Summary
Abstract
Aggression är en medfödd beteende som utvecklats inom ramen för försvara eller att få resurser. Denna komplexa sociala beteende påverkas av genetiska, hormonella och miljöfaktorer. I många organismer är aggressivitet avgörande för överlevnad, men kontrollera och undertrycka aggression i olika sammanhang har också blivit allt viktigare. Under senare år har ryggradslösa djur blivit alltmer användbara som modellsystem för att undersöka den genetiska och system biologiska grunden för komplexa sociala beteende. Detta beror delvis på att de olika repertoar av beteenden ut av dessa organismer. I den medföljande videon, disposition vi en metod för analys av aggression i Drosophila vars design omfattar viktiga ekosystem etologiska begränsningar. Detaljer omfatta åtgärder för: att göra en kämpande kammare, isolera och måla flugor, lägga flyger till kampen kammaren, och video slagsmål tejpning. Denna metod används för närvarande för att identifiera gener viktiga för aggression och i utarbetandet av neuronala kretsar som ligger bakom produktionen av aggressivitet och andra sociala beteenden.
Protocol
1. Montering av kammarens väggar
- Ta två vanligt glas diabilder, markera mitten på de båda kanterna och med hjälp av en rak kanter härskare som en guide, poäng glaset med diamant saxen.
- Skjut Diamantskärare fram och tillbaka några gånger tills du hör ett skrapande ljud.
- Tvätta glaset, och hålla den med två pappershanddukar över ett krossat glas kärl, tryck försiktigt nära den perforerade linjen med den perforerade sidan
vänd bort från dig för att bryta bilden i två halvor. - Lägg gärna glaset lim längs en kant på en glasbit och trycka en andra glasbit mot limmet i rät vinkel mot den första pjäsen. Ställ ner på en platt yta (aluminiumfolie, vaxat papper eller vanligt papper) och låt in i minst en timme.
- Efter en timme, upprepa tillämpningen av lim steget att bilda en kvadrat kammare och låt stelna över natten.
2. Placering av väggarna i en petriskål
- Ta upp på en petriskål och fyll till ett djup av minst 5 mm med en uppvärmd lösning av 2% agaros (mikrovågsugn agarosen i avjoniserat vatten tills den är helt upplöst).
- Vänta några minuter, men samtidigt upplösta, placera väggarna i kammaren i mitten av skålen. Ta botten av petriskålen, placera den nedre sidan uppåt. Med hjälp av en flamma uppvärmd rakt dissekera nål, göra en uppsättning av små hål (> 1 mm) i mitten av skålen för ventilation. Gör ett större hål (~ 4 mm diameter) lite åt sidan för att införa flyger till kammaren. Lägg en bit avtagbar etikett tejp över det större hålet.
3. Göra maten cup
- Värm en flaska flyga mat till den punkt där maten är smält. Använd en pasteurpipett att överföra mat till en nedläggning scintillation injektionsflaska fylla den till en plan yta upptill. Var noga med att undvika luftbubblor och låt svalna.
- Gör färsk jäst klistra in genom att mala en liten mängd torrjäst och några droppar vatten i en mortel. Tillsätt mer jäst och vatten tills konsistensen är tjock nog att tillåta en liten synlig droppe att plockas upp av en tandpetare och tillämpas på mitten av maten ytan.
- Placera flaskan med mat i mitten av kammaren och lägg ner i petriskål, inverterad så att sidorna är upp och inte skymmer utsikten, på toppen av kammaren. Införa två 3-5 dag gamla flyger genom aspiration in i kammaren genom det större hålet i toppen. Täck det hålet med tejp och placera en bit svart filterpapper med ett 2 cm hål skära i den i den övre skålen.
- Placera en skrivbordslampa ovanför kammaren, tillräckligt långt bort att det inte kommer värme i kammaren, och placeras så att den lyser maten ytan. Hela församlingen ska helst placeras i en miljö med hög luftfuktighet och en temperatur på 22-25 ° C.
4. Börja videofilmade genom främre vägg i kammaren när båda flugor på foodsurface.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
