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Neuroscience

कीड़े में एकल Sensillum रिकॉर्डिंग ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर और एनोफ़ेलीज़ gambiae doi: 10.3791/1725 Published: February 17, 2010

Summary

Odorants घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स के electrophysiological प्रतिक्रियाओं एकल sensillum रिकॉर्डिंग का उपयोग कीड़े में मापा जा सकता है. हम इस वीडियो लेख में प्रदर्शन होगा कि कैसे सिरका मक्खी के एंटीना में एक sensillum रिकॉर्डिंग प्रदर्शन करने के लिए (

Abstract

गंध की भावना के कीड़ों के लिए आवश्यक खाद्य पदार्थ, साथी, शिकारियों, और oviposition 3 साइटों को खोजने. कीट घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स (OSNs) संवेदी sensilla नामक बाल, जो घ्राण अंगों की सतह को कवर में संलग्न हैं. प्रत्येक sensillum की सतह छोटे pores के साथ कवर किया जाता है, जिसके माध्यम से odorants पास बुलाया sensillum लसीका तरल पदार्थ है, जो एक दिया sensillum में रखे OSNs का संवेदी dendrites bathes में भंग. OSN dendrites odorant रिसेप्टर प्रोटीन (या) एक्सप्रेस, जो गंध gated आयन चैनल 4, 5 के रूप में कीड़े समारोह में. अन्य रैंकों या तो बढ़ जाती है के साथ odorants की बातचीत या OSN के बेसल फायरिंग दर घट जाती है. कार्रवाई क्षमता के रूप में इस neuronal गतिविधि गुणवत्ता, तीव्रता, और odorant 6, 7 के लौकिक विशेषताओं की पहली प्रतिनिधित्व का प्रतीक हैं.

इन संवेदी बाल करने के लिए आसान पहुँच को देखते हुए, यह संभव है sensillum लिम्फ में एक रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड शुरू, जबकि संदर्भ इलेक्ट्रोड या कीट की आंख और शरीर के लिम्फ में रखा गया है द्वारा एकल OSNs से कोशिकी रिकॉर्डिंग प्रदर्शन है. प्रत्येक OSN ड्रोसोफिला, एक और चार OSNs के बीच sensilla घर, लेकिन आम तौर पर एक विशेषता स्पाइक आयाम प्रदर्शित करता है. स्पाईक छँटाई तकनीक यह व्यक्तिगत OSNs spiking प्रतिक्रियाओं असाइन करने के लिए संभव बनाते हैं. यह एकल sensillum रिकॉर्डिंग तकनीक (SSR) sensillum लसीका और बिजली spikes है कि OSNs 1, 2, 8 पर रिसेप्टर गतिविधि द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं के रूप में संदर्भ इलेक्ट्रोड के बीच क्षमता में अंतर पर नज़र रखता है. Spikes के संख्या में odorant के जवाब में परिवर्तन कीड़ों में कोडन गंध के सेलुलर आधार का प्रतिनिधित्व करते हैं. यहाँ, हम तैयारी वर्तमान में हमारी प्रयोगशाला में प्रयोग किया जाता ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर और एनोफ़ेलीज़ gambiae SSR प्रदर्शन विधि का वर्णन है, और प्रतिनिधि sensillum विशेष तरीके में odorants द्वारा प्रेरित निशान दिखाने.

Protocol

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1. गंध dilutions

  1. अधिकांश odorants आयल के तेल में घुलनशील हैं. हालांकि, DMSO या इथेनॉल भी विशेष रूप से odors के लिए वैकल्पिक सॉल्वैंट्स के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. कांच की शीशियों में शुद्ध odorants से:;: उचित dilutions (ध् ध् मात्रा जैसे 1:10 मात्रा) तैयार करें. अधिकांश गंध dilutions कमरे के तापमान पर स्थिर रहे हैं, लेकिन अत्यधिक अस्थिर यौगिकों के लिए यह बेहतर है एक साप्ताहिक आधार पर काम कर रहे dilutions. प्रत्येक sensillum एक अलग एकाग्रता सीमा के भीतर अलग odors के लिए जवाब है. ड्रोसोफिला, एक उपयोगी देखो के लिए मेज के लिए एक दिया sensillum के साथ प्रयोग उपयुक्त सांद्रता 6, 7 में पाया जा सकता है.

