Summary
Avanços significativos na identificação de células-tronco estão sendo continuamente feitos. Para traduzir estas descobertas, no entanto, novos métodos para a entrega de celular devem ser concebidos. Aqui eu relato que as vias aéreas proporcionar uma rota segura para o transplante de células-tronco para os pulmões.
Abstract
Doença pulmonar é a principal causa de morte e provavelmente se tornará uma epidemia dado aumentos na poluição e no mundo de fumar. Avanços na terapia de células-tronco podem aliviar muitos dos sintomas associados à doença pulmonar e induzem a reparação alveolar em adultos. Concomitante com a busca contínua de células-tronco aplicável ao tratamento humano, a entrega precisa e homing (para o local da doença) deve ser assegurado para a terapia bem sucedida. Aqui, eu relatar que as células-tronco pode seguramente ser instilado através da traquéia abrindo uma rota non-stop para o pulmão. Este método envolve uma incisão na pele, inserção caudal de uma cânula para dentro e ao longo da luz traqueal, ea injeção de uma mistura de veículos com células-tronco em vias aéreas do pulmão. Uma ampla gama de soluções de mídia e estabilizadores pode ser incutido por meio de traqueotomia, resultando na capacidade de oferecer uma ampla gama de tipos de células. Com o epitélio alveolar confinando essas células para o lúmen, expansão pulmonar e pressão negativa durante a inalação também pode ajudar na integração de células-tronco. Entrega traqueal de células-tronco, com uma absorção rápida ea habilidade de lidar com uma grande variedade de tratamentos, poderia acelerar o desenvolvimento de terapias baseadas em células, abrindo novos caminhos para o tratamento de doença pulmonar.
Protocol
Pré-operatório
- Rato destinatário e células do doador
- Plataforma operacional com rosca de fita e sutura
- Seringa 1cc
- Agulha de 23G
- Anestésico: Avertin 25 mg / ml (alternativamente quetamina 9 mg / ml e xilazina 1 mg / ml)
- Máquina de cortar cabelo com lâmina # 40
- Luvas estéreis
- Compressas com álcool
- Iodo
- Esterilizados instrumentos cirúrgicos
- Fio de sutura
- Cateter 22G
- 200 ul pipeta (estéril)
- Ponteiras esterilizadas
- Pomada antibiótica cola
- Sharpie container
Operativo
Técnicas assépticas são utilizados em todo este procedimento.
- Pesar mouse.
- Injeção intraperitoneal de anestésicos (250 mg / kg Avertin ou, alternativamente, ketamina 90 mg / kg e xilazina 10 mg / kg) em doses suficientes para permitir a respiração espontânea, mas fornecem concentração-cirúrgico de anestesia. Para a cirurgia para começar o aperto do dedo do pé foi usada como um indicador de dor profunda sem resposta do animal anestesiado.
- Lay mouse com incisivos dobrada em fio de sutura e cauda de fita para estabilizar.
- Cabelo clip utilizando uma lâmina # 40 clipper.
- Luvas de mudança (continuar com luvas estéreis).
- Desinfectar com álcool duas vezes antes de incisão na pele.
- Esterilizar área com um iodophore.
- Utilizando instrumentos esterilizados fazer uma pequena incisão (<1 cm) paralela à traquéia.
- Cuidadosamente separado do tecido de cartilagem.
- Um empate é inserido debaixo da traquéia.
- Suavemente para cima e levantar tie inserir a agulha em traquéia exposta.
- Remova a agulha e introduza o tubo suavemente, mas rapidamente, até sentir uma ligeira resistência.
- Células pipeta (até 50 microlitros volume) diretamente no cateter.
- Remover imediatamente tubo e gravata enquanto rato libertar aparato operacional.
- Se for necessário segurar delicadamente o rato na vertical (vertical) pelo apego suas patas anteriores e mover-se delicadamente.
- Fechar a ferida com uma sutura ou cola de antibióticos.
Pós-operatório
- Mantenha mouse quente.
- Buprenorfina (0,05 mg / kg) deve ser administrado como analgesia pós-operatória a cada 12 horas durante as primeiras 24 horas após este procedimento.
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
23 G needle | |||
1 cc syringe | |||
22 G catheter | |||
suture thread | |||
antibiotic glue ointment | |||
Anesthetic | Avertin 25 mg/mL. Alternatively ketamine 9 mg/mL and xylazin 1 mg/ml. |