血红素加氧酶1表达上调在刮痧过程中的生物发光成像

Summary

中国传统的治疗皮肤刮，刮痧，导致皮下微血管的血液外渗。我们报告一个HO - 1的生物发光成像的协议

Abstract

刮痧是一种传统的中国民间疗法，采用皮肤刮引起皮下微血管的血液外渗和瘀伤。发光的光学成像协议HO - 1 -

Protocol

1. 女HO - 1的荧光素酶的转基因小鼠（年龄4-6周）可从Taconic的农场，公司购买的，到达目的地后，小鼠被放置至少4天，让住宿在畜舍设施。
2. 生物发光成像的准备工作：
   1. 称量每个HO - 1的鼠标。动物的体重是需要计算的荧光素的用量。
   2. 脱毛：用棉花交换申请超过头发卸妆奈尔®腹部和/或背面的动物。等待5到10秒。使用干净的棉布擦去头发的交换。浸在蒸馏水中的组织片擦拭干净剩余的头发。
   3. 将非荧光IVIS 100站，以减少背景噪音的成像平台上的黑纸（斯特拉斯莫尔Artagain ®黑纸）。
   4. 准备荧光素（精诺真公司）在浓度为7.5毫克/毫升（溶于无菌H _{2 O）}的解决方案。荧光素的剂量是65.5毫克/公斤体重。因此，20克的鼠标需要0.175毫升荧光素溶液腹腔注射。要做到这一点，单次注射量的荧光素溶液（0.175毫升）预装，以26号针头注射器
3. 刮痧过程：刮痧只适用于一次运行前的生物发光成像协议。由于刮痧是不痛，鼠标只需要简要麻醉异氟醚，以保持冷静。刮痧的过程包括以下步骤：
   1. 应用食油或蒸馏水润滑几次有针对性的刮痧在刮痧过程中的皮肤区域。
   2. 反复刮在温柔但坚定的力量，使用陶瓷汤匙或塑料勺鼠标背面的头发自由的地区。
   3. 刮继续，直到背部皮肤变红，这是一种皮下血液外渗的符号，通常在2至3分钟内取得。
4. 生物发光成像可能会刮痧后立即或几个小时，HO - 1表达上调是建立了几个小时，慢慢开始。生物发光成像的过程是：
   1. 麻醉在麻醉诱导室充满了异氟醚（1.5％），医疗级空气的混合物鼠标。
   2. 一旦鼠标被麻醉，将鼠标移动到成像室IVIS 100光学成像站。在仰卧姿势（腹部）鼠标的位置。成像室不断注入与异氟醚1.5％。成像平台加热至37 ° C至按住鼠标温暖。
   3. 设置在“中等分级”的影像采集和设置曝光时间是30秒。开始采集图像。机器设置重复成像收购每三分钟，手动或自动。收购后的第一个图像，利息率（ROI）的地区绘制覆盖腹部，胸部和头部区域。这个投资回报率，然后复制并粘贴到下面的图像，使用“生活图像®”，软件附带的IVIS 100站。
   4. 信号强度测量光子每秒。马克的时间，信号强度达到其峰值，并保持约5至10分钟后，高峰时间成像鼠标。
   5. 当在仰卧位成像收购完成后，翻转鼠标，并奠定在俯卧位（备份）。继续成像的投资回报率5至10分钟，现在提请盖在使用该软件的“生活图像®”的背部和头部区域的动物。仰卧位后俯卧位成像的选择是任意的。你可以选择开始与俯卧位，取决于感兴趣的主要机关。另一种选择是在不同的实验仰卧和俯卧位的图像。
   6. 当俯卧位成像收购完成后，关闭异氟醚和移动鼠标到感应室从成像室恢复。感应室是现在注入医用空气和鼠标通常在不到一分钟被唤醒。
   7. 保存处理后的成像数据。
   8. 最初的成像研究后，额外的影像收购进行了好几天后，刮痧。一个样品的时间表是重复在^12个小时^，24个小时^，36个小时^，48个小时，第⁷²届小时和^120个小时的成像，但成像时间表的确切时间是灵活的。如果需要一个较长的后续会议可能会增加额外的影像。在成像之前，重复的头发，如果头发已经成长回删除程序。
5. 为对照组，重复所有程序，但跳过刮痧（步骤3）。如果同组的小鼠是用于控制和刮痧，控制EXPeriment应最好在刮痧过程或至少一个月之后。

代表性的成果：

图生物发光图像显示在体内上调HO - 1的回应刮痧。在图2中的图表显示了定量全身刮痧相同的鼠标光学通量（光子/秒）的时间超过120小时的变化... ...

图1左起正确的，有代表性的图像刮痧之前相同的鼠标前视图（平卧），在18个小时，36小时和120小时后刮痧，分别为。刮痧后，观察到显着的信号强度的增加在多个器官，其中包括胃肠道，生殖道，肝脏，肾脏（从后面查看，不显示），以及其他地区的进展。请点击这里为图1的放大版本。

图2。量变超过120个小时的跟踪的全身通量（光子/秒），在图1的相同的鼠标刮痧。请点击这里看大图图2。

Discussion

，血红素加氧酶的诱导形成，HO - 1的转录上调的因素很多，包括血红素，过氧化氢，紫外线照射，缺氧，和物理应力。如全身显像报道，HO - 1生物发光协议提供了一个全身多个器官中的表达，HO - 1的快照。在小动物，生物发光成像允许高灵敏度体内实时定量全身基因表达的改变纵向光学评估，如图所示。生物荧光分子成像，降低了成本，增加了小动物的基因表达分析的吞吐量，使得实际，迅速实现统计力量，需要复杂的系统生物学假说调查和评估系统性影响的建议的药品和其他治疗干预。一个限制是低空间分辨率的解剖。新的光学成像系统层析能力将缓解这一问题。显微CT或小动物MRI图像采集和登记，将有助于正确识别解剖。其他限制低光通过组织渗透和转基因动物的需要。这些基本上排除翻译，以较大的动物或人类使用，但不是一个小动物的系统生物学或临床前治疗的假设检验的显着的缺点。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Luciferin	Caliper Life Sciences	P/N 122796	Previously Xenogen
IVIS 100	Caliper Life Sciences		Previously Xenogen