    वीडियो प्रयोग के लिए, हम एक विलायक नियंत्रण और मिथाइल एसीटेट के रूप में पैराफिन तेल का उपयोग करें (10 -6 ध्: पैराफिन तेल में ध्) और 1-octen-3-राजभाषा (10 -7 ध्: पैराफिन तेल में ध्) ड्रोसोफिला और एनोफ़ेलीज़ के लिए रिकॉर्डिंग क्रमशः.
  2. कैंची का प्रयोग, 3 मिमी में क्रोमैटोग्राफी कागज 5 सेमी x स्ट्रिप्स इतनी कटौती है कि वे पाश्चर pipettes अंदर फिट होगा.
  3. पिपेट एक फिल्टर पेपर पट्टी पर वांछित गंध के 30 μL और यह गिलास विंदुक में सम्मिलित करें. कट ~ हवा लाइन टयूबिंग 3 सेमी और विंदुक के खुले अंत में सम्मिलित करते हैं, यह एक संबंधक के साथ बंद. संबंधक विंदुक है कि तब एक हवाई पंप टयूबिंग एयर लाइन से जुड़ी होगी जब यह प्रयोग के दौरान गंध देने के लिए समय है सील करने के लिए प्रयोग किया जाता है.

2. गंध डिलीवरी प्रणाली

  1. एक छोटा सा ड्रिल का प्रयोग, एक 10 एमएल प्लास्टिक सीरम वैज्ञानिक विंदुक (4 एमएल निशान पर जैसे) में कटौती और दो (-1.5 और -0.5 एमएल एमएल के निशान पर जैसे) छेद है कि odors को युक्त pipettes पकड़ के लिए इस्तेमाल किया जाएगा बनाने के. कांटेदार युग्मक में 200 μL विंदुक टिप डालें और 10 एमएल विंदुक कुंद अंत में युग्मक परिचय. विंदुक odorants के लिए वितरण प्रणाली के भाग के रूप में इस्तेमाल किया जाएगा.
  2. एक चुंबकीय स्टैंड पर एक विंदुक दबाना के साथ विंदुक और संलग्न यह माइक्रोस्कोप के पास स्थिति.

