Summary
Куриных chorioallantoic мембраны (CAM) является уникальным, естественно иммунодефицитных благоприятные условия для изучения культуры ангиогенеза и опухолей. Это видео статья демонстрирует различные этапы на куриных
Protocol
Все оборудование и реагенты должны быть приобретены стерильные или должна быть тепла или пара стерилизации или стерилизуют 70% этанола.
Авторы утверждают, что эксперименты на животных были проведены в соответствии с Европейскими сообществами Директивы Совета (86/609/EEC), следующие руководящие принципы в отношении НИЗ уход и использование животных для экспериментальных процедур и правил, установленных Институциональные животных Уход и использование комитета (IACUC) в университете Дуйсбург-Эссен (Германия).
Часть 1: инкубация яиц
- Оплодотворенные яйца можно хранить при температуре 13 ° С не более одной недели.
- Яйца инкубируют в течение 72 часов, лежа горизонтально в инкубатор с движущейся лоток, вращающиеся яйца 12 раз в день непрерывно. Влажность поддерживают на уровне 60 - 62%, температуры инкубации при 37,5 ° C.
Примечание: Перед началом инкубации, грязи, перья и экскременты осторожно удаляются с яичная скорлупа механически сухим вытирая с общими, серый зигзаг стороны бумажные полотенца, которые грубо, а не мягкую структуру поверхности. Вытирая яйца с этанолом или дезинфицирующим средством, однако, значительно снижается выживаемость эмбрионов, независимо от используемой жидкости.
Часть 2: Ex ово культуры
- После инкубации в течение 72 часов, яйца удаляются из инкубатора.
Примечание: яйца выдерживают в течение 72 часов, потому что - в соответствии с нашими экспериментами - по неизвестным причинам, но по согласованию с Ауэрбах и др.1 ранних стадиях развития, имели значительно более низкие показатели выживаемости. На этапах позднее чем через 72 часа желток мешок, который еще не покрыты CAM становится тоньше и имеет тенденцию придерживаться яичной скорлупы ведущих (я) до маленьких кровотечений в области присоединения и (II) разрыв желтка мешок мембраны. Поэтому данный способ не применим к эмбрионы старше 72 часов. - Верхняя часть яйца, где находится зародыш, отмечен карандашом поскольку эмбрион сопротивляется вращению в определенной степени.
- Яйцо держится горизонтально с карандашом марки на верхней части и трещины по краю 80 мм треугольной магнитной мешалкой укладки перпендикулярно длинной оси яйца.
Примечание: Для лучшего чувства, ни перчатки должны быть использованы, но руки должны быть вылечены с 70% этанола. Важно, что яичная скорлупа, а также яйцо мембраны открываются. Утечка яичный белок является безопасным признак того, что яйцо мембрана имеет перфорированные. - Яйцо держался ближе к нижней чашке Петри, чтобы избежать дальнейшей утечки яичный белок.
Примечание: Во время первоначальной процедуры открытия, важно, что яичный белок на дне чашки Петри все еще подключен к остальной внутри яйца, поскольку это приводит к вакуум внутри яйцо, которое проводит желток с зародышем внутри на вершине яйцо. Вакуума может регулироваться либо давление пальца, который контролирует поступление воздуха в яйцо или, подняв яйцо, которое увеличивает колонке связаны яичный белок, т.е. вакуум. - По мягко нажимая на меридиан проходит через трещины и экватора яйца по большим и средним пальцами можно регулировать вакуум. Содержание яйца могут быть переданы в чашке Петри неповрежденным, если яйцо с желтком плавно поднимается и обе половинки корпуса тщательно разделены. Эмбриона и желточного суда должны лежать на верхней части неповрежденной желток.
Примечание: Если карандаш знак не хранится на вершине, эмбрион может быть больно, когда растрескивание оболочки. Если яйца не трескаются достаточно тщательно и эмбрионы старше 72 часов (см. выше), мешок желтка прилипает к оболочке и часто разрывов. То же самое происходит, когда влажность инкубатора ниже, чем 60% или яйца не поворачивается во время инкубации. - Экс ово культур возвращаются в инкубатор и выдерживают при 37,5 ° 38,2 ° С и влажности 60%. CO 2 и O 2 питания не требуется, если инкубатор не закрывается герметично (вентиляция сетки частично открыт!) И специальные чашки Петри с прокладками между крышкой и блюда используются.
