Summary
Шаг за шагом ведет к генерации целевого химерных эмбрионов данио путем трансплантации в бластулы или гаструлы.
Abstract
Один из самых мощных инструментов, используемых, чтобы разобраться в сложных процессах развития является анализ химерных эмбрионов. Химера определяется как организм, который содержит клетки, из более чем одного животного; мозаики являются одним из типов химер, в которых клетки из более чем одного генотипа смешиваются, обычно дикого типа и мутанта. В данио, химеры могут быть легко сделаны трансплантации клеток от донора эмбриона в хост эмбриона на соответствующие зачаточном состоянии. Меченых клеток донора генерируются путем инъекции линии маркера, такие, как флуоресцентный краситель, в один-клеточной стадии эмбриона. Меченые клетки донора будут удалены из доноров эмбрионов и внедрена в немеченого эмбрионов хоста с помощью масла контролируемого пипетки стекла установлен на любой соединения или рассекает микроскопом. Донорские клетки в некоторых случаях может быть направлена на конкретного региона или ткани развивающихся бластулы или гаструлы зародыш хост этапе, выбрав трансплантации сайта в принимающей эмбрион на основе четко установленных карт судьбы.
Protocol
Шаг за шагом ведет к генерации целевого химерных эмбрионов данио путем трансплантации в бластулы или гаструлы.
Один из самых мощных инструментов, используемых, чтобы разобраться в сложных процессах развития является анализ химерных эмбрионов. Химера определяется как организм, который содержит клетки, из более чем одного животного; мозаики являются одним из типов химер, в которых клетки из более чем одного генотипа смешиваются, обычно дикого типа и мутанта. В данио, химеры могут быть легко сделаны трансплантации клеток от донора эмбриона в хост эмбриона на соответствующие зачаточном состоянии. Меченых клеток донора генерируются путем инъекции линии маркера, такие, как флуоресцентный краситель, в один-клеточной стадии эмбриона. Меченые клетки донора будут удалены из доноров эмбрионов и внедрена в немеченого эмбрионов хоста с помощью масла контролируемого пипетки стекла установлен на любой соединения или рассекает микроскопом. Донорские клетки в некоторых случаях может быть направлена на конкретного региона или ткани развивающихся бластулы или гаструлы зародыш хост этапе, выбрав трансплантации сайта в принимающей эмбрион на основе четко установленных карт судьбы.
Часть 1: Потребление инъекционных данио рерио эмбрионов в 1-клеточной стадии.
- Ферментативный dechorionation 1-клеточных эмбрионов стадии.
Для протеолитически dechorionate эмбрионов, инкубировать в 1-клеточной стадии для ~ 1-5 'в 0,5 мг / мл проназы раствора, как описано в данио рерио Книга 1. Монитор dechorionation тесно и погрузиться в эмбрионы Эмбрион Средняя (ЭМ) с ручкой / Strep 1, как только chorions начинают заметно краха. После освобождения от их chorions, бластулы и гаструлы эмбрионов этапе являются хрупкими, и будет придерживаться пластика или разрушаются при соприкосновении с воздухом. Поэтому храните dechorionated эмбрионов погружен в Pen / Strep EM, передачи между блюда с использованием широким отверстием огневой полировкой пипетка стекло, и поддерживать в любом агар покрытые пластиковой посуды (1,2% агарозы в Pen / Strep EM) или автоклавного стеклянные чашки Петри. - Потребители инъекционных dechorionated эмбрионов с линии маркера.
Подготовка инъекций блюдо, вставляя стекло на 45 градусов по широкой части чашки Петри на три четверти из 1,2% агарозы, сделанные в Pen / Strep EM. Удаление слайда после затвердевания агарозном листьев скошенными корыта. Передача dechorionated эмбрионов в желоб инъекции блюдо заполнено Pen / Strep EM. Inject 1nl объемы линии маркера использованием точно калиброванный пожарной вытащил стеклянную пипетку впрыска и установка давление впрыска, как описано в книге данио рерио 1. Inject красителей и низким молекулярным весом трейсеров линии непосредственно в желток dechorionated эмбрионов между 1 - и 4-элементным этапов. 3% раствор флуоресцентного декстран достаточным для выявления доноров клеток, полученных в химерные эмбрионы через несколько дней развития. Когда линии маркера мРНК, кодирующей флуоресцентный белок (например, GFP или RFP), вводят непосредственно в ячейке ранней 1-клетка стадии эмбриона. - Потребители инъекционных без dechorionated эмбрионов с линии маркера.