3. Sharpening इलेक्ट्रोड

  1. इलेक्ट्रोड पैनापन करने के लिए, एक 0.5 पोटेशियम हीड्राकसीड (KOH) के एम समाधान तैयार है और यह फिल्टर करने के लिए ठीक कणों (उदाहरण के लिए एक 45 सुक्ष्ममापी फिल्टर का उपयोग) को हटा दें. एक 20 एमएल सिरिंज ले लो और एक छोटा सा छेद (~ 2 मिमी व्यास) टिप (~ टिप से 1 सेमी), (चित्रा 1 ए), जो में बिजली के तार डाला जाता है. दीवार करीब पर एक सुई का उपयोग करते हैं
  2. 0.5 एम KOH के साथ सिरिंज भरें, और यह एक स्टैंड पर खुर्दबीन के नीचे इतनी है कि टिप को देखने के क्षेत्र (चित्रा 1 बी, सी) में रखा गया है दबाना. सिरिंज दीवार (चित्रा 1 बी) पर छोटे से छेद में बिजली के तार सम्मिलित करें, यकीन है कि तार सीधे सिरिंज के प्रवेश द्वार के सामने नहीं है. एक डीसी बिजली की आपूर्ति (जैसे जंगली MTR32 Heerbrugg, तरीकों को देख) या एक एसी बिजली की आपूर्ति (जैसे वन्य Heerbrugg 990018 - एलईपी) के एक पोल के कैथोड इस तार कनेक्ट. माइक्रोस्कोप के सही पक्ष पर मैनुअल micromanipulator पर इलेक्ट्रोड धारक शाफ्ट संलग्न, और एक मगरमच्छ क्लिप के साथ इलेक्ट्रोड धारक शाफ्ट के आधार पर एक बिजली के केबल देते हैं. डीसी बिजली की आपूर्ति या एसी बिजली की आपूर्ति (चित्रा 1 ए) के दूसरे ध्रुव के anode करने के लिए केबल कनेक्ट.
  3. इलेक्ट्रोड धारक में टंगस्टन तार (~ 5 सेमी लंबाई) सम्मिलित करें, और जोड़तोड़ पर इलेक्ट्रोड धारक शाफ्ट को देते हैं. 6 वी बिजली की आपूर्ति सेट, और तार की नोक सिरिंज के लिए बार - बार यह सान में सम्मिलित करते हैं, तो प्रक्रिया (चित्रा 1C) के दौरान माइक्रोस्कोप के अंतर्गत टिप की निगरानी सावधान किया जा रहा है. रिकॉर्डिंग के लिए एक आदर्श इलेक्ट्रोड प्राप्त करने के लिए, समाधान में अपनी लंबाई के 90% अप करने के लिए 1 मिनट के लिए जगह है, और धीरे धीरे इसे बाहर खींच. तभी सम्मिलित ~ 30 s के लिए इलेक्ट्रोड का 50% आगे पतली और इसे दोहराने के लिए तीव्रता (~ 10 बार) तार की नोक.

    इलेक्ट्रोड की नोक काफी ठीक sensillum में प्रवेश हो सकता है, चाहिए, लेकिन ठीक ऐसा नहीं के रूप में मोड़ करने के लिए जब यह रिकॉर्डिंग (कदम 6 और 7) के दौरान छूता है. हालांकि विदारक खुर्दबीन के नीचे इलेक्ट्रोड टिप देख जबकि यह तेज किया जा रहा है, उसकी मोटाई का एक अच्छा संकेत है, केवल उच्च बढ़ाई रिकॉर्डिंग खुर्दबीन के तहत इसे देख कि किसी दिए गए इलेक्ट्रोड रिकॉर्डिंग के लिए उपयुक्त है एक स्पष्ट विचार दे देंगे.