Примечание: Перемещение эмбрионов должно быть сведено к минимуму в течение первых дней инкубации. Слишком большое волнение приводит к высокой смертности. С 9-й день инкубации года, эмбрионы, менее чувствительны к агитации.
Мертвые эмбрионы должны быть устранены немедленно, чтобы избежать инфекции.
Если инкубаторов культуры клеток используются, которой герметически закрыты, O 2 питания является обязательным для эмбрионов, чтобы не умереть. Влажность имеет важное значение для CAM, чтобы не иссякнуть, и если инкубации температура ниже 37 ° С, эмбрионы будут развиваться слишком медленно.
Часть 3: Применение веществ для ангиогенеза анализы
- Автоклавного сложенном фильтровальная бумага (50,5 мм в диаметре) пробиваются через отверстие перфоратором и используются в качестве вспомогательных материалов (носитель) для жидкого вещества, применяемые для CAM.
Примечание: Почти каждый перевозчик материала (см. таблицу ниже) вызвало раздражение CAM, особенно, когда применяется до инкубации 10-й день, так как она изменилась разработке архитектуры CAM судна. Это также включены потенциально инертные вещества, такие как гидроксиэтил фольги целлюлозы, тефлон губки (PTFE-pledgets), коллагеновые губки, коллаген фольги, стерильную марлю (мазки), круглая крышка скользит, и кремний колец, которые все вызванные ложным положительным результатам. Фильтровальная бумага, казалось, дело как минимум раздражение, и поэтому используется в наших тестах. - Когда CAM полностью разработана, до 6 разных образцах могут быть применены и их влияние можно сравнить на одной CAM.
- Для того чтобы избежать высыхания фильтры дополнительные дозы (3 мкг родной angiotropin) или буфера (5 мкл PBS) должны быть вновь применен каждый день.
- С 3-й день после нанесения, кровеносные сосуды ориентироваться на ангиогенных веществ на фильтрах, в то время как структура кровеносные сосуды, окружающие управления не изменится.
Примечание: CAM не следует путать с желтком-мешок. CAM является динамично развивающейся структурой в то время как мешок желток с небольшим статических отклонений в процессе разработки. О развитии день три развивающиеся CAM могут быть признаны в первый раз на хвостовом конце зародыша как маленький пузырек. Между третий день и день десять первоначальный пузырек расширяется, создавая сложенном двухслойные мембраны зарастания мешок желтка все более быстрыми темпами. Веб-приложение должно быть на полпути между эмбрионом и складки CAM (границы), а в противном случае эмбриона препятствует микроскопические наблюдения эффектов в проходящем свете. Кроме того, фильтр с ангиогенных вещество внутренним, когда CAM продолжает расти.
Часть 4: Прививка клеток на CAM
4.1.Preparation клеток
- Сливной клетки передаются от культуры колбу для FALCON труб с помощью стерильной 25 мл пластиковые пипетки с помощью пипетки помощи.
- Для оценки количества клеток, 15 мкл суспензии клеток передается в камеру Нойбауэр и клеток подсчитываются вручную под микроскопом.
- Сокол труб центрифугируют в течение 3 мин при 1000 оборотов в минуту при комнатной температуре и супернатант отбрасывается.
- Для живых отслеживания клетки, клетки разводили PBS до нужной концентрации (здесь: 2х10 7 клеток / мл) и окрашивали например PKH26 (Sigma), красный флуоресцентный живых клеточных мембран маркировке комплекта, в зависимости от производителя протокол.
Клетки ресуспендировали в культуре клеток среды (преимущественно средний Дульбеко изменение орла; DMEM) до нужной концентрации для инъекций (10 7 клеток / мл) или прививка (3х10 6 клеток / мл). Различные концентрации клетка применяются для инъекций против прививки в соответствии с концентрацией, уже опубликованных в литературе 15-17 и нашего опыта.
Прививка 4,2 клеток на CAM
- Кольца (~ 1 мм толщиной) вырезаны из 1мл кончиком пипетки или периферического венозного катетера (ПВЛ) трубки с помощью острого скальпеля и применяется к веб-камера E6-E14 куриного эмбриона культурный ово отл.
Примечание: Старайтесь не "видел" несколько раз, но, чтобы прорваться через кончика пипетки или катетер, трубка с одной обработке с использованием новых, очень острым скальпелем, чтобы избежать острых кромок на результате колец. Проверьте круги под микроскоп для острых углов в результате микро-трещины. - В зависимости от размера кольца 20 мкл 3x10 6 клеток / мл клетки пипеткой в общей сложности в одно кольцо или как разделить объемы в несколько колец.
