Summary
Телеметрическая ЭКГ стала важным инструментом в оценке животных моделей для сердечной аритмии и внезапной сердечной смерти. Здесь мы представляем ступенчато руководство к телеметрической записи ЭКГ для применения в долгосрочной суточного мониторирования ЭКГ у мышей.
Abstract
Телеметрическая ЭКГ у мышей имеет важное значение для понимания механизмов, стоящих за аритмии, нарушения проводимости, и внезапной сердечной смерти. Хотя ЭКГ используется для кратковременного измерения сигнала промежутки времени, это не практично для долгосрочного исследования вариабельности сердечного ритма или захвата редких эпизодов аритмии. Имплантируемые telemeters ЭКГ предлагаем преимущества простой хирургической имплантации, долгосрочные запись в амбулаторной электрограмм мышей и масштабируемость с одновременной записи нескольких животных. Здесь мы представляем шаг за шагом руководство по имплантации telemeters для амбулаторного ЭКГ у мышей. Тщательное соблюдение правил асептики необходимо для выживания благоприятных результатов с возможностью имплантации и записи с нескольких недель до нескольких месяцев. Таким образом, имплантируемый телеметрический ЭКГ является ценным инструментом для обнаружения критической информации о сердечной электрофизиологии в амбулаторных животных моделях, таких как мыши.
Protocol
1. Подготовка Telemeter для хирургической имплантации
- Перед установкой ЭКГ телеметрических в мышь, важно, чтобы убедиться, что ЭКГ телеметрических стерильна и в хорошем рабочем состоянии. Новые устройства телеметрии, как правило, представлены в стерильных условиях завода-изготовителя. ЭКГ telemeters может быть повторно при условии устройства чистить Tergazyme 1% раствор, по крайней мере 4 часа. Вы можете промыть телеметрических стерильной водой после очистки с Tergazyme. Кроме того, использование Wavicide-01 дезинфицирующим ночь, чтобы стерилизовать ЭКГ телеметрических. Обязательно мыть дезинфицирующими от стерильной водой за 48 часов до имплантации мышам. Хранить в стерильный контейнер.
- Проверьте телеметрических приводит к целостности обоих проведения провода и изоляционные оболочки. Включите передатчик телеметрии использованием магнитов махнул в пределах 5 см от телеметрических и тестировать сигнал с радио AM, 530 частот. Сигнал должен быть сильным и ясным и должны меняться по интенсивности и шаг основан на манипуляции проводов. Запишите номер модели, серийный номер, телеметрическая, а значение ЭКГ калибровки. Производители часто рекомендуют телеметрических должна быть на 24 часа до имплантации, см. руководство по эксплуатации для вашей конкретной телеметрическая для деталей. В этом примере мы будем использовать International Data наук (DSI) телеметрическая для имплантации.
- Telemeter привести препарат может быть достигнуто за счет сокращения отрицательного (белый) приводят к примерно 3,5 см, а положительный (красный) приводят к 2,5 см. Это оптимальная длина для имплантации отрицательный провод в правой груди, а положительный вывод в левой части живота (см. рисунок 2). Затем удалите изоляционной оболочкой подвергать 7 мм из проволоки. Краска конце металлического свинца стерильным суперклей, такие, как ветеринар-Bond, а затем приложите привести колпачками для металла советы. Эти шапки позволит избежать эрозии кожи за счет привести помещение. Примерно 2-3 мм металлическая проволока должна подвергаться воздействию электрического зондирования родной сердечного ритма.
2. Хирургическая имплантация Telemeter
- Для того чтобы использовать метод стерильных в мышиных хирургии, вам необходимо стерильные перчатки, стерильные драпировка, и 6-0 швов Prolene. Вам также необходимо, чтобы 2 пары стерилизованные щипцы, 1 пара тупыми концами ножниц, скальпеля и иглы водителя. Хирургические инструменты можно стерилизовать в стерилизаторе стеклянных бус нагревается до 250 градусов по Цельсию. Будьте уверены, чтобы стерилизовать и мыть телеметрических как было описано ранее перед использованием.
- Подготовка к операции мыши сначала обезболивающий мыши в окне индукции, используя 3% изофлуран в 0,5 л / мин 100% О2. Используйте грелку, таких как Т-насос, который циркулирует теплая вода, для поддержания температуры наркозом мыши. Температура может находиться под наблюдением ректального датчика, если это необходимо. При наведении курсора мыши адекватно отключке, полностью побрить живот и грудь мышь с электрической машинкой. Re-обезболить мышь с изофлуран перед передачей мыши постоянного потока трубки, спине, с головой, отворачивается и хвост к вам. Лента вниз лапы мыши к нагретой операционном столе. Протрите живота с тампоном, смоченным спиртом, чтобы удалить волосы и бритый очистить операционное поле. Применение трех отдельных слоев бетадин с мазки для дезинфекции живота и грудной клетки. Проверьте правильность уровень анестезии, применяя давление на ногтевого ложа мыши. После мыши был подготовлен к операции, использовать стерильные перчатки и применять стерильную драпировка на операционное поле.
- Внутрибрюшинной имплантации телеметрических предлагает преимущество упражнений экспериментов физиологии. Для внутрибрюшинного вставка, начинаем операцию с помощью скальпеля создать вертикальный разрез в средней линии кожного покрова живота примерно 2,5 см в длину. Аккуратно отделите кожу от подлежащей соединительной тканей с использованием тупыми концами ножниц. Затем создайте вертикальной средней линии разрез в белой линии вышележащих брюшины, примерно 1,5 см в длину. Кроме того, создать маленькое отверстие в брюшине чуть выше (краниально) в брюшной разрез, который будет служить выходом для подкожных ведет. При выполнении операции, держать влажную хирургических сайт время от времени капала стерильного физиологического раствора на рабочее поле.
- Вставьте телеметрических в правый брюшной полости. Вставьте щипцов в отверстие выше телеметрических и тянуть как ведет вверх через отверстия привести, таким образом они выступают из брюшины. Использование непрерывного 6-0 Prolene швы, чтобы закрыть 1,5 см перитонеального вертикальный разрез средней линии.
3. Ведущий имплантации и брюшной Закрытие
- ЭКГ приводит размещены в главной конфигурации II. Свинца с белый / прозрачный колпачок имеет отрицательное значение, и находится в левой верхней части живота. Во-первых, создать 0,5 см кожного разреза в верхней правой груди мыши.Затем с помощью тупых ножниц для создания туннеля обратно в брюшной разрез. Вытяните ведут через туннель и использовать 6-0 Prolene шва на якорь привести к грудной мышце. Убедитесь, что шов на верхней открытой части свинца, и создает хороший контакт между свинцом и основные мышцы. Использование второго шва проксимальнее вышеупомянутых один, для иммобилизации привести к мышце. Закрыть разрез кожи использованием 6-0 Prolene шва.
- