Summary
هذا الفيديو يصف الطريقة المستخدمة لعزل neuroprecursors من القشرة النامية من الفئران الجنينية. ويرد الإجراء لإزالة الأجنة من الرحم ، وتشريح الانسجة القشرية ، وهضم القشرة الدماغية المعزولة.
Abstract
الخلايا الجذعية العصبية الأولية الثقافات مفيدة لدراسة الآليات الكامنة وراء تطور الجهاز العصبي المركزي. أبحاث الخلايا الجذعية سوف تزيد فهمنا للنظام العصبي ويمكن أن تسمح لنا لتطوير علاجات لأمراض الدماغ المستعصية حاليا وقوع اصابات. وبالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام الخلايا الجذعية لأبحاث الخلايا الجذعية التي تهدف إلى دراسة مفصلة لآليات التمايز والعصبية transdifferentiation والاشارات الوراثية والبيئية التي توجه تخصص الخلايا في أنواع الخلايا معين. هذا الفيديو يوضح التقنية المستخدمة لتصنيف الخلايا من أجنة اليوم 12.5 الماوس الدماغ الأمامي الظهري. الإجراء يشمل حصاد تشريح أجنة الفئران E12.5 من الرحم ، وإزالة "الجلد" مع غرامة ملقط تشريح وأخيرا عزل قطعة من قشرة الدماغ. بعد التشريح ، يتم هضمها والأنسجة وفصلها آليا. ثم يتم استزراع الخلايا تنفصل معلق في وسائل الاعلام "الخلايا الجذعية" التي تحبذ نمو الخلايا الجذعية العصبية.
Protocol
- وقد تم عزل السلائف الماوس العصبي (الشخصيات) من القشرة E12.5 الجنين.
- تمت إزالة طبقات الجلد والوسيطة من حويصلات الدماغ الانتهائي تشريح.
- وحضنت الحويصلات في التربسين 0.05 ٪ مع EDTA 0.02 ٪ وبنسبة 0.2 ٪ في جيش صرب البوسنة لمدة 20 دقيقة HBSS عند 37 درجة مئوية.
- أوقف Trypsinization بواسطة حجم مساو من 1 ملغ / مل فول الصويا مثبط التربسين (سيغما # T6522) في HBSS.
- الأنسجة ويساعد على هضم فصلها باستخدام عدة جولات من سحن مع ماصات باستور النار المصقول.
- وجرفت المياه خلايا مرة واحدة مع جيش صرب البوسنة 0.2 ٪ في HBSS ومطلي على 50000 خلية / مل على laminin المغلفة coverslips في وسائل الإعلام مع 20 نانوغرام / EGF مل و 10 نانوغرام / مل FGF2 (R & D أنظمة أو Peprotech) ، و 2 ميكروغرام / مل الهيبارين ( سيغما).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقد تم إحراز تقدم كبير في فهمنا للتنمية الجهاز العصبي المركزي وبيولوجيا الخلايا الجذعية بفضل قدرتنا على الحصاد ، عزل والثقافة الخلايا الجنينية الجذعية العصبية. هذا الفيديو يوضح تشريح القشرة الدماغية E12.5 الماوس وتفصيل لاحق وزراعة الخلايا الجذعية الجنينية من العصبية. وقد الأخرى أساليب أخرى كثيرة مماثلة استخدمت بنجاح من قبل باحثين آخرين.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