Примечание: В некоторых случаях травматизации CAM, осторожно выскабливание является предварительным условием, например, для облегчения инокуляции клетки 17 и capillarisation трансплантатов (см. ниже). Если, однако, травматизации CAM не предназначена или противопоказано, например, для исследования инвазивный потенциал опухолевых клеток, кольца не должна использоваться для прививок, но клетки должны применяться непосредственно, как применение кольца или кольца, сами по себе могут вызывать поражения микро- . Если кольца используются, их следует сократить как можно тоньше, чтобы минимизировать вес и избежать отступ CAM.
Часть 5: Intravitreous инъекции клеток
- Шприце Hamilton микролитр промывают несколько раз с 70% этанола и, наконец, стерильной PBS.
- Микро шприц наполнен подготовлены окрашенные или неокрашенные клеточной суспензии (см. часть 4.1).
Примечание: инъекции должна быть тщательно подобраны, чтобы не повредить кровеносные сосуды CAM или смежных структур эмбриона (brain!) более чем на проникновение иглы. Инъекция должна быть сделана под рассечение бинокль. - Под микроскопом контроль, Осторожно, но быстро проникают CAM и глаз слоями с иглы шприца и постоянно вводят 10 до максимальной 20 мкл суспензии клеток (преимущественно разводят в PBS) в стекловидное тело из куриного эмбриона культурный ово отл.
Примечание: Если CAM не может быть пронизана иглы, он может быть удален в сайт с мало или совсем нет кровеносных сосудов, аккуратно разрывая его на части с двумя щипцами. - Игла должна оставаться 1-2 секунд в глаза, чтобы избежать потери вводили суспензию клеток в результате утечки.
Часть 6: Препарирование почки куриного конечностей
- Яйца будут удалены из инкубатора после 3-х до 4 дней инкубации (E3/E4 = Гамбургер Гамильтон (HH) stage18-23)
- Яйца имеют трещины на краю треугольной магнитной мешалкой и переносили в чашки Петри (подробности: см. часть 2) и эмбрион расчлененный с подключенного суда желток, сокращая круг, используя весной ножницами.
- Эмбрион переносится на свежем чашке Петри заполненный холодным, стерильным PBS за счет использования небольшого ложка процедить и омывается рода агитации.
- Эмбрион переносится в небольшой чашке Петри заполнена стерильной PBS и освобождается от окружающих оболочек, осторожно отрывая их друг от друга с мелкими щипцами.
- Лимб почки отделяются от микрохирургической щипцов как можно ближе к телу, как возможно, поняли и переданы в веб-камера 8-10-дневных куриных хост культурный ово бывший (см. прививки процедуры).
Часть 7: Подготовка почки мыши конечностей
- Время беременных вязки создаются и утром того дня, когда вагинальные плагин обнаруживается в брачных женщин обозначен беременности 0 день.
- Беременные женщины приносят в жертву цервикальным сдвигом, когда развитие эмбрионов достигли эмбриональных день (Е) от 10 до 13 и фиксируется на восковой доске.
- Брюшной стенки смоченной 70% этанола, разрезать вдоль средней линии и кожных лоскутов крепятся сбоку от булавки.
- Оба рога матки удаляют из брюшной полости, отдельных и переносят в стакан с холодной PBS.
- Эмбрионов разделены, переданы в чашку Петри и матки стены и зародышевых оболочек удаляются тщательно с помощью щипцов.
- Лимб почки срезают при помощи ножниц или весной отдельные тонкими щипцами как можно ближе к телу, как возможно, поняли и переданы в веб-камера 8-10-дневных куриных принимающей культурные ово бывший (см. прививки процедуры).
Часть 8: Сбор образцов опухоли
- Опухоль биопсии собраны в 2 мл пробирок Эппендорф заполнены опухолевых клеток конкретных культуральной среде (здесь: средняя Leibovitz) и выдерживают при комнатной температуре.
- Опухоль биопсии разрезают на 1-2 мм3 произведения стерильных скальпелей.
Примечание: Если опухоль образцы были слишком малы, они не могли бы приложить к CAM, если бы они были слишком большими, CAM может быть ранен и эмбрион может умереть. - Часть от основного образца биопсии привиты CAM из 8-10-дневных куриных хост культурный ово бывший (см. прививки процедуры).