Подготовка нескольких хорошо блюда впрыском затвердевания 1,2% агарозы в EM вокруг плесень с колодцами примерно такой же ширины, как хорион диаметре. Передача не-dechorionated эмбрионов в мульти-и инъекции блюдо наполовину заполненной с ручкой / Strep EM. Удалите излишки жидкости. Таким образом иммобилизованные, эмбрионы могут быть введены с 1nl объемы линии маркера, как описано выше. - Повышение вводится эмбрионов для трансплантации.
Поднимите эмбрионов при низкой плотности (40-50 эмбрионов на чашку) в пресной Pen / Strep EM. Этап матча донора и реципиента эмбрионов для трансплантации довольно тесно. За щитом этапе трансплантация, стремиться к донорам немного отстают Саваоф: обратите внимание, что вводят эмбрионы имеют тенденцию быть немного задерживается. Инкубируйте эмбрионов при различных температурах, 25 ° С, 28 ° C и 31 ° С, чтобы поразить их развития и максимальной экономии времени, окно, над которым трансплантация может быть выполнена.
Часть 2: Создание химерных эмбрионов данио по трансплантации.
- Трансплантации бластулы этапов на стереомикроскопа
- Описание установки для пересадки бластулы
Аппарат, используемый для трансплантации клеток в данио бластулы состоит из микрометра диск контролируемых Гамильтон шприца (10 л-50 л), который прилагается к трехходового крана в резервуар нефтепродуктов и микропипетки держателя через длину гибкого шланга . После сборки установки трансплантации, он наполнен минеральным маслом, заботясь, чтобы устранить все пузырьки воздуха из системы. Наличие воздушных пузырьков окажет негативное воздействие на вашу способность контролировать говсасывания электронной и давления. Используйте стереомикроскопа с достаточно большим увеличением и хорошей оптикой (в идеале по крайней мере 80x увеличение). Позиционирование держатель микропипетки и иглу можно управлять с помощью микроманипулятора ручной Narishige, а для инъекций, однако, если база стереоскоп слишком широк для обеспечения легкого доступа с микроманипулятора, то адаптер, который крепится к корпусу стереомикроскопа также может быть приобретен у Narishige. Монтаж микроманипулятора должны быть очень стабильными, чтобы избежать передачи вибрации на пересадку иглы; магнитным основанием работает хорошо для этой цели. - Подготовка трансплантации пипетки
Трансплантация иглы изготавливаются из стеклянной капиллярной пипетки (см. два варианта ответа в таблице ниже реагенты), которые тянутся к нежным конус на электрод съемника. Перерыв кончике иглы с при вскрытии микроскопом с использованием прямой лезвие бритвы края в точке, где внутренний диаметр иглы немного больше, чем клетки для пересадки. Держите лезвие бритвы под небольшим углом, чтобы создать конических и сделать перерыв как можно более гладко, без зубчатых краев. Для пересадки стадии бластулы наружный диаметр иглы должны измерять примерно 50-60 мм. - Монтаж эмбрионов для трансплантации в агар формы
Подготовка инъекций посуду плавающие пластиковые формы с рядами клиновидных выступов в чашке Петри, что заполнена наполовину расплавленной 1,2% агарозы в EM. После агарозном укрепил, удалить шаблон, оставив агар плесени, содержит строки треугольной формы скважин каждой достаточно большой, чтобы провести один эмбрион. Заполните форму с трансплантацией Pen / Strep EM и нагрузки бластулы эмбрионов стадии индивидуально в каждую лунку с огнем полированного стекла пипетку так, чтобы доноров эмбрионов помещают вниз на одну колонку и хост эмбрионы помещают вниз соседнем столбце. - Пересадка клетки
Позиция эмбрионов в пересадке скважин на боку; переместить с пересадкой пипеткой по мере необходимости во время пересадки, стараясь не проколоть желток. Поместите блюдо на сцене так, что когда игла входит трансплантации эмбрионов, иглы толкает эмбриона у задней стены ее хорошо. Использование микроманипулятора, снижение трансплантации иглу в блюдо на довольно крутым углом. В идеале иглы трансплантации должны войти эмбриона примерно в 45-градусный угол. Как только кончик иглы находится ниже поверхности зародыша среды, привлечь небольшое количество эмбрионов среды в иглу, поворачивая микрометра диск управления шприцем Гамильтон. Для наиболее точного контроля, интерфейс между нефтепродуктов и эмбрион среда должна оставаться в тонкие, конической части