4. कीट प्रस्तुत करने: ड्रोसोफिला ऐन्टेना

  1. एक मक्खी Aspirator बनाएँ. लंबे समय के आराम से अपनी गर्दन के चारों ओर लटका (के बारे में - 120 से.मी. 90) के लिए पर्याप्त हवा लाइन टयूबिंग की एक टुकड़ा कट. एक 200 μL विंदुक टिप टिप कट और ट्यूब के एक सिरे में सम्मिलित. दूसरे छोर की स्थिति पर एक ~ 1.5 सेमी x जाल के 1.5 सेमी टुकड़ा इतना है कि यह एक शारीरिक बाधा पैदा करता है, लेकिन ट्यूब के बाहर से बहने से रोकने हवा नहीं करता है. एक 1 एमएल विंदुक और ट्यूब खोलने के शीर्ष पर व्यापक अंत की स्थिति के टिप टिप कट, बीच में जाल अवरुद्ध. इस भाग लेने के लिए और वयस्क सिरका मक्खियों (चित्रा 2) में हेरफेर करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा.
  2. एक खुर्दबीन स्लाइड ले लो और दंत लंबे पक्ष के बीच में मोटे तौर पर मोम का एक टुकड़ा जगह. यह पदों के शीर्ष परगिलास को कवर ना थोड़ा ऊपर की ओर झुका हुआ (30 ~), सुनिश्चित करने कि मोम ऊपरवाला हिस्सा है, जो माइक्रोस्कोप के अंतर्गत सिरका मक्खी के दृश्य को रोकने के नीचे सीधे नहीं है. ऊर्ध्वाधर खींचने के साथ एक गिलास इलेक्ट्रोड खींचो. इसकी टिप पतली और काफी लचीला दूसरे और तीसरे antennal खंड के बीच में फिट होना चाहिए, और रिकॉर्डिंग के लिए एंटीना स्थिर रखना. मोम का एक टुकड़ा पर कांच इलेक्ट्रोड स्थिति और इसे कवर कांच की तरफ जगह है, अभी तक पर्याप्त है कि जब टिप कम है यह कवर ग्लास (चित्रा 3A) के कोने तक पहुँच.
  3. वांछित जीनोटाइप के वयस्क मक्खियों की बोतल या शीशी से कार्य करना, एक वयस्क सिरका का उपयोग कर उड़ उड़ Aspirator उठाओ. हालांकि महिलाओं को आमतौर पर उनके बड़े आकार की वजह से उपयोग किया जाता है, पुरुषों को भी इस्तेमाल किया जा सकता है. भागने से मक्खी से बचने के 1 एमएल टिप के शीर्ष पर 200 μL विंदुक टिप प्लेस. ट्यूब में बजाओ, ताकि मक्खी 200 μL विंदुक टिप के अंत की ओर धकेल दिया है. धार के साथ विंदुक कुछ मिलीमीटर ही उड़ से दूर टिप के व्यापक अंत छाँटो, तो कुछ मोम डालने के लिए बाहर समर्थन से उड़ान भरने को रोकने. एक खुर्दबीन के तहत, सिरका मक्खी के सिर के पास फिर से कटौती, ध्यान दे जानवर नुकसान नहीं. एक छोटे विंदुक टिप के साथ, मोम पुश करने के लिए बाहर उड़ सिर बल इतना है कि आँखों के बारे में आधा टिप (चित्रा 3B) से बाहर निकालना. सुनिश्चित करें कि उसके पैरों के रूप में अच्छी तरह से नहीं आते हैं, या वे चाल और रिकॉर्डिंग के साथ हस्तक्षेप कर सकता है.
  4. माउंट मोम का एक टुकड़ा पर मक्खी, अपने सिर के ऊपर का सामना करना पड़ रहा है, और कवर कांच के सामने स्लाइड पर यह जगह. सिर थोड़ा कांच के कोने के खिलाफ पुश ताकि एंटीना का विस्तार और कांच पर आराम. दूसरे और तीसरे antennal खंड (चित्रा 3B) के बीच में केशिका कांच की नोक लोअर.
  5. एंटीना के विभिन्न भागों का उपयोग विभिन्न sensilla प्रकार के लिए दे देंगे. विशेष रूप से प्रयोगात्मक जरूरतों पर निर्भर करता है, एंटीना के लिए उन्मुख अलग होने की जरूरत करने के लिए विभिन्न sensilla प्रकार के उपयोग की अनुमति होगी. हमारे उदाहरण के रूप में बड़े basiconic sensilla से रिकॉर्ड करने के लिए, Arista गिलास (चित्रा 3B) पर नीचे धकेल दिया है.

