Biology

法援署结扎：有心肌梗死的小鼠模型

Published: October 14, 2009 doi: 10.3791/1438

Mandy V.V. Kolk^1,2, Danja Meyberg^1,2, Tobias Deuse^1,2, Karis R. Tang-Quan^1,2,3, Robert C. Robbins³, Hermann Reichenspurner^1,2, Sonja Schrepfer^1,2,3

¹Transplant and Stem Cell Immunobiology Lab (TSI), University Heart Center Hamburg, ²CVRC, University Hospital Hamburg, ³Department of CT Surgery, Stanford University School of Medicine

Summary

本视频演示了如何使用快捷及可靠的模型来研究心肌缺血的病理生物学和病理生理过程。

Abstract

梗死和心肌缺血的研究模型是必不可少的调查在心肌缺血的急性和慢性的病理生物学和病理生理过程，并开发和优化未来的治疗。

两种不同的方法建立心肌缺血是在啮齿类实验动物。第一种方法是创建一个快速但不精确的技术，冷冻梗死，其中一个冷冻笔的心（1-3）表面上应用。科学家使用这种方法不能保证冷冻疤痕导致缺血，也显示病理生理方是不相关的心肌梗死的效果，创建了广阔的心肌损伤。第二种方法是永久性结扎左冠状动脉前降支（LAD）。这里法援署是一个单针结扎，形成了一个几乎立即可以看到的缺血。关闭法援署，没有进一步的血流量是允许在这一领域，而周围的心肌组织中几乎没有受到影响。这种外科手术模拟发生在梗死心肌缺血的病理生物学和病理生理方面。

在这个视频中介绍的方法演示鼠标梗死模型的外科手术结扎法援署。这种模式是心肌梗死的病理生物学和病理生理以及免疫生物学研究的方便。显示技术提供高精确度和关联以及与组织学切片。

Protocol

年龄在8至12周的最低重量为20g的BALB / C小鼠均购自查尔斯河（Sandhofer WEG 7，D - 97633 Sulzfeld）。
小鼠被安置在常规条件下，美联储的标准鼠标颗粒和水自由采食 。麻醉与异氟醚使用感应室（2％）的鼠标。

剃除颈部，左侧的肋骨和消毒用80％乙醇。
在它的后面放置鼠标放在它的鼻子和嘴的口罩，以保持麻醉。
检查的反射捏尾巴和后腿的脚，以确保足够anesthesized鼠标。
在微观执行颈中线切口，分离皮肤，肌肉和组织覆盖气管。
当暴露气管切开一个小孔，插入气管导管（图1）进入组织之间的声门以下两个墨盒环。插入气管导管，持有使用微型外科forecepts的气管颅。检查胸的运动，以确保通风良好，两肺。
呼吸频率（RR）应约每分钟110，与17日至18厘米H _{2 O}的吸气压力小心打开鼠标，躺在其右侧，面对它的左边。执行第³和^第 4肋骨之间的leftsided开胸，并仔细解剖组织和肌肉，使用考特，以防止出血。
小心打开胸廓，一旦打开胸腔，发现心脏，没有任何尖锐的物体接触肺。现在，删除的部分，是覆盖在心脏的心包囊。
位于法援署之间的肺动脉和左耳廓。使用8-0普理灵缝合（爱惜康，日本东京，德国）结扎的LAD近端与一个单一的缝合（图2）。
放置胸管（28G，腐败的导管）， ^第 4和^第 5肋骨之间。
关闭层的胸切口，用6-0普理灵运行缝线（爱惜康，日本东京，德国），以适应肋骨和4-0普理灵运行缝线（爱惜康，日本东京，德国），以接近皮肤。
漏了一个2ml注射器小心（图3）的帮助下胸部。将鼠标在它的后面。立即采取气管插管和气管墨盒戒指适应单一使用7-0普理灵缝合针（爱惜康，日本东京，德国）。
放在鼠标上的口罩，并关闭皮肤用4-0普理灵运行缝线（爱惜康，日本东京，德国）。

验证

有不同的可能性，确认成功的LAD结扎。

肌钙蛋白测试可以进行手术后6至18小时，使用，而不需要安乐死的动物中，只有150升血液。血是适用于一个定制的肌钙蛋白检测试剂盒（热带T敏感，罗氏，曼海姆）（图4）。肌钙蛋白是一种调节蛋白在肌肉细胞的肌动蛋白丝，有肌肉的三种不同的亚型。 cTnI和cTnT的亚型被发现在心里，并释放组织损伤。两次心脏特异性单克隆抗体，一个陷阱，在血液样本肌钙蛋白肌钙蛋白T（cTnT）的标准化测试的基础上，第二个是一个标记。

梗死区可确定宏观后第3天（图5）。

TTC（2,3,5 - 三苯基氯化）染色措施，组织活力用于评估心肌梗死面积。伊文思蓝染料（1,5％，1.0mL），磷酸盐缓冲液（PBS）进入左心室腔注入测量心肌缺血区。鼠标是安乐死的心是收获和分段成片。组织切片在37℃孵育时间为20分钟在1％TTC PBS液，pH值7.4。组织固定在10％PBS缓冲福尔马林一夜之间在2-8 ° C。 TTC是管理的体外染料伊文思蓝阴性区（图6）。

对于组织学的鼠标已经被安乐死的心已被嵌入作进一步处理。执行石蜡切片后，与H＆E（苏木精和曙红）染色幻灯片或三色可视化纤维组织（图7）。

图1：气管套管。
1A：暴露气管，颈椎后腹切口。
1B：气管开了两个尾鳍喉软骨环。
1C：气管导管插入进气管。