иглы, но не слишком близко к концу. Аккуратно позицию доноров эмбрионов с иглой, а затем обратить иглу и введите бластулы шапка эмбриона на нужное место. Быстрый, жесткий удар будет проникать эмбриона, не вызывая его на рулоне. Составить донорских клеток медленно и осторожно в иглу. Если клетки будут взяты слишком быстро, они, вероятно, сдвига. Также избегайте желтком вверх в иглу, так как он связывается с минеральным маслом, которое затем убивает клетки. После желаемого количества клеток занимает, обратное давление немного остановиться всасывания и удалить иглу из эмбриона. Принесите хост эмбриона в положение, перемещая трансплантации блюдо. Небольшие изменения в положении эмбриона хост может быть сделано, осторожно поворачивая его использования иглы трансплантации, до тех пор, как осторожность, чтобы не трогать желток. При исключении донорских клеток в эмбрион хозяин, не вводить большое количество средних эмбриона или минеральное масло, так как это может помешать развитию или убивать зародыш. Положение ячеек по животным-вегетативной оси влияет на их вклад в один из трех зародышевых листков, энтодермы, мезодермы и эктодермы 2,3. Соответственно, клетки трансплантировали близко к краю до начала гаструляции вызовет преимущественно с энтодермы и мезодермы, тогда как клетки, пересаженные в сторону животного полюс будет способствовать эктодермального судьбы, наиболее часто поверхности эктодермы, переднего мозга и глаз. Таким образом степень ориентации ткани может быть достигнуто даже при бластулы этапов. После перевода ячейки были закончены, передача доноров-хозяин пары агар лунок из 24-луночный планшет, чтобы развиваться дальше.
- Пересадка на стадиях гаструлы на соединение микроскопом
- Описание пересадки установки
Сотовые переводов осуществляется на выгоду из сложного микроскопа точно контролировать положение иглы предоставляемые трехосный гидравлическихмикроманипулятора. Это микроманипулятора контроля тонких движений по пересадке пипетки, в то время всасывание в пипетку контролируется микрометром-диск Гамильтон шприц аналогичный тому, который используется для бластулы трансплантации. Прямой микроскоп соединения с фиксированными этапе предпочтительнее для выполнения ячейки переводов с такими фокусировки микроскопа не вызывает эмбриона перемещаться относительно пипетки. Однако, если регулируемая стадии сложного микроскопа должны быть использованы, то микроманипулятора может быть установлен на сцену, а не к телу микроскоп с тем же эффектом. Адаптеры, которые предоставляют варианты для установки микроманипулятора либо сцены или тело сложных микроскопов от различных производителей также доступны Narishige. - Подготовка трансплантации пипетки
Трансплантация иглы изготавливаются по существу, как описано выше, для трансплантации гаструлы идеальное отверстие иглы 30-40 мм. После щит формирования, обволакивающее слой (EVL) становится прочнее, что делает его трудным для трансплантации игла проникнуть эмбриона. Чтобы облегчить ввод иглы, вытащить шип на конце иглы использованием microforge. Во-первых, гладкий кончик иглы приближая его к нити microforge, а затем включите иглу так, чтобы передняя кромка конической может вступить в контакт с нитью. Как только передний край иглы контакты нить, протяните ее быстро прочь создать шип, или гарпуна. Во избежание повреждения клеток, бородки должны быть прямыми и кончик иглы не должны кривой - Монтаж эмбрионов для трансплантации в метилцеллюлозы
Для пересадки сложного микроскопа, смонтировать эмбрионов на депрессию слайда в 3% раствор метилцеллюлозы (Sigma), растворенные в зачаточном состоянии среды. Во-первых, мазок вертикальная полоса метилцеллюлозы в депрессию предметное стекло депрессии, то наводнение с щедрым количеством эмбрионов среды. Использование огневой полировкой пипетки, передача одного донора и три щита стадии хостов под поверхностью EM на депрессию слайдов на одной стороне метилцеллюлозы. Выберите доноров эмбрионов, которые немного моложе, чем хостов (30-50% epiboly). С небольшую петлю сделал склеиванием концов короткая длина 2-фунт лески испытания в конце капилляра, мягко ролл донора и реципиента эмбрионов подняться на вершину метилцеллюлозы полосы и запихивать их вниз, в метилцеллюлозы пока в безопасности. Если пересаженные клетки должны быть ориентированы на конкретный домен, знание судьбы этапе щит карте 3,4 и положение ткани-мишени по отношению к щит необходим для того, что хозяин эмбрионы могут быть установлены правильно. В качестве принимающей эмбрионы помещают в метилцеллюлоза, обвалять их в положение, чтобы целевом регионе является верхней, так как при пересадке игла войдет эмбриона касательной для доставки донорских клеток, не повреждая желтка. - Пересадка клетки
