Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Gewinnung von hochgradig gereinigter Toxoplasma gondii Oocysten durch eine diskontinuierliche Cäsiumchloridgradienten

Published: November 3, 2009 doi: 10.3791/1420

Summary

Diese Studie beschreibt die Entwicklung eines modifizierten CsCl-Methode, die leicht reinigt T. gondii Oozysten aus Kot von infizierten Katzen, die geeignet sind für molekularbiologische und Gewebekulturen Manipulation

Abstract

Toxoplasma gondii ist ein obligat intrazellulären Protozoen Erreger, die häufig Menschen infiziert. Es ist ein gut charakterisierter apicomplexan mit verursacht durch Lebensmittel und Wasser übertragene Seuchen verbunden. Der Endwirt ist die Katze Arten, bei denen sexuelle Replikation in der Entwicklung der hoch ansteckenden und umweltfreundlich beständig oocyst was geschieht. Die Infektion erfolgt über die Aufnahme von Zysten aus kontaminiertem Fleisch oder Oozysten aus dem Boden oder Wasser. Die Infektion erfolgt in der Regel asymptomatisch in gesunden Personen, aber die Ergebnisse in eine lebenslange latente Infektion, die Reaktivierung verursachen Toxoplasmose-Enzephalitis und Tod, wenn das Individuum wird immungeschwächten können. Fleisch mit T. kontaminierte gondii Zysten haben die primäre Quelle der Infektion in Europa und den Vereinigten Staaten, aber die jüngsten Veränderungen in der Tierhaltung und Tierhaltung und verbessert den Umgang mit Lebensmitteln und Verarbeitungsverfahren haben wesentlich die Prävalenz von T. reduziert gondii Zysten in Fleisch 1, 2. Dennoch bleibt Seroprävalenz beim Menschen relativ hohe darauf hindeutet, dass Exposition von Oozysten kontaminierten Boden oder Wasser auftreten. In der Tat haben auf Wasserbasis Ausbrüche von Toxoplasmose gemeldet weltweit unterstützen die Theorie der Exposition gegenüber der Umwelt oocyst Form stellt eine erhebliche Gesundheitsgefährdung 3-5. Bis heute Forschung zum Verständnis der Prävalenz von T. gondii Oozysten im Wasser und Umwelt sind durch den Mangel an Tools, um Oozysten in der Umwelt 5, 6 erkennen begrenzt. Dies ist vor allem auf den Mangel an effizienten Reinigung Protokolle für die Gewinnung einer großen Anzahl von hochreinem T gondii Oozysten aus infizierten Katzen zu Forschungszwecken. Diese Studie beschreibt die Entwicklung eines modifizierten CsCl-Methode, die leicht reinigt T. gondii Oozysten aus Kot von infizierten Katzen, die sich für molekularbiologische und Gewebekulturen Manipulation 7 sind.

Protocol

Acknowledgments

Wir möchten Nichole Brinkman und Michael Ware für technische Durchsicht des Manuskripts und Dr. Abu Sayed und Linda Ransick für technische und administrative Unterstützung zu danken. Die United States Environmental Protection Agency durch ihr Amt für Forschung und Entwicklung teilweise finanziert und arbeitete in der hier beschriebenen Untersuchungen unter Vertrag Anzahl EP-D-06 bis 096 zu Dynamac, Inc. und eine ressortübergreifende Einigung Anzahl DW-12-92289801-0 bis USDA. Es ist zu überprüfen Agentur unterzogen und zur Veröffentlichung freigegeben. Die Erwähnung von Handelsnamen oder kommerziellen Produkten stellt keine Billigung oder Empfehlung für den Einsatz. MJS aktuelle Adresse: Dynamac, Inc. Cincinnati, OH.

References

  1. Dubey, J. P. Prevalence of viable Toxoplasma gondii in beef, chicken, and pork from retail meat stores in the United States: risk assessment to consumers. J. Parasitol. 91, 1082-1093 (2005).
  2. Tenter, A. M., Heckeroth, A. R., Weiss, L. M. Toxoplasma gondii: from animals to humans. Int. J. Parasitol. 30, 1217-1258 (2000).
  3. Bowie, W. R. Outbreak of toxoplasmosis associated with municipal drinking water. Lancet. 350, 173-177 (1997).
  4. Moura, L. de Waterborne toxoplasmosis, Brazil, from field to gene. Emerg. Infect. Dis. 12, 326-329 (2006).
  5. Jones, J. L., Dubey, J. P. Waterborne toxoplasmosis - Recent developments. Exp. Parasitol. doi: 10.1016/j.exppara.2009.03.013, (2009).
  6. Dumetre, A., Darde, M. L. How to detect Toxoplasma gondii oocysts in environmental samples. FEMS Microbiol. Rev. 27, 651-661 (2003).
  7. Dumetre, A., Darde, M. L. Purification of Toxoplasma gondii oocysts by cesium chloride gradient. J. Microbiol. Methods. 56, 427-4230 (2004).
  8. Dubey, J. P. Toxoplasmosis of Animals and Man. , 2nd Edition, CRC Press, Inc. Boca Raton, FL. (2009).

Tags

Jupiter Infektionskrankheiten Mikrobiologie Toxoplasma gondii Cäsiumchlorid Oozysten diskontinuierlichen Gradienten apicomplexan
Gewinnung von hochgradig gereinigter<em> Toxoplasma gondii</em> Oocysten durch eine diskontinuierliche Cäsiumchloridgradienten
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Staggs, S. E., See, M. J., Dubey, J. More

Staggs, S. E., See, M. J., Dubey, J. P., Villegas, E. N. Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient. J. Vis. Exp. (33), e1420, doi:10.3791/1420 (2009).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter