Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Лад-Лигирование: мышиной модели инфаркта миокарда

Published: October 14, 2009 doi: 10.3791/1438

Summary

В этом видео показано, как использовать быстрые и надежные модели для изучения патобиологические и патофизиологические процессы ишемии миокарда.

Abstract

Исследование моделей миокарда и ишемии миокарда имеют важное значение для расследования острых и хронических патобиологические и патофизиологические процессы в ишемия миокарда и для разработки и оптимизации будущего лечения.

Два разных метода создания ишемии миокарда осуществляется в лабораторных грызунов. Первый способ заключается в создании крио миокарда, быстро, но неточной техники, где крио-пера наносится на поверхность сердца (1-3). Используя этот метод ученый не может гарантировать, что крио-шрам, приводит к ишемии, а также огромные повреждения миокарда создается, который показывает патофизиологические побочные эффекты, которые не связаны с инфарктом миокарда. Второй метод заключается в постоянном перевязки левой передней нисходящей артерии (LAD). Здесь ЛАД лигируют с помощью одного стежка, образуя ишемии, которые можно увидеть практически сразу. При закрытии LAD, не далее кровотока разрешается в этой области, в то время как окружающие ткани миокарда почти не влияет. Это хирургическая процедура, имитирующая патобиологические и патофизиологические аспекты происходящих в инфаркт-связанной ишемии миокарда.

Метод, представленных в этом видеоролике показано, хирургической процедуры, модели миокарда мышей путем лигирования ЛАД. Эта модель удобна для патобиологические и патофизиологические, а также иммунобиологических исследований инфаркт миокарда. Показал метод обеспечивает высокую точность и хорошо коррелирует с гистологических срезов.

Protocol

Balb / C мышей весом менее 20 г в возрасте от 8 до 12 недель закупаются у Charles River (Sandhofer Weg 7, Д-97633 Sulzfeld).
Мыши размещаются в обычных условиях, кормили гранул стандартной мыши и без ограничений воды объявление. Обезболить мышь с изофлуран (2%) с помощью индукции камеры.

  1. Бритье области шеи и левой части грудной клетки и дезинфекции с использованием 80% этанола.
  2. Наведите на спину и положите маску на нос и рот, чтобы не отставать анестезии.
  3. Проверить рефлексы щипать хвост и задние лапы, чтобы быть уверенным, что мыши достаточно anesthesized.
  4. Под микроскопический взгляд выполнять средней линии шейки разрез разделения кожу, мышцы и ткани, покрывающей трахеи.
  5. Когда трахеи подвергается вырезать небольшое отверстие в ткани между двух патронных кольца ниже голосовой щели, чтобы вставить эндотрахеальной трубки (рис. 1). Вставьте эндотрахеальной трубки проведения черепная часть трахеи с использованием микро хирургической forecepts. Проверьте грудной движения, чтобы убедиться, что оба легких, хорошо проветривается.
  6. Частота дыхания (RR) должна быть около 110 в минуту, при вдохе давление от 17 до 18 см H 2 O. Включите мышь тщательно, лежа на правом боку, лицом ее левой стороне. Выполните leftsided торакотомия между 3-й и 4-го ребра, и рассекать ткани и мышцы тщательно, используя термокаутер чтобы предотвратить кровотечение.
  7. Открытое грудной клетки тщательно, как только грудная клетка открыта, найти сердце, не касаясь легких с любым острым предметом. Теперь удалите часть перикард, что покрывает сердце.
  8. LAD находится между легочной артерии и левой ушной раковины. Используйте 8-0 Prolene шва (Ethicon, Нордерштедт, Германия), чтобы перевязывать ЛАД проксимальных с одним швом (рис. 2).
  9. Место грудь трубки (28G, продажный катетер), между 4-й и 5-го ребра.
  10. Закрыть грудной разрез в слоях, используя 6-0 Prolene работает швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия) адаптировать ребрами и 4-0 Prolene работает швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия), чтобы закрыть кожи.
  11. Слейте грудной клетки с помощью 2 мл шприца аккуратно (рис. 3). Наведите на спине. Теперь возьмите эндотрахеальной трубки и приспособление кольца трахеи картридж с помощью одного стежка использованием 7-0 Prolene швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия).
  12. Место маску на мыши и закрыть кожу с помощью 4-0 Prolene работает швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия).