Позиция трансплантации игла, перемещая его в фокальной плоскости эмбриона. Первый акцент на доноров эмбрионов использовании 10x цели. Затем переместите эмбрион в сторону, и без корректировки фокальной плоскости, с помощью элементов управления из микроманипулятора довести кончике иглы пересадки в центре внимания. Расположите держатель микропипетки и игл на достаточно небольшим углом, так, чтобы игла как можно ближе к горизонтальной, как край депрессии на слайд позволит. Если эмбрион установлен должным образом в метилцеллюлоза, она не будет катиться, как игла входит трансплантации, если эмбрион слишком стар, чтобы позволить игле проникать легко. Обертывающей слой кажется ужесточить, как возраст эмбрионов, поэтому пересадка гаструлы лучше всего выполнять сразу после щита образования. После купол этапе, желток находится прямо под клетками бластодерма колпачок, который постепенно истончается, как epiboly продолжается. Для того чтобы избежать пирсинг желток, игла должна войти эмбриона на фокальной плоскости, которая чуть-чуть глубже, чем EVL. При удалении большого количества клеток от донора эмбриона, перемещение иглы вокруг, как клетки будут взяты для того, чтобы избежать случайного сосать желток в иглу. Если клетки от одного донора эмбриона для пересадки на несколько хостов, то лучше ввести донора с иглы только один раз для того, чтобы свести к минимуму возможность повреждения. Донорских клеток могут быть переданы в нужное место в срок до трех эмбрионов хоста. При передаче клетки от двух или более эмбрионов доноров в один хост эмбриона, то лучше взять клетки от каждого из доноров эмбрионов в ту же иглу пересадки до пересадки их на хост эмбриона. Это сводит к минимуму повреждения хост эмбриона, и гарантирует, что клетки переносятся в той же области эмбриона, так что их поведение можно сравнить. Очень мало смешивания оспсы между донорских клеток в пересадке иглы, таким образом, клетки должны быть переведены на один хост, когда более чем один из доноров не используется. В целях повышения вероятности того, что донорских клеток будет способствовать желаемой ткани, изгнать донорских клеток в то время как игла втягивается через целевой области, в отличие от сдачи клеток в единый комок. Как только клетка переводов будут завершены, разместить весь слайд в чашку Петри и наводнений тщательно Pen / Strep EM. В течение следующих нескольких часов метилцеллюлозы будет растворяться, высвобождая эмбрионов.
Рисунок 1: Микроскоп настройки для создания химерных эмбрионов. : Рассекает установки микроскопа трансплантации состоит из маслонаполненного Гамильтон шприц с микрометром диск (), подключенных к маслонаполненных водохранилища (б) и трансплантации пипетки (с) через 3-ходовой кран (г). Пересадка пипетки монтируется на грубые микроманипулятора (е), который крепится к металлической пластине основания (не показаны) с помощью магнитной ножкой (е). Трансплантация осуществляется на этапе стереомикроскопа (г), оснащенный дно для оптимального освещения оптики. B: пересадка сложного микроскопа машина состоит из аналогичных маслонаполненных Гамильтон шприц и микрометра диск (б), но в этом случае пересадки пипетки устанавливается на держатель пипетки (с), чьи X, Y и Z движений можно управлять либо по грубой (г), или штраф (д) микроманипулятора. В этом примере микроманипулятора монтируется на тело фиксированной столик микроскопа, однако это также возможно устанавливать его на этапе регулярные микроскопом. Эмбрионов, которые закреплены на метилцеллюлозы депрессии слайд, визуализируются использовании 10x цели (е). C: Пересадка формы для иммобилизации эмбрионов для стереомикроскопа трансплантации. Dechorionated эмбрионы удаляются индивидуально в скважины сделаны литьем этой плесени в агарозном в 90 мм чашки Петри. Размеры скважины показано на рисунке.