Примечание: Принимая материала с поверхности биопсии увеличивает риск заражения мышцы или соединительной ткани.
Часть 9: Прививка процедуры
- Для пересадки конечностей почки или опухоли образцов, полностью разработан веб-камера 8-10-дневных куриных эмбрионов культурный бывший ово используется.
- Трансплантатов находятся в идеальном положении на CAM возле бифуркации У кровеносных сосудов.
- В нужном месте применения, CAM избирательно травмированы нежный от соскабливания (щипцы) peridermal верхней части двойного эпителиального слоя, оставляя нетронутыми базального слоя.
Примечание: Важно, чтобы избежать кровотечения или видимого разрыва капилляров. - Трансплантата передается CAM с минимальными PBS прилагается. В зависимости от взяточничества, как он может размещаться один или два раза на сайте CAM, где нет окончательного прививки предназначены для удаления чрезмерного PBS и, наконец, привитый на подготовленный травмированы CAM сайта.
- Трансплантат захвачен штраф пинцет и слоистые на CAM. В зависимости от чувствительности трансплантата, светового давления могут быть применены (не подходит для конечности почки) для маневра трансплантата в результате отступ CAM (подходит для образцов опухоли).
Примечание: Как цыпленок иммунная система развивается при эмбриональном день (E) 18, экс ово культур ксенотрансплантаты не должно быть продлен за пределы E17 в качестве хост куриных эмбрионов часто умирают.
Важно иметь в наличии CAM, хозяин, соответственно куриных эмбрионов культурный ово отл, приуроченный к источнику донорской ткани по Вашему выбору.
Часть 10: Re-прививки
- Эмбриона хозяин цыпленка убили обезглавливание.
- CAM сприлагается трансплантата снимается круговым вырезом с острыми ножницами и переносят в чашки Петри, заполненные PBS.
- Чрезмерное CAM вырезан из трансплантата к весне ножницы, за исключением бывших сайт привязанности.
- В случае больших образцов опухоли, привитой разрезают на половинки или несколько более мелкие куски и повторно привиты с передний край перед новым CAM второго хозяина.
Часть 11: Представитель Результаты
Рисунок 1. Shell-менее куриные культуры
Куриные эмбрионы различных этапах развития культурного бывший ово в чашках Петри.
Рисунок 2. Ex ово ангиогенеза CAM анализа
Оплодотворенные яйца куриные инкубировали горизонтально со скоростью 37 ° С и влажности 60 - 62%, а трещины в чашки Петри на эмбриональной день 4 (Е4). Инкубационный был продолжен на тех же условиях. На E10 стерильной фильтровальной бумаги (5,5 мм в диаметре) были слой поверх CAM и пропитанные или с 5 мкл PBS или 3 мкг родной angiotropin6. Капилляры были видны в направлении выравнивания angiotropin пропитанной фильтровальной бумаги на E14.
Рисунок 3. Ex ово пересадки почки конечностей
Лимб почек от цыпленка (E3/E4) и мыши (E13) были привиты CAM оболочки менее культур курицы. Кровеносные сосуды из CAM вошел конечности почки через два дня. Развитие конечностей почки продолжена в этих бывших ово культур идущие две фаланги этап в куриных и отображения снижение межпальцевых ткани в мышиной почки конечности.
Рисунок 4. Ex ово инокуляции опухоли образца
Биоптата рака мочевого пузыря был на прививку CAM из 10-дневного куриного эмбриона культурный ово отл. Через два дня в области культуры, опухоли образца была связана с сосудистой CAM и через 7 дней, многочисленные кровеносные сосуды ввода трансплантата не наблюдалось.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Инновационные или просто еще один протокол куриных культуры?
