления. После 6 недель, стенты полностью покрыты неоинтимы грануляционной ткани и доска CSA меры 1,3 ± 0,4 мм 2 в 2,5 стента.
Рисунок 1: Октября (А) и гистологические (B; увеличение 16х) изображения стентов через 6 недель после развертывания. Зубной налет CSA результаты, полученные из изображений октября хорошо коррелируют с гистопатологии. Пожалуйста, нажмите здесь , чтобы видеть большую версию рисунке 1.
Discussion
Хотя артерии кролика подвздошных и свиньи коронарной артерии модели являются наиболее часто используются для установки стента 1, сочетание радиологического и хирургического оборудования не требуется, емкости содержания животных ограничен, а затраты на приобретение высоки. Ограничения крысы стента модель необходимым использование специально разработанных стентов для крыс, металл-артерии соотношение в результате чего более повреждение сосудов 2, и искусственно высокая частота тромбоза 3.
Модель крысы стентирование простой, недорогой, быстрый и точный доклинических 4 модели. После первоначального доклада прямое стентирование аорты крыс от Lowe и соавт. 5, осуществимость и пригодность этой модели для оценки патофизиологии в стентов рестеноз был тщательно показал 5,6. Диаметр аорты крыс достаточно, чтобы расширение имеющихся в продаже стентов без нарушения физиологических архитектуры судна. Было показано, что патофизиологические механизмы, такие как образование тромба, воспаления и SMC распространение, развитие в этих крыс моделей, как это делают в кроликов и свиней. Таким образом, эти модели являются хорошими представлениями сам процесс рестеноза.
Октябрь изображений с высоким разрешением технология полезна для оценки гиперплазии интимы. Глубина проникновения лишь 1,5-2 мм, а его разрешение составляет на порядок больше, чем внутрисосудистое ультразвуковое исследование (ВСУЗИ) 7,8. Несколько исследований, сравнивающих октября с ВСУЗИ сделать вывод, что октябрь в настоящее время предпочтительным методом для оценки неоинтимы гиперплазии после стента 8-10 имплантации. Особенно в маленьких животных небольшого диаметра сосуда, высокое разрешение октября выводит его из лучших изображений методом для оценки рестеноза.
В целом, это видео показывает, что (1) стентирование аорты крыс легко осуществимо, (2) крысы брюшной аорты стентирование подходит для тестирования коммерчески производства стентов и (3) октября изображений является точной и элегантной техникой для продольной мониторинг в-стент рестеноз.
Disclosures
Все крысы были помещены в центр ухода за животными в Стэнфордском университете Медицинского центра (Stanford, Ca), при стандартной температуре, влажности и освещенности, а также были предоставлены крысы чау и воду вволю. Исследование соответствовали Руководство по уходу и использованию лабораторных животных опубликованы американским Национальным институтом здоровья (NIH публикация № 85-23, пересмотренная 1996). Протокол исследования был одобрен Административным группы экспертов по Уходу за животными лаборатории Стэнфордского университета.
Acknowledgments
Финансирование
Настоящее исследование было поддержано Фондом Фальк исследовательского департамента Кардиоторакальная хирургии в Стэнфордском университете Школа Медицины, Стэнфорд, Калифорния, США. Тобиас Deuse было профинансировано исследовательский грант от немецкого Сердечная общества. Соня Schrepfer получил грант от Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/2-1).
References
- Langeveld, B., Roks, A. J. M. Commentary: rat restenosis models: means for thorough restenosis research. Journal of endovascular therapy. 12 (3), 343-345 (2005).
- Roguin, A., Grenadier, E. Stent-based percutaneous coronary interventions in small coronary arteries. Acute Card Care. 8, 70-74 (2006).
- Post, M. J., Waltenberger, J. Small Is Beautiful: A Miniature Stent Model. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27, 701-702 (2007).
- Langeveld, B., Roks, A. J. M., Tio, R. A., Boven, A. J. van, Want, J. J. L. vander, Henning, R. H. Rat abdominal aorta stenting: a new and reliable small animal model for in-stent restenosis. Journal of vascular research. 41 (5), 377-386 (2004).
- Lowe, H. C., Chesterman, C. N., Khachigian, L. M. Rat aortic stenting: toward a simple model of in-stent restenosis. The American journal of cardiology. 88 (6), 720-721 (2001).
- Groenewegen, R., Harst, R. vander, Roks, R., Buikema, R., Zijlstra, R., Gilst, R. van Effects of angiotensin II and angiotensin II type 1 receptor blockade on neointimal formation after stent implantation. International Journal of Cardiology. , (2007).
- de Smet, B. J. G. L., Zijlstra, F. A look at drug eluting stents with optical coherence tomography. European Heart Journal. 28 (8), 918-919 (2007).
- Pinto, T. L., Waksman, R. Clinical applications of optical coherence tomography. Journal of interventional cardiology. 19 (6), 566-573 (2006).
- Matsumoto, D., Shite, J., Shinke, T., Otake, H., Tanino, Y., Ogasawara, D. Neointimal coverage of sirolimus-eluting stents at 6-month follow-up: evaluated by optical coherence tomography. European Heart Journal. 28 (8), 961-967 (2007).
- Kawase, Y., Suzuki, Y., Ikeno, F., Yoneyama, R., Hoshino, K., Ly, H. Q. Comparison of nonuniform rotational distortion between mechanical IVUS and OCT using a phantom model. Ultrasound in medicine & biology. 33 (1), 67-73 (2007).