Рисунок 2: Установка эмбрионов в стадии гаструлы трансплантации. : Идеальную форму пипетки пересадки гаструлы. Коническая с острым кончиком средства в проникновении эмбриона. B: иммобилизации донора и реципиента эмбрионов в метилцеллюлозы. Полоса метилцеллюлозы заложена в скважине депрессию слайдов и залитый щедрым количеством эмбрионов среды. Эмбрионы будут добавлены в эмбрион среде и перевернулся на метилцеллюлозы с помощью небольшого цикла (С). DG расширение эмбрионов на рис. 1В. D: доноров эмбрионов ориентирована чтобы позволить легкий доступ для пипетки, так как клетки на данном этапе все еще незавершенных. Е. Г.: Щит стадии хост эмбрионов ориентированы так, что целевой регион вверх. Клетки пересаживают в коробку регионах будет способствовать спинной заднего мозга и черепно нервного гребня происходит от левой (E) и правая (G) сторонах или вентральной заднего мозга и спинного мозга (F).
Рисунок 3: Представитель изображения химерных эмбрионов.
(AC) химерных эмбрионов 18hpf порожденных трансплантации на щит стадии показано при взгляде сверху, впереди слева. (А, В) Сортировка функции клеточной поверхности рецепторов EphA4 выявлены путем анализа химерных эмбрионов. Левая панель: слияние родамин-меченого (rhod.) донорских клеток (красный) и трансгенных GFP выражается в конкретных сегментах задний мозг (зеленый). (А) WT клетки способствуют весь задний мозг контрольного химерных эмбрионов. (B) EphA4 обедненного клетки донора, исключаются из специфических сегментов в задний мозг из WT хоста. (C) Донорские клетки, ориентированные на различные части нервной трубки у щита этап трансплантации. Донорские клетки (красный), ориентированные на передний мозг / среднего мозга (слева) или задний мозг / спинного мозга (правая панель) WT хост контр-окрашивали антителами EfnB2a, который отмечает переднего мозга, среднего заднего мозга границы и средний сегмент задний мозг (зеленый). Шкала баров: 50 мкм.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Легкость, с которой трансплантации может быть использована для выпуска целевых химеры является одной из великих держав данио, как позвоночных модели. Модификации этого протокола, не описанные выше, позволяет анализ материнской функции гена генов с существенную роль в зиготических развития. Так как эти мутант рыба не может дожить до зрелого возраста, необходимо передать мутантов зародышевой линии в противном случае дикого типа хост эмбриона, создавая «зародышевой линии клонов" мутантных клеток. Создание мозаик зародышевой линии включает в себя пересадку первичных половых клеток от донора мутантов дикого типа хост эмбриона. В отличие от всех других клеточных поколений в зародыше, линии зародышевых клеток определяется очень рано в процессе развития, наследства материнской детерминанты 5,6. Таким образом, первая задача создания зародышевой линии мозаики заключается в определении первичных половых клеток (PGCs) в донора эмбриона. На midblastula этапах PGCs проживают по краю 7,8, так что подбирая 50-100 случайные клетки от края линии меченных доноров эмбрионов часто приводит к передаче PGCs. Когда передается животному полюс немеченого эмбриона хозяина, первичные половые клетки активно мигрируют в гонады предполагаемого, где они могут быть однозначно определены на 24 часов с момента развития по их характерным положении, больших размеров, и удержание красителя в связи с их медленной скорости пролиферативной 9-11. Между тем, донорская происхождения без PGCs приобретет судьба определяется их место в стане, в первую очередь переднего мозга и глаз, если они были пересажены на бластулы полюс животного. Потребители инъекционных хост эмбриона с morpholinos, что сбить мертвых гена конце эффективно устранять хост зародышевой линии в клеточной автономном режиме, так что даже одного донора полученных PGC можно населить целый зародышевой линии 10,12 (CM, личное наблюдение). В последнее время трансгенные линии, которая позволяет PGCs быть визуализированы в живых эмбрионов во время бластулы этапах был разработан 13. Когда перешли в мутанта которого материнская функция должна быть определена, это трансгенов, в сочетании с мертвой morpholinos конца, сделают трансплантацию половых поверхностное, поскольку одно PGCs могут быть идентифицированы и пересадить в зародышевой линии обедненный хоста.