С бывшего корпуса менее протоколы культуры 1-4 общие показатели выживаемости куриных эмбрионов были низкими, например, ок. 30% 1. Изысканный бывший ово протокол культуры, описанные в этой статье видео, напротив, позволяет выживаемость более 50%. По сравнению с классическими в ово культур бывшего ово культуре куриных эмбрионов значительно облегчает доступность эмбриона CAM и цыпленка, и позволяет их экспериментальные манипуляции и постоянного мониторинга. Эта культура метод может быть использован для широкого спектра применения, начиная от расширения анализов ангиогенеза 5,6, упрощенную процедуру инъекции в стекловидное тело из глаза куриного эмбриона 7-9, 10-12 intravasation анализы, улучшение прививки и рост конечностей почки 13 и инновационных поддержание образцов опухолей 14. Таким образом, экс ово культуры способствует полезным инструментом в области развития и angionesis и опухолевых исследований.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Авторы хотели бы поблагодарить Дж. Kueper и Дж. Wittschier за отличную техническую помощь и проф Ruebben для снабжать опухоль материала.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Fertilized Eggs | Animal | Sorries-Trockels Vermehrungszucht GmbH | ||
| Mice | Animal | Charles River Laboratories | ||
| Incubator Type 3000 with rotating egg tray | Tools | Siemens AG | 9503 | Maintain at 37°C with relative humidity set above 60% |
| Egg incubator BSS 160 | Tools | Grumbach, Germany | 8101 | Maintain at 37-387deg;C with relative humidity set above 60% |
| PBS | Reagent | Sigma-Aldrich | PBS should be cold (> 4°C) and sterile | |
| Dulbecco’s modified eagle’s medium | Reagent | Sigma-Aldrich | D 6429 | DMEM culture medium |
| Leibovitz’s L-15 Medium | Reagent | Invitrogen | 31415-029 | here: collection medium for tumor samples |
| Tumor cell -specific medium | Reagent | Sigma-Aldrich | each research group should use the medium they culture their tumors cells in or common culture media, e.g. Leibovitz’s Medium or Dulbecco’s modified eagle’s medium supplemented with 15% fetal bovine serum (FBS), 4mM L-glutamine and 50 μM insulin |
|
| 70% EtOH | Reagent | Sigma-Aldrich | ||
| Magnetic stir bar, triangled 80 mm | Tool | VWR international | 442-0391 | A triangled magnetic stir bar serves well to crack the eggs shell. |
| Forceps DUMONT #5 | Tool | Fine Science Tools | 11252-30 | bevelled very fine shanks (0.05 mm x 0.02 mm tip) |
| Forceps DUMONT #7 | Tool | Fine Science Tools | 11271-30 | curved shanks (0.07 mm x 0.10 mm tip) |
| Spring scissors, straight, 8cm | Tool | Fine Science Tools | 15000-00 | fine, small straight blades |
| Fine Iris scissors, straight | Tool | Fine Science Tools | 14094-11 | Use to cut our the CAM |
| Standard scissors, straight, sharp/blunt | Tool | Fine Science Tools | 14007-14 | Use for decapitation or cervical dislocation |
| microliter syringe 1702 TLLX, 25 μl | Tool | Hamilton Co | 80222 | Use for injection into the vitreous |
| Hamilton 33-G needle (15 mm) | Tool | Fine Science Tools | 18073-15 | Use for injection into the vitreous |
| Sterile scalpels | Tool | Use for dissecting tumor samples | ||
| Small drain spoon | Tool | Geuder | 15758 | Use to transfer of small chick embryos |
| Wax board with fixing pins | Tool | Home made | Use to fix of animals for dissection | |
| Petri dishes 60 x 15 mm | Tool | Greiner Bio-One | 628102 | |
| Petri dishes 92 x 16 mm | Tool | Sarstedt Ltd | 82.1472 | |
| Sterile Petri dish 100 x 20 mm | Tool | Greiner Bio-One | 664160 | extra deep, with spacers for ventilation |
| Beaker | Tool | 300-600 ml | ||
| FALCON tubes | Tool | Falcon BD | 15 ml and 50 ml | |
| Eppendorf tubes | Tool | Eppendorf | 1.5 ml and 2 ml | |
| 1ml pipette tips | Tool | Use to cut plastic rings for application of substances / cells | ||
| Peripheral venous catheter (PVL) | Tool | Viggo® | Use to cut silicon rings from the tube for application of substances / cells | |
| Pipettes and tips | Tool | Eppendorf | ||
| Autoclaved folded Filters 595 1/2, 110 mm diameter | Tool | Schleicher Schuell | 311643 | Carrier, which caused least irritation of the CAM; used in the paper |
| PTFE-Pledget, non resorbing, 6,3 x 152.4 x 1.6 mm | Tool | santec-medical | REF 277, LOT 832/511-1 | Carrier; caused false positive results |
| Hxdroxyethylcellulose Tylose H 100000 | Reagent | Carrier mixed with Kollidon 17 PF; caused false positive results | ||
| Kollidon 17 PF | Reagent | BASF | S30200 | mixed with Hydroxyethylcellulose; caused false positive results |
| Collagen Biomatrix TissuDura | Tool | Baxter Internationl Inc. | REF B2246000999999 | Carrier; caused false positive results |
| Round glass cover slips, 11 mm | Tool | Assistent Germany | 1001/0011 | Carrier; causes false positive results |
| Bovine Collagen Sponge | Tool | Wyeth Animal Health | Carrier; caused false positive results | |
| Resodont Absorbable Collagen Membrane | Tool | Resorba Woundcare Germany | LOT 280303 | Carrier; caused false positive results |
| Non-Woven Swabs | Tool | Fink Walter GmbH | REF 328132 | Carrier; caused false positive results |
References
- Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. A simple procedure for long-term cultivation of chicken embryos. Dev. Biol. 41, 391-394 (1974).
