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Immunology and Infection

Obtention hautement purifiée Toxoplasma gondii Les oocystes par un gradient de chlorure de césium discontinu

Published: November 3, 2009 doi: 10.3791/1420

Summary

Cette étude décrit le développement d'une méthode modifiée de CsCl qui purifie facilement T. gondii oocystes à partir des fèces des chats infectés qui sont appropriés pour la manipulation biologique moléculaire et la culture de tissus

Abstract

Toxoplasma gondii est un protozoaire pathogène intracellulaire obligatoire qui infecte habituellement les humains. C'est un apicomplexes bien caractérisés liés à l'origine des flambées des maladies alimentaires et hydriques. L'hôte définitif est l'espèce féline, où la réplication sexuelle se produit résultant dans le développement de l'oocyste hautement infectieuse et résistance à l'environnement. L'infection se produit par ingestion de kystes tissulaires à partir de viande contaminée ou d'oocystes à partir du sol ou l'eau. L'infection est généralement asymptomatique chez les individus sains, mais les résultats dans une infection latente à vie qui peut se réactiver provoquant la toxoplasmose cérébrale et la mort si l'individu devient immunodéprimés. Viande contaminée avec T. kystes gondii ont été la principale source d'infection en Europe et aux Etats-Unis, mais les récents changements dans la gestion des animaux et des pratiques d'élevage et la manipulation des aliments améliorés et les procédures de traitement ont sensiblement réduit la prévalence de T. kystes gondii dans la viande 1, 2. Néanmoins, la séroprévalence chez les humains demeure relativement élevé ce qui suggère que l'exposition des sols contaminés oocystes ou de l'eau est probable. En effet, épidémies d'origine hydrique de la toxoplasmose ont été signalés dans le monde soutenant la théorie de l'exposition à la forme des oocystes de l'environnement pose un risque significatif pour la santé 3-5. À ce jour, les recherches sur la compréhension de la prévalence de T. oocystes gondii dans l'eau et l'environnement sont limitées en raison du manque d'outils pour détecter les oocystes dans l'environnement 5, 6. Cela est principalement dû à l'absence de protocoles de purification efficaces pour obtenir un grand nombre de très purifiée T gondii oocystes des chats infectés à des fins de recherche. Cette étude décrit le développement d'une méthode de CsCl modifiés qui purifie facilement T. oocystes gondii à partir des fèces des chats infectés qui sont appropriés pour la manipulation biologique moléculaire et la culture de tissus 7.

Protocol

Acknowledgments

Nous tenons à remercier Nichole Brinkman et Michael Ware pour examen technique du manuscrit et le Dr Abu Sayed et Linda Ransick pour le soutien technique et administratif. L'Agence américaine de protection de l'environnement à travers son Bureau de Recherche et Développement partiellement financé et collaboré à la recherche décrite ici sous le contrat numéro EP-D-06-096 à Dynamac, Inc et un numéro d'accord inter-DW-12-92289801-0 à l'USDA. Il a été soumis à l'examen de l'Agence et approuvé pour publication. La mention de noms commerciaux ou de produits commerciaux ne constitue pas une approbation ou une recommandation d'utilisation. MJS adresse actuelle: Dynamac, Inc Cincinnati, OH.

References

  1. Dubey, J. P. Prevalence of viable Toxoplasma gondii in beef, chicken, and pork from retail meat stores in the United States: risk assessment to consumers. J. Parasitol. 91, 1082-1093 (2005).
  2. Tenter, A. M., Heckeroth, A. R., Weiss, L. M. Toxoplasma gondii: from animals to humans. Int. J. Parasitol. 30, 1217-1258 (2000).
  3. Bowie, W. R. Outbreak of toxoplasmosis associated with municipal drinking water. Lancet. 350, 173-177 (1997).
  4. Moura, L. de Waterborne toxoplasmosis, Brazil, from field to gene. Emerg. Infect. Dis. 12, 326-329 (2006).
  5. Jones, J. L., Dubey, J. P. Waterborne toxoplasmosis - Recent developments. Exp. Parasitol. doi: 10.1016/j.exppara.2009.03.013, (2009).
  6. Dumetre, A., Darde, M. L. How to detect Toxoplasma gondii oocysts in environmental samples. FEMS Microbiol. Rev. 27, 651-661 (2003).
  7. Dumetre, A., Darde, M. L. Purification of Toxoplasma gondii oocysts by cesium chloride gradient. J. Microbiol. Methods. 56, 427-4230 (2004).
  8. Dubey, J. P. Toxoplasmosis of Animals and Man. , 2nd Edition, CRC Press, Inc. Boca Raton, FL. (2009).

Tags

Jove maladies infectieuses la microbiologie Numéro 33 Toxoplasma gondii le chlorure de césium oocystes gradient discontinu apicomplexes
Obtention hautement purifiée<em> Toxoplasma gondii</em> Les oocystes par un gradient de chlorure de césium discontinu
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Staggs, S. E., See, M. J., Dubey, J. More

Staggs, S. E., See, M. J., Dubey, J. P., Villegas, E. N. Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient. J. Vis. Exp. (33), e1420, doi:10.3791/1420 (2009).

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