Проверка

Существуют различные возможности, чтобы подтвердить успех ЛАД-труб.

Тест тропонин могут быть выполнены с 6 до 18 часов после операции, используя только 150 л крови без необходимости усыпить животное. Крови применяется для индивидуальных комплект тест тропонина (Троп Т Чувствительный, Roche, Мангейм) (рис. 4). Тропонин является регулятивный белка актина в мышечных клеток, Существуют различные изотипов в три вида мышц. Изотипов cTnI и CTnT находятся в сердце и выпускаются в повреждения тканей. Стандартизированный тест на тропонин Т (CTnT) базируется на двух сердце специфическими моноклональными антителами, один ловушки тропонина в крови, а второй является маркером.

Инфаркта области можно выделить макроскопически через 3 дня (рис. 5).

TTC (2,3,5-Triphenyltetrazolium хлорид) окрашивание меры жизнеспособности тканей используется для оценки размера инфаркта. Эванс синего красителя (1,5%, 1,0 мл) в фосфатно-солевом буфере (PBS) вводится в полость левого желудочка для оценки ишемических инфарктов области. Мышь эвтаназии и сердца собирают и подразделяются на ломтики. Срезы тканей инкубируют в 1% TTC PBS растворе, рН 7,4 при 37 ° С в течение 20 минут. Ткани фиксировали в 10% PBS-буферном растворе формалина в течение ночи при температуре 2-8 ° C. ТТС находится в ведении бывшего естественных условиях, чтобы окрасить Эванс сине-отрицательных областях (рис. 6).

Для гистологии мышь должна быть умерщвлены, а сердце должно быть встроен для дальнейшей обработки. После выполнения парафиновых срезах, окрашенных слайды с H & E (гематоксилином и эозином) или trichrome визуализировать фиброзной ткани (рис. 7).

Рисунок 1
Рисунок 1: трахеи трубки.
1А: Exposed трахеи, после вентральной шейки разрез.
1В: трахеи открыл два хряща кольца каудально по отношению к гортани.
1С: трахеи трубки вставляется в трахею.

Рисунок 2
Рисунок 2: сердце предоставляется через левосторонний торакотомия, ЛАД лигируют.

т "> Рисунок 3
Рисунок 3: После грудной клетки закрыт, утечка плевры не выполняется. Мышь все еще ​​под наркозом.

Рисунок 4
Рисунок 4: Две линии появляются через несколько минут, когда тест тропонина является положительным.

Рисунок 5
Рисунок 5: Показывает эксплантированных сердце.
5А: Макроскопические зрения сердце зоне ишемии с выцветшим беловатый цвет.
5B: Сечение инфаркта сердца, ишемической область показывает в верхнем правом углу.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

В целом, это видео визуализирует ЛАД-перевязка модель шаг за шагом, и определяет ЛАД-перевязку у мышей, так же легко, возможно хирургических процедур.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Финансирование

Настоящее исследование было поддержано университетской клиники Гамбурга (МК, девушку Habilitation Грант), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, научный премии 2009).

Заявление

Все животные получали уход человека в соответствии с принципами заботы лабораторных животных, опыты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами, установленными Национальным обществом по медицинским исследованиям и Руководство по уходу и использованию лабораторных животных опубликованных Национальные институты здравоохранения (Национальный институт здоровья публикации 85-23, пересмотренная 1985).

Все животные были получены из Charles River Laboratories (Sulzfeld, Германия) и были сохранены в животном учреждений Университетской клиники Гамбург Эппендорф. Животные получали стандартным кормом и водой вволю.

Acknowledgments

Авторы благодарят Кристиана Pahrmann для ее технической помощи и проведения гистологии.

References

  1. Atkins, B. Z., Hueman, M. T. Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart. J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).
  2. Jaquet, K., KT, K. rause Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism. Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).
  3. Joung, B., Kim, I. K. Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects. Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).

Tags

Медицина выпуск 32 инфаркт миокарда мыши ЛАД перевязки ишемия гистология проверки
Лад-Лигирование: мышиной модели инфаркта миокарда
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Kolk, M. V., Meyberg, D., Deuse, T., More

Kolk, M. V., Meyberg, D., Deuse, T., Tang-Quan, K. R., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., Schrepfer, S. LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction. J. Vis. Exp. (32), e1438, doi:10.3791/1438 (2009).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter