Summary
Questo video descrive il metodo utilizzato per l'isolamento di neuroprecursors dalla corteccia sviluppo embrionale dei topi. Il procedimento per eliminare gli embrioni dall'utero, sezionare il tessuto corticale, e digerire la corteccia cerebrale isolato viene mostrato.
Abstract
Primaria colture di cellule staminali neurali sono utili per studiare i meccanismi alla base dello sviluppo del sistema nervoso centrale. Ricerca sulle cellule staminali aumenteranno la nostra comprensione del sistema nervoso e può consentire di sviluppare terapie per malattie attualmente incurabili cerebrali e lesioni. Inoltre, le cellule staminali devono essere utilizzati per la ricerca sulle cellule staminali finalizzate allo studio dettagliato dei meccanismi di differenziamento neurale e transdifferenziazione ed i segnali genetici ed ambientali che dirigono la specializzazione delle cellule in particolari tipi di cellule. Questo video mostra una tecnica utilizzata per disaggregare le cellule embrionali giorni dal 12,5 proencefalo del mouse dorsale. La procedura di dissezione comprende la raccolta E12.5 embrioni di topo dall'utero, eliminando la "pelle" con sottile dissettore e infine isolare pezzi di corteccia cerebrale. Dopo la dissezione, il tessuto viene digerito e meccanicamente dissociato. Le cellule risospese dissociate vengono poi coltivate in "cellule staminali" media che favorisce la crescita delle cellule staminali neurali.
Protocol
- Precursori del mouse neurali (NPC) sono stati isolati da E12.5 corteccia embrionale.
- Strati della pelle e mesenchimali sono state rimosse dalla sezionati vescicole telencefaliche.
- Le vescicole sono state incubate a 0,05% di tripsina con EDTA 0,02% e lo 0,2% di BSA in HBSS per 20 minuti a 37 ° C.
- Tripsinizzazione è stato fermato da un uguale volume di 1 inibitore della soia mg / ml di tripsina (Sigma # T6522) a HBSS.
- Tessuto digerisce erano dissociate utilizzando varie tornate di triturazione con il fuoco lucidato pipette Pasteur.
- Le cellule sono state lavate una volta con 0,2% di BSA in HBSS e placcato a 50.000 cellule / ml su laminina rivestite coprioggetto in media con 20 ng / ml di EGF, 10 ng / ml FGF2 (R & D Systems o Peprotech), e 2 ug / eparina ml ( Sigma).
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Discussion
Grandi progressi nella nostra comprensione dello sviluppo del SNC e biologia delle cellule staminali è stato reso possibile dalla nostra capacità di raccogliere, isolare e cultura cellule embrionali staminali neurali. Questo video dimostra la dissezione di E12.5 il mouse corteccia cerebrale e la conseguente disgregazione e la coltura di cellule embrionali staminali neurali. Molti altri metodi simili sono stati impiegati con successo da altri ricercatori.
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
