主动脉环含量

Summary

血管生成，从预先存在的血管的血管的萌芽，是与自然和病理过程中。在这里，我们展示了一个主动脉环实验允许的血管生成potentiators和抑制剂可直接添加到文化的主动脉环。发芽和neovessel产物，可以通过检查为期6-12天的主动脉环确定。

Abstract

血管生成，从先前存在的血管血管发芽与自然和病理过程。各种血管生成的实验涉及个别内皮细胞在培养条件（1）的研究。主动脉环实验是一种血管生成模型，器官培养的基础上。在这个实验中，血管生成血管生长的主动脉（从（2）修改）段。简言之，小鼠胸主动脉切除，脂肪层和外膜被删除，并准备戒指约1毫米长。然后嵌入在一个小的坚实的圆顶地下室矩阵提取物（BME）的48孔板个别水井内投，个人环。血管生成因子和血管生成抑制剂，可直接添加到戒指，和主动脉环和其他类型的细胞混合共培养可以旁分泌的血管生成影响的研究工作。发芽立体显微镜下观察期6-12天检查。由于大的变化，在主动脉段，实验的违规行为造成6 plicates，强烈建议。 Neovessel生长监测整个实验过程，并用相差显微镜成像，以及相关的血管生成和抗血管生成因子，细胞死亡标记和亚硝酸盐的测量收集上清。

Protocol

前一天的实验：

1. 允许BME（生长因子减少，Cultrex，Trevigen）解冻在冰上或4 ° C，一旦解冻保持在冰上，以防止重新巩固。

日实验：

1. 小鼠（6-7周龄）是麻醉和流血。
2. 到冷无菌PBS填充培养皿中取出胸主动脉。
3. 从周围的脂肪组织进行机械清洗。注意，避免在任何时间干燥主动脉。
4. 使用手术刀片，片主动脉平均为1毫米的戒指。必须是统一的，干净的切割。
5. 鲜冷PBS传输环，在任何时候都保持在冰上。
6. 使用预冷枪头，加圆润下降了150毫升冷的BME在48孔板，每孔。允许BME的下降，以巩固在37 ° C时20-30分钟。
7. 在每个穹顶的顶端中心放置一个单一的主动脉环。 10分钟在37 ° C。
8. 在每个环的顶部添加一个额外的150毫升的BME。 20-30分钟在37 ° C。
9. 准备介质：人内皮无血清培养基（GIBCO公司，卡尔斯巴德，CA）与2％FCS，50个单位/ ml青霉素和50μg/ mL链霉素（Cellgro）的补充。
10. ，每孔加入500毫升中含其中一：
    1. 实验样品。
    2. 阳性对照：内皮细胞生长补充心电图仪（ECG，终浓度为200微克/毫升，BD公司）。
    3. 阴性对照：中等单独。
11. 孵育板在37 ° C为12天，6至12天之间环下标准相衬的立体照片。
12. 可选：收集上清。

注：

1. 任何时候都保持在无菌条件下。
2. 避免陷入引进的BME气泡。

Discussion

主动脉环实验的方式，以评估血管生成以及抗血管生成的因素是一个有益的工具。主动脉环招聘平滑肌细胞和周细胞生长的关联与内皮细胞管，这意味着它们在体内neovessels解剖学类似的船只。此外，小鼠主动脉环实验，认为对这一物种的基因工具繁多的优势。然而，有几个缺点主动脉环检测。首先， 在体内的血管生长发生微血管和大血管，如主动脉。其次，在处理环不一致和周围组织船只上剩余的金额可以影响血管的生长。来自不同主动脉或小鼠的不同年龄和应变的戒指，也可以干扰与血管生成的反应。最后，血管生成血管生长发生在三个层面，这使得它非理想的照片和量化。两者合计，足够的内部控制和多次重复执行时，这个实验是比较简单，非昂贵，非常翔实，明显优于其生物的复杂性和相关性血管内皮文化。