- Tufan, A. C., Akdogan, I., Adiguzel, E. Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of development neurobiology. Neuroanatomy. 3, 8-11 (2004).
- Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules. Methods Enzymology. 444, 21-44 (2008).
- Ribatti, D. Chick embryo chorioallantoic membrane as a useful tool to study angiogenesis. Int. Rev. Cell Mol. Biol. 270, 181-224 (2008).
- Höckel, M., Sasse, J., Wissler, J. H. Purified monocyte-derived angiogenic substance (angiotropin) stimulates migration, phenotypic changes, and "tube formation" but not proliferation of capillary endothelial cells in vitro. J. Cell Physiol. 133, 1-13 (1987).
- Wissler, J. H. Engineering of blood vessel patterns by Angio Morphogens [Angiotropins]. Materialwiss. Werkstofftech. 32, 984-1008 (2001).
- Kistler, H. B. J. r., LaVail, J. H. Penetration of horseradish peroxidase into the optic nerve after vitreal or vascular injections in the developing chick. Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 20, 705-716 (1981).
- Halfter, W. Change in embryonic eye size and retinal cell proliferation following intravitreal injection of glycosaminoglycans. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 3289-3298 (2008).
- Oppitz, M., Busch, C., Shriek, G., Metzger, M., Just, L., Drews, U. Non-malignant migration of B16 mouse melanoma cells in the neural crest and invasive growth in the eye cup of the chick embryo. Melanoma Res. 17, 17-30 (2007).
- Uchibayashi, T., Egawa, M., Nakajima, K., Hisazumi, H., Tanaka, M., Endo, Y., Sasaki, T. Responses of tumour cell lines implanted onto the chorioallantoic membrane of chick embryo to anticancer agents in combination with hyperthermia. Urol. Res. 20, 237-239 (1992).
- Demir, R., Naschberger, L., Demir, I., Melling, N., Dimmler, A., Papadopoulus, T., Sturzl, M., Klein, P., Hohenberger, W. Hypoxia generates a more invasive phenotype of tumour cells: an in vivo experimental setup based on the chorioallantoic membrane. Pathol. Oncol. Res. , (2008).
- Kunzi-Rapp, K., Genze, F., Kufer, R., Reich, E., Hautmann, R. E., Gschwend, J. E. Chorioallantoic membrane assay: vascularized 3-dimensional cell culture system for human prostate cancer cells as an animal substitute model. J. Urol. 166, 1502-1507 (2001).
- Hall, B. K. Grafting of organs and tissues to the chorioallantoic membrane of the embryonic chick. TCA Manual. 4 (3), 881-883 (1978).
- Kunzi-Rapp, K., Kaskel, P., Steiner, R., Peter, R. U., Krahn, G. Increased blood levels of human S100 in melanoma chick embryo xenografts' circulation. Pigment Cell Res. 14, 9-13 (2001).
- McFall, R. C., Sery, T. W., Makadon, M. Characterization of a new continuous cell line derived from a human retinoblastoma. Cancer Research. 37, 1003-1010 (1977).
- Deryugina, E. I., Zijlstra, A., Partridge, J. J., Kupriyanova, T. A., Madsen, M. A., Papagiannakopoulos, T., Quigley, J. P. Unexpected effect of matrix metalloproteinase down-regulation on vascular intravasation and metastasis of human fibrosarcoma cells selected in vivo for high rates of dissemination. Cancer Research. 65, 10959-10969 (2005).
- Kim, J., Kovalski, K., Ossowski, L. requirement for specific proteases in cancer cell intravasation as revealed by a novel semiquantitative PCR-based assay. Cell. 94, 353-362 (1998).
