Biology

Studeren Agressie in Drosophila (fruitvliegjes)

Published: February 25, 2007 doi: 10.3791/155

Sibu Mundiyanapurath¹, Sarah Certel¹, Edward A. Kravitz¹

¹Department of Neurobiology, Harvard Medical School

Summary

Abstract

Agressie is een aangeboren gedrag dat zich ontwikkeld in het kader van de verdediging of het verkrijgen van middelen. Dit complex sociaal gedrag wordt beïnvloed door genetische, hormonale en omgevingsfactoren. In veel organismen, agressie is van cruciaal belang om te overleven, maar beheersen en onderdrukken van agressie in verschillende contexten ook steeds belangrijker geworden. In de afgelopen jaren, zijn ongewervelde dieren steeds nuttig als modelsystemen voor het onderzoek naar de genetische en biologische systemen basis van complex sociaal gedrag. Dit is gedeeltelijk te wijten aan de uiteenlopende repertoire van gedragingen tentoongesteld door deze organismen. In de begeleidende video, schetsen we een methode voor het analyseren van agressie in Drosophila waarvan het ontwerp omvat belangrijke eco-ethologische beperkingen. Details zijn stappen voor: het maken van een strijd kamer, isoleren en schilderen vliegt, vliegt toe te voegen aan de strijd kamer;-en video-taping gevechten. Deze aanpak wordt momenteel gebruikt om de kandidaat-genen die belangrijk zijn in agressie te identificeren en bij de uitwerking van de neuronale circuits die ten grondslag ligt aan de uitgang van agressie en andere sociale gedrag.

Protocol

1. Montage van de wanden

Neem twee gewoon glas dia's, markeer het midden op de twee randen en met behulp van een rechte rand heerser als een gids, scoren het glas met de diamantslijper.
Schuif de diamantslijper heen en weer een paar keer totdat je hoort een schrapend geluid.
Was het glas, en hou het met twee papieren handdoeken over een gebroken glas houder, druk zachtjes dicht bij de ingesneden lijn met de zijkant gescoord
van u af naar de dia te breken in twee helften.
Royaal van toepassing het glas lijm langs een rand van een stuk glas en duw een tweede stuk glas tegen de lijm in een rechte hoek ten opzichte van het eerste stuk. Plaats naar beneden op een vlakke ondergrond (aluminium folie, vetvrij papier of gewoon papier) en laat die gedurende minstens een uur.
Na een uur, herhaalt de toepassing van de lijm stap naar een vierkante kamer vorm en 's nachts laten uitharden.

2. Het plaatsen van de muren in een petrischaal

Neem de top van een petrischaal en vul tot een diepte van ten minste 5 mm met een verwarmde oplossing van 2% agarose (magnetron de agarose in gedeïoniseerd water totdat het volledig oplost).
Wacht een paar minuten, maar terwijl nog ontbonden, de muren van de kamer in het centrum van de schotel. Neem de bodem van de petrischaal, een stijging van plaats deze onderkant. Met behulp van een vlam verwarmd rechte ontleden van de naald, maak een reeks van kleine gaatjes (> 1mm) in het centrum van de schotel voor ventilatie. Maak een groter gat (~ 4 mm diameter) enigszins aan de zijkant voor de invoering vliegt naar de kamer. Leg een stukje verwijderbaar label tape over het grotere gat.

3. Het maken van het voedsel cup

Verhit een flacon van vlieg voedsel tot het punt waar het eten is gesmolten. Gebruik een Pasteur pipet om voedsel over te dragen aan een scintillatieflesje sluitingen te vullen op een vlakke ondergrond aan de top te vormen. Wees voorzichtig om luchtbellen te voorkomen en het kan afkoelen.
Maak verse gist pasta door het malen van een kleine hoeveelheid droge gist en een paar druppels water in een mortier en een stamper. Voeg meer gist of water totdat de consistentie is dik genoeg om een klein zichtbaar druppel te worden opgepikt door een tandenstoker en toegepast op het midden van het voedsel oppervlak.
Plaats de flacon van voedsel in het midden van de kamer en plaats de bodem van de petrischaal, zodat omgekeerd, dat de zijkanten omhoog zijn en niet versluieren van het uitzicht, op de top van de kamer. Introduceren twee 3-5 dagen oud vliegt door aspiratie in de kamer door het grotere gat in de top. Bedek dat gat met tape en plaats een stuk zwart filter papier met een gat van 2 cm snijden in het in de bovenste schotel.
Plaats een bureaulamp boven de kamer, ver genoeg dat het niet de kamer warmte, en zo, dat er zal het voedsel oppervlak te verlichten. Het geheel moet idealiter worden geplaatst in een omgeving met hoge luchtvochtigheid en een temperatuur van 22-25 ° C.