5. कीट प्रस्तुत करने: एनोफ़ेलीज़ दाढ़ की हड्डी का palps

  1. एक बिजली Aspirator (चित्रा 2 ई) का उपयोग करना, छोटे प्लास्टिक के पिंजरे (चित्र 2 एफ) में 40 से 60 3-5 दिन पुराने मच्छरों (मिश्रित पुरुषों और महिलाओं) इकट्ठा. मच्छरों सामान्य परिस्थितियों के तहत किया गया है पाला चाहिए, यानी 25-28 में एक कीट इनक्यूबेटर या insectary में डिग्री सेल्सियस 70-80% नमी के साथ. ~ 15 मिनट के लिए बर्फ पर छोटे जानवरों के साथ प्लास्टिक पिंजरे रखें जब तक वे ठंड के द्वारा anesthetized हैं. एक बार जानवरों चलती बंद कर दिया है, खुर्दबीन के नीचे मंच पर 4-6 केवल जानवरों किसी भी एक समय पर स्थानान्तरण, बर्फ पर प्रक्रियाओं के दौरान पशुओं के बाकी रखने. हालांकि महिलाओं को आमतौर पर सीओ 2 के लिए उनकी संवेदनशीलता की वजह से उपयोग किया जाता है, पुरुषों को भी नियोजित किया जा सकता है. महिला या पुरुष मच्छरों का चयन करें, अपने एंटीना की संरचना (पंख की तरह फिलामेंट की तरह पुरुषों में महिलाओं में) से पहचानने और ठीक संदंश के साथ उनके पंख और पैरों को हटाने के लिए उन्हें स्थिर. तल पर एक गीला कागज के साथ एक छोटे से प्लास्टिक के कप में उन्हें रखें desiccating से उन्हें रोकने.
  2. डबल पक्षीय टेप के दो टुकड़े (~ लंबाई में 1 सेमी) एक दूसरे (~ 1 सेमी के अलावा) करने के लिए समानांतर केंद्र में और स्लाइड कांच के पक्ष में (चित्रा 3C) रखो. ठीक संदंश का प्रयोग, केंद्रीय टेप पर विदारक खुर्दबीन के नीचे एक मच्छर, जगह और यह बग़ल में बारी और टेप पर अपने शरीर और एक आंख छड़ी. दाढ़ की हड्डी का palps ताकि दोनों palps टेप (चित्रा 3 डी) पर समानांतर विस्तार की स्थिति को समायोजित करें. दोनों आधार पर और palps (चित्रा 3 डी) के नोक पर पतली तार (जैसे मानव बाल) रखकर दाढ़ की हड्डी का palps फिक्स. पक्ष टेप पतली तार के लिए एक रिपोजिटरी के रूप में प्रयोग किया जाता है, जबकि केंद्रीय टेप करने के लिए हर रिकॉर्डिंग (चित्रा 3C) के बाद जगह की जरूरत है.

6. रिकॉर्डिंग ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर

  1. (FOV) दृश्य (चित्रा 4B) के क्षेत्र के बीच में मोटे तौर पर कम बढ़ाई और एंटीना की स्थिति पर खुर्दबीन (चित्रा -4 ए) के तहत स्लाइड रखें. धीरे इलेक्ट्रोड पर कम इतना है कि संदर्भ इलेक्ट्रोड मक्खी और रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड एंटीना के पास है (चित्रा 4C) की आंख के पास स्थित है. बढ़ाई और FOV (चित्रा 4D) के बीच में फिर से स्थिति ऐन्टेना बढ़ाएँ.
  2. गंध प्रसव डिवाइस मक्खी के सिर के करीब प्लेस, एंटीना तरफ इशारा करते हुए.
  3. कम बढ़ाई (चित्रा 4C) में मक्खी की आंख में संदर्भ इलेक्ट्रोड डालने. इसकी सतह को छूने के बिना कम एंटीना के शीर्ष पर रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड.
  4. उच्च आवर्धन करने के लिए स्विचन, micromanipulator के साथ रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड नियंत्रण और चयनित sensillum (चित्रा 4D) में सम्मिलित. Sensillum लंबाई के साथ किसी भी बिंदु रिकॉर्डिंग के लिए अच्छा है. Sensillum अंदर एक बार, इलेक्ट्रोड में हो आगे धक्का दिया जा सकता है (कभी कभी के माध्यम से सभी तरह)एक बेहतर शोर अनुपात करने के लिए संकेत प्राप्त करने के लिए. एक बार इलेक्ट्रोड sensillum में है, कक्षों की सहज गतिविधि का पता लगाया जा सकता है.

