Summary
Bu video embriyonik farelerin gelişmekte olan korteks neuroprecursors izolasyonu için kullanılan yöntem açıklanır. , Embriyoların rahim kaldırarak, kortikal doku diseksiyon, ve sindirerek izole serebral korteks prosedür gösterilmiştir.
Abstract
İlköğretim nöral kök hücre kültürleri, merkezi sinir sistemi gelişimi altında yatan mekanizmaları inceleyerek için yararlıdır. Kök hücre araştırmaları sinir sistemi anlayışımız artacak ve bize şu anda tedavisi mümkün olmayan beyin hastalıkları ve yaralanmalar için tedavi geliştirmek için izin verebilir. Buna ek olarak, kök hücreleri, sinir farklılaşma ve transdiferansiye mekanizmaları ve genetik ve çevresel sinyaller detaylı bir çalışma amaçlayan kök hücre araştırmaları için kullanılması gerektiğini, özellikle hücre tipleri içine hücreleri doğrudan uzmanlaşma. Bu video hücreleri embriyonik gün 12.5 fare dorsal önbeyin parçalara ayırma için kullanılan bir tekniktir göstermektedir. Diseksiyonu prosedür E12.5 fare embriyoları rahim, hasat, ince diseksiyon forseps ile "deri" kaldırma ve sonunda serebral korteks parçaları izole içerir. Diseksiyonu takiben, doku ve mekanik ayrışmış sindirilir. Yeniden süspanse ayrışmış hücreler daha sonra sinir kök hücrelerinin büyüme yana "kök hücre" medya kültürü vardır.
Protocol
- E12.5 embriyo korteks Fare sinir öncüleri (NPC) izole edildi.
- Deri ve mezenkimal katmanları disseke telencephalic veziküller çıkarıldı.
- Veziküller, 37% 0.02 EDTA ve 20 dakika boyunca HBSS% 0,2 BSA ° C ile% 0.05 tripsin inkübe edildi.
- Trypsinization HBSS 1 mg / ml soya tripsin inhibitörü eşit hacmi (Sigma T6522) tarafından durduruldu.
- Doku yangın cilalı Pasteur pipetler öğütme birkaç tur kullanarak ayrışmış sindirir.
- Hücreler HBSS içinde% 0.2 BSA ile bir kez yıkanmış ve 20 ng / ml EGF, 10 ng / ml FGF2 (R & D Sistemleri veya Peprotech), ve 2 ug / ml heparin (medya laminin-kaplı lamelleri 50.000 hücreleri / ml kaplama edildi Sigma).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Yeteneğimizi embriyonik nöral kök hücreler, hasat, izole etmek ve kültür merkezi sinir sistemi gelişimi ve kök hücre biyolojisi anlayışımıza büyük gelişmeler ile mümkün olmuştur. Bu video E12.5 fare serebral korteks ve embriyonik nöral kök hücrelerin sonraki ayrıştırılmasıyla ve kültür diseksiyonu göstermektedir. Birçok diğer benzer yöntemlerle başarılı bir şekilde diğer araştırmacılar tarafından istihdam edilmiştir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