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Благодаря членам лаборатории Moens для полезной информации во время написания этой статьи. HK является после защиты докторской диссертации поддерживается NIH / NICHD грант № 5R01HD037909-08. CBM является следователь Медицинского института Говарда Хьюза.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Injection rig | Applied Scientific Instrumentation | MPPI-3 | Foot pedal can be ordered separately |
| Pronase | Sigma-Aldrich | P5147 | protease type XIV” |
| Pen-Strep | Sigma-Aldrich | P4458 | 100x stock |
| Methyl cellulose | Sigma-Aldrich | M-0387 | |
| Fluorescent dextrans | Molecular Probes, Life Technologies | various | Eg. lysine-fixable rhodamine dextran (D7162) |
| Injection pipettes (1.2mmx0.94mmx10cm) | Sutter Instrument Co. | BF120-94-10 | |
| Transplant pipette option 1 | World Precision Instruments, Inc. | TW100-4 | |
| Transplant pipette option 2 | VWR international | #53508-400 | |
| micromanipulator | Narishige International | UMJ-3FC (?) | |
| Micromanipulator magnetic stand | Narishige International | GJ-1 | |
| Transplant apparatus | Sutter Instrument Co. | MI-10010 | |
| Fine micromanipulator | Narishige International | MMO-203 | |
| Depression slides | Fisher Scientific | 12560A | |
| Agar molds for injection and transplants | AL-AN Mfg, Inc. | ||
Reagents: Recipes for many of the reagents used for these procedures are found in The Zebrafish Book, which is available in full online at http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html. Recipes are provided there for preparation of Fish Water, Embryo Medium with and without antibiotics, pronase for dechorionating, fluorescent dextrans, and methyl cellulose. |
|||
References
- Westerfield, M. The Zebrafish Book. , 3rd Ed, University of Oregon Press. Eugene, Oregon. (2000).
- Kimmel, C. B., Warga, R. M. Cell lineage and developmental potential of cells in the zebrafish embryo. Trends Genet. 4, 68-74 (1988).
- Kimmel, C. B., Warga, R. M., Schilling, T. F. Origin and organization of the zebrafish fate map. Development. 108, 581-594 (1990).
- Woo, K., Fraser, S. E. Order and coherence in the fate map of the zebrafish nervous system. Development. 121, 2595-2609 (1995).
- Raz, E. Primordial germ-cell development: the zebrafish perspective. Nat Rev Genet. 4, 690-700 (2003).
- Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells. Development. 124, 3157-3165 (1997).
- Koprunner, M., Thisse, C., Thisse, B., Raz, E. A zebrafish nanos-related gene is essential for the development of primordial germ cells. Genes Dev. 15 (21), 2877-2885 (2001).
- Weidinger, G., Wolke, U., Koprunner, M., Klinger, M., Raz, E. Identification of tissues and patterning events required for distinct steps in early migration of zebrafish primordial germ cells. Development. 126 (23), 5295-5307 (1999).
- Weidinger, G. Regulation of zebrafish primordial germ cell migration by attraction towards an intermediate target. Development. 129 (1), 25-36 (2002).
- Ciruna, B. Production of maternal-zygotic mutant zebrafish by germ-line replacement. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 14919-14924 (2002).
- Waskiewicz, A. J., Rikhof, H. A., Moens, C. B. Eliminating zebrafish pbx proteins reveals a hindbrain ground state. Dev Cell. 3, 723-733 (2002).
- Weidinger, G. dead end, a novel vertebrate germ plasm component, is required for zebrafish primordial germ cell migration and survival. Curr Biol. 13, 1429-1434 (2003).
- Blaser, H. Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish. J Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).
