Summary
Cette vidéo décrit la méthode utilisée pour l'isolement de neuroprecursors du cortex en développement de souris embryonnaires. La procédure pour la suppression des embryons dans l'utérus, la dissection du tissu cortical, et digérant le cortex cérébral est démontré isolés.
Abstract
Primaire cultures de cellules souches neurales sont utiles pour étudier les mécanismes sous-jacents développement du système nerveux central. Recherche sur les cellules souches va augmenter notre compréhension du système nerveux et peut nous permettre de développer des traitements pour les maladies du cerveau actuellement incurables et des blessures. En outre, les cellules souches doivent être utilisés pour la recherche sur les cellules souches destinées à l'étude détaillée des mécanismes de différenciation neuronale et transdifférenciation et les signaux environnementaux et génétiques qui dirigent la spécialisation des cellules dans des types cellulaires particuliers. Cette vidéo montre une technique utilisée pour désagréger les cellules à partir du jour 12,5 prosencéphale embryonnaire dorsale de souris. La procédure de dissection comprend la récolte d'embryons de souris E12.5 de l'utérus, en supprimant la «peau» avec de fines pinces à disséquer, et enfin d'isoler des morceaux de cortex cérébral. Après la dissection, le tissu est digéré et dissociées mécaniquement. Les cellules resuspendues dissociées sont ensuite cultivées en "cellules souches" des médias qui favorise la croissance des cellules souches neurales.
Protocol
- Précurseurs neuronaux de la souris (PNJ) ont été isolés à partir du cortex E12.5 embryon.
- Couches de la peau et mésenchymateuses ont été retirés de vésicules télencéphalique disséqué.
- Les vésicules ont été incubés dans de la trypsine 0,05% à 0,02% EDTA et 0,2% de BSA dans du HBSS pendant 20 minutes à 37 ° C.
- Trypsinisation a été arrêté par un volume égal de 1 inhibiteur mg / ml trypsine de soja (Sigma # T6522) dans HBSS.
- Tissu de digestion ont été dissociées en utilisant plusieurs séries de trituration avec des pipettes Pasteur polie au feu.
- Les cellules ont été lavées une fois avec 0,2% de BSA dans du HBSS et étalées à 50.000 cellules / ml sur la laminine enduit de lamelles dans les médias avec 20 ng / ml EGF, 10 ng / ml FGF2 (R & D Systems ou Peprotech), et 2 ug / ml d'héparine ( Sigma).
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Discussion
De grands progrès dans notre compréhension du développement du SNC et biologie des cellules souches ont été rendues possibles par notre capacité à récolter, isoler et cultiver des cellules embryonnaires souches neurales. Cette vidéo montre la dissection du cortex de souris E12.5 cérébrale et la désagrégation ultérieure et la culture d'embryons des cellules souches neurales. Beaucoup d'autres d'autres méthodes similaires ont été employées avec succès par d'autres chercheurs.
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