7. रिकॉर्डिंग एनोफ़ेलीज़ gambiae

  1. खुर्दबीन के नीचे कम (10x) बढ़ाई और दाढ़ की हड्डी का FOV और शीर्ष पर सिर के बीच में मोटे तौर पर palps स्थिति पर गिलास स्लाइड प्लेस (चित्रा 4E). मंच घुमाएँ जब तक एक palps की रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड के साथ एक सही कोण पर है.
  2. इलेक्ट्रोड की ऊंचाई समायोजित इतना है कि संदर्भ इलेक्ट्रोड सिर्फ मच्छर और रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड दाढ़ की हड्डी का palps के पास की आंख के ऊपर तैनात है.
  3. गंध प्रसव डिवाइस प्लेस इतना है कि यह रूप में करीब है के रूप में palps करने के लिए संभव है.
  4. आंख में कम बढ़ाई (10x) में संदर्भ इलेक्ट्रोड, सम्मिलित करें और उच्च आवर्धन (100x) करने के लिए स्विचन, खूंटी sensillum में मूंछ (चित्रा 4F) पर रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड डालने. एक बार इलेक्ट्रोड sensillum में है, कक्षों की सहज गतिविधि का पता लगाया जा सकता है.

8. प्रतिनिधि परिणाम

Sensillum और रिकॉर्डिंग की गुणवत्ता पर निर्भर करता है, एक एक एकल का पता लगाने के भीतर घ्राण न्यूरॉन्स के विभिन्न संख्या भेद कर सकते हैं. ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर के बड़े basiconic sensilla में, उदाहरण के लिए, के बीच 2 और 4 कोशिकाओं है कि कील आयाम में अलग रिकॉर्डिंग 9, 10 के दौरान प्रकट होने चाहिए .

हमारे वीडियो प्रयोग में, ड्रोसोफिला ab2 sensillum दो कक्षों, एक (चित्रा 5, नीला spikes के) सेल और बी सेल (चित्रा 5, हरी spikes के). दिखाता है पैराफिन तेल (चित्रा 5A) के आवेदन के दौरान न तो कक्ष सक्रिय होता है, जबकि केवल एक सेल मिथाइल एसीटेट के 10 -6 कमजोर पड़ने (चित्रा 5 ब) का जवाब .

एनोफ़ेलीज़ gambiae की दाढ़ की हड्डी का मूंछ में, grooved खूंटी sensillum तीन कोशिकाओं शामिल है, लेकिन केवल दो आसानी से भेदभाव कर रहे हैं (चित्रा 5C, नीले और हरे रंग के spikes, क्रमशः) . हम वीडियो प्रयोग में बताते हैं कैसे बी सेल 10 1 - octen 3 - राजभाषा (चित्रा 5D) के -7 कमजोर पड़ने का जवाब है.

चित्रा 1
चित्रा 1. इलेक्ट्रोड चोखा
(ए) इलेक्ट्रोड चोखा तंत्र के सामान्य दृश्य है. (बी) सिरिंज 0.5 एम (बाएं) KOH इलेक्ट्रोड (सही) पैनापन करने के लिए इस्तेमाल किया. सिरिंज के उद्घाटन के लिए अगले इलेक्ट्रोड टिप के (सी) बंद करें अप युक्त.

चित्रा 2
चित्रा 2. कैसे तैयार करने के लिए एक मक्खी Aspirator और मच्छर Aspirator
(ए) सामग्री शुरू:. हवा लाइन प्लास्टिक टयूबिंग, दो में कटौती विंदुक युक्तियाँ, और मेष (बी) मक्खी एक बार यह पूरा हो गया है Aspirator (सी) अंत है कि सिरका मक्खियों को पकड़ने के लिए प्रयोग किया जाता है का विस्तार ( डी) का विस्तार मक्खी Aspirator के दूसरे छोर (ई) मच्छर संग्रह के लिए बिजली Aspirator एक मुख्य शरीर और एक detachable प्लास्टिक पिंजरे (एफ) मच्छरों के लिए detachable प्लास्टिक पिंजरे होते हैं..

