Summary
Denna studie beskriver utvecklingen av en modifierad CsCl metod som lätt renar T. gondii oocystor från avföring från smittade katter som är lämpliga för molekylärbiologiska och vävnadsodling manipulation
Abstract
Toxoplasma gondii är en obligat intracellulär protozo patogen som ofta infekterar människor. Det är en väl beskriven apicomplexan samband med orsakar mat-och vattenburna sjukdomsutbrott. Den slutgiltiga värd är kattdjur där sexuella replikering sker resultera i utveckling av den mycket smittsamma och miljömässigt resistenta oocyst. Infektion sker via intag av vävnad cystor från smittat kött eller oocystor från jord eller vatten. Infektion är vanligtvis asymptomatiska hos friska individer, men resulterar i en livslång latent infektion som kan reaktivera orsakar toxoplasmic encefalit och död om individen blir nedsatt immunförsvar. Kött förorenat med T. gondii cystor har varit den primära smittkällan i Europa och USA, men de senaste förändringarna i djurhantering och djurhållning och förbättrad hantering av livsmedel och behandling har betydligt minskat förekomsten av T. gondii cystor i kött 1, 2. Ändå förblir seroprevalens hos människor relativt hög vilket tyder på att exponeringen från oocyst förorenad mark eller vatten är sannolik. I själva verket har vattenburna utbrott av toxoplasmos rapporterats över hela världen stödjer teorin exponering för de miljömässiga oocyst formen utgör en betydande hälsorisk 3-5. Hittills forskning på att förstå förekomsten av T. gondii oocystor i vattnet och miljön är begränsad på grund av brist på verktyg för att upptäcka oocystor i miljön 5, 6. Detta beror främst på bristen på effektiv rening protokoll för att erhålla ett stort antal av renade T gondii oocystor från smittade katter för forskningsändamål. Denna studie beskriver utvecklingen av en modifierad CsCl metod som lätt renar T. gondii oocystor från avföring från smittade katter som är lämpliga för molekylärbiologiska och vävnadsodling manipulation 7.
Protocol
Acknowledgments
Vi vill tacka Nichole Brinkman och Michael Ware för teknisk granskning av manuskriptet och Dr Abu Sayed och Linda Ransick för tekniskt och administrativt stöd. USA Naturvårdsverket genom sitt kontor för forskning och utveckling delvis finansierat och medverkat i den forskning som beskrivs här under kontrakt antal EP-D-06 till 096 för att Dynamac, Inc. och ett institutionsöverskridande avtalsnummer DW-12-92.289.801-0 till USDA. Det har varit föremål för myndighetens granskning och godkänts för publicering. Omnämnande av firmanamn eller kommersiella produkter innebär inte godkännande eller rekommendation för användning. MJS aktuella adress: Dynamac, Inc. Cincinnati, OH.
References
- Dubey, J. P. Prevalence of viable Toxoplasma gondii in beef, chicken, and pork from retail meat stores in the United States: risk assessment to consumers. J. Parasitol. 91, 1082-1093 (2005).
- Tenter, A. M., Heckeroth, A. R., Weiss, L. M. Toxoplasma gondii: from animals to humans. Int. J. Parasitol. 30, 1217-1258 (2000).
- Bowie, W. R. Outbreak of toxoplasmosis associated with municipal drinking water. Lancet. 350, 173-177 (1997).
- Moura, L. de Waterborne toxoplasmosis, Brazil, from field to gene. Emerg. Infect. Dis. 12, 326-329 (2006).
- Jones, J. L., Dubey, J. P. Waterborne toxoplasmosis - Recent developments. Exp. Parasitol. doi: 10.1016/j.exppara.2009.03.013, (2009).
- Dumetre, A., Darde, M. L. How to detect Toxoplasma gondii oocysts in environmental samples. FEMS Microbiol. Rev. 27, 651-661 (2003).
- Dumetre, A., Darde, M. L. Purification of Toxoplasma gondii oocysts by cesium chloride gradient. J. Microbiol. Methods. 56, 427-4230 (2004).
- Dubey, J. P. Toxoplasmosis of Animals and Man. , 2nd Edition, CRC Press, Inc. Boca Raton, FL. (2009).