Summary
عزلة postimplantation مرحلة الأجنة يسمح احد لدراسة وتحليل الجينات الزخرفة الخلية نسب عمليات صنع القرار خلال التطور الجنيني ، ولكن التشريح السليم للجنين في وقت مبكر يمكن أن يكون تحديا. يصف هذا البروتوكول وسيلة لعزل متتالية في وقت مبكر البدائية ، مرحلة أجنة (~ 6.5 أيام تال للجماع [DPC]).
Abstract
يمكن تحليل أنماط التعبير الجيني خلال المراحل المبكرة من التطور الجنيني الثدييات توفر أدلة مهمة حول تفاعل الجينات وظيفة خلية خلية ، وآليات دليل يشير إلى أن الزخرفة الجنينية. ومع ذلك ، يمكن تشريح الجنين الماوس من الساقط بعد وقت قصير من إجراء زرع تكون صعبة ، ومفصلة خطوة بخطوة توثيق هذه العملية غير متوفرة.
نحن هنا لشرح كيفية معزولة بعد الزرع (6.5 DPC) من الأجنة تشريح أولا رحم فأرة حامل (الكشف عن عين قابس المهبلية اليوم coitum poist 0.5) وبعد تشريح الجنين الساقط من الأمهات. يوصف تشريح غشاء رايخرت فضلا عن إزالة مخروط المشيمة الظاهر.
Protocol
تشريح الجهاز التناسلي من فئران
- يصرح باستخدامها في الحيوانات الحوامل خنقا 2 أكسيد الكربون باستخدام غاز مضغوط.
- وضع الاستلقاء على لوحة ماصة الحيوانية ونقع في الايثانول 70 ٪ للحد من مخاطر تلوث تشريح الفأر مع الشعر.
- قرصة الجلد وإحداث شق صغير الجانبية في خط الوسط مع مقص الجراحية العادية. الاستمرار على الجلد بقوة فوق وتحت شق الجلد وسحب بعيدا في اتجاه الرأس والذيل لفضح البطن.
- فهم الصفاق مع ملقط وقطع لفضح تجويف البطن.
- تحديد الأعضاء التناسلية في المنطقة الظهرية من تجويف الجسم : قرنان الرحم ، وقناة البيض والمبيض.
التلم البدائي في مرحلة (6.5 DPC) تشريح
- إزالة قرن الرحم بواسطة استيعاب الرحم أسفل قناة البيض وقطع عليه مجانا على طول mesometrium. تشريح الرحم في مكان بارد PBS الجليد.
الشكل 1 - كل فصل الجنين عن طريق خفض بين المواقع على امتداد القرن زرع الرحم.
الشكل 2 - فهم بطانة الرحم عن طريق تحريك العضلات ملقط ساعاتي بين طبقة العضلات المحيطة بها ، ويلفها الأنسجة الساقط. قشر طبقة العضلات والظهر ، ويعرض الساقط.
الشكل 3 - مقطع قبالة جزء من يتعرض الساقط في ذروة (حوالي 1 / 5 من النسيج الساقط) الذي سيعرض تلميح midventral أو البعيدة الجنين المغلقة.
الشكل 4 - ويمكن للجنين قصفت بها باستخدام الملقط نصائح. يخترق الساقط مع ملقط الجنين المحيطة وملقط المسيل للدموع لفتح الساقط على حدة.
الشكل 5 - بمجرد إزالة الجنين ، قد لا يزال الغشاء رايتشارت وترفق كذلك مخروط المشيمة الظاهر (الأرومة الغاذية). يمكن تشريح الجنين مزيدا من تشريح دقيق.
الشكل 6
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Postimplantation في الماوس يحدث بين 4.5 DPC والولادة. ويمكن تطبيق هذه الطريقة تشريح ، وأساسا كما وصفها ، لعزل في وقت سابق أو لاحق الأجنة في مرحلة DPC 5،5-8،5.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro Dissecting Forceps serrated, straight | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5130 | 2 pairs |
| Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5010 | 2 pairs |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1x) | Reagent | Invitrogen | 14190 | |
| Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| 4% Paraformaldehyde in PBS | Reagent | |||
| Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Tool | Fisher Scientific | 08-940 | |
| Pregnant female mice | Animal | |||
| Dissecting Microscope | Microscope |
References
- Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).