चित्रा 3
चित्रा 3. रिकॉर्डिंग के लिए एक सिरका (ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर) मक्खी और मलेरिया मच्छर (एनोफ़ेलीज़ gambiae) की तैयारी
(ए) एक सिरका के चित्र स्लाइड पर खुर्दबीन के नीचे यह स्थिति पहले घुड़सवार मक्खी. (बी) सिरका उड़ सिर के केशिका गिलास द्वारा जगह में रखा एंटीना के साथ बंद (सी) एक मच्छर के चित्र पर घुड़सवार सूंड और palps टेप पर चिपका के साथ मच्छर सिर के. स्लाइड (डी) ऊपर बंद .

चित्रा 4
चित्रा 4. सिरका (ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर) मक्खी और मलेरिया मच्छर (एनोफ़ेलीज़ gambiae) से रिकॉर्डिंग
(ए) इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी सेटअप के (बी) मक्खी तैयारी की समाप्ति खुर्दबीन पर मुहिम शुरू की.. रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड (बाएं), गंध वितरण प्रणाली (मध्य विंदुक), और रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड (दाएं) की संबंधित स्थिति पर ध्यान दें. (सी) 10x उद्देश्य के तहत उड़ान भरने की छवि. मक्खी एंटीना की छवि (डी) के तहत 100x उद्देश्य; बड़ी basiconic (तीर) sensilla, गैर - संवेदी बाल (arrowheads) के बीच interspersed (ई) एक रिकॉर्डिंग के लिए मुहिम शुरू की मच्छर के 10x दृश्य (एफ) मच्छर मूंछ और एक खूंटी sensillum (तीर) का उच्च बढ़ाई दृश्य. .

चित्रा 5
चित्रा 5. ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर से रिकॉर्डिंग के उदाहरण औरएनोफ़ेलीज़ gambiae
(ए) ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर के ab2 sensillum दो संवेदी न्यूरॉन्स घरों, (नीले spikes के) सेल और बी सेल (हरी spikes के) (बी) 10 -6 मिथाइल एसीटेट के आवेदन के दौरान ए और बी कोशिकाओं (सी) . (नीला spikes के) सेल और बी सेल (हरी spikes के) (डी) 10 1 खूंटी sensillum octen-3 - राजभाषा -7 के अनुप्रयोग, एनोफ़ेलीज़ gambiae की खूंटी sensillum दो संवेदी न्यूरॉन्स घरों.

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Discussion

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घ्राण cues जीवों द्वारा उपयोग किया जाता है खाद्य स्रोतों, संभावित साथियों, और शिकारियों की पहचान कर रहे हैं. घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स (OSNs) बाह्य stimuli और मस्तिष्क जहां जानकारी संसाधित है आगे की उच्चतर केन्द्रों के बीच पहली रिले केंद्र हैं. ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर और एनोफ़ेलीज़ gambiae में, OSNs आसानी से सुलभ हैं और उनके विद्युत गतिविधि जबकि गंध कश द्वारा प्रेरित नजर रखी जा सकता है .

एकल sensillum रिकॉर्डिंग तकनीक (SSR) इस वीडियो में बताया गया है व्यापक रूप से OSNs से रिकॉर्ड और odorants 6, 7 की एक बड़ी संख्या के लिए उनकी बिजली प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. सूंघनेवाला रिसेप्टर्स (ओआरएस) 6, 11 और अन्य रैंकों के ड्रोसोफिला ऐन्टेना 9, 12, 13 पर विशिष्ट स्थानों के लिए मानचित्रण के deorphanization SSR तकनीक बना दिया है पहले के रूप में vivo में विशिष्ट अन्य रैंकों के electrophysiological गुणों का विश्लेषण करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण, कदम समझने के लिए कैसे बाहरी दुनिया घ्राण अपनी OSNs के माध्यम से विद्युत संकेतों में अनुवादित है और अंततः जानवर द्वारा कथित.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Paraffin oil Odors Fluka 76235
High purity odors (>98%) Odors Sigma-Aldrich Methyl acetate
#296996
1-octen-3-ol
#74950
Filter paper strips Odors Fisher Scientific 05-714-1 Chromatography paper
Connectors Odors Cole-Parmer EW-06365-40 1/16x1/8"
Glass vials Odors Agilent Technologies 5182-0556
Air line plastic tubing Odor Delivery Python Products 500PAL
1 serological pipette Odor Delivery Corning 4101 10 mL
Plastic tubing Odor Delivery Cole-Parmer EW-06418-0 0.050"x0.090"OD
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes Odor Delivery Fisher Scientific 13-678-20A 5-3/4 inches
Programmable stimulus controller Odor Delivery Syntech CS-55
Anti-vibration table Electrophysiology Equipment TMC 63533 36”Wx30”Dx29”H
Faraday cage Electrophysiology Equipment TMC MI8133303
Inverted microscope Electrophysiology Equipment Nikon Instruments E600FN ECLIPSE Recording microscope
10x and 100x objectives Electrophysiology Equipment Nikon Instruments 10x Plan Fluor 100x L Plan
Dissecting microscope Electrophysiology Equipment Nikon Instruments EZ645 electrode sharpening/insect prep microscope
Magnetic stands Electrophysiology Equipment Newport Corp. MODEL 150
IDAC Electrophysiology Equipment Syntech IDAC-4
Acquisition software Electrophysiology Equipment Syntech Autospike
1 macromanipulator Electrophysiology Equipment Narishige International MN-151 Joystick manipulator
Used for positioning reference electrode
1 micromanipulator Electrophysiology Equipment EXFO PCS-6000 Used for positioning recording electrode
Crocodile clip Electrophysiology Equipment Pomona AL-B-12-0
Electric cable Electrophysiology Equipment Pomona B-36-0 Test Cable Assembly
2 electrode holders Electrophysiology Equipment Syntech N/A Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode
AC probe Electrophysiology Equipment Syntech N/A Universal single ended probe (10xAC)
Tungsten electrodes Electrophysiology Equipment Microprobes M210 straight tungsten rods, 0.005x3
Potassium hydroxide Electrophysiology Equipment Sigma-Aldrich 221473
Syringe Electrophysiology Equipment BD Biosciences 301625 20 mL
Power supply Electrophysiology Equipment Wild Heerbrugg e.g MTR32
Vertical puller Insect prep Narishige International PB-7
Razor blade Insect prep VWR international 55411-050
Dental wax Insect prep Patterson 091-1503
Microscope slide Insect prep Fisher Scientific 12-550A
Cover glass Insect prep Fisher Scientific 12-541A 18X18 #1.5
Polypropylene mesh Insect prep Small Parts, Inc. CMP-0500-B
Glass electrode Insect prep Frederick Haer and Co. 27-32-0-075 Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm
Double-sided tape (3M) Insect prep 3M MMM6652P3436 Double-sided tape (3M)
Forceps Insect prep Fine Science Tools 021x0053 Dumont #5 Mirror Finish Forceps
Small plastic cup Insect prep VWR international 89009-662 7 x 5.7 (23/4 x 21/4)
Electric aspirator Insect prep Gempler’s RHM200

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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कीड़े में एकल Sensillum रिकॉर्डिंग<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em> और<em> एनोफ़ेलीज़ gambiae</em
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Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae. J. Vis. Exp. (36), e1725, doi:10.3791/1725 (2010).More

Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae. J. Vis. Exp. (36), e1725, doi:10.3791/1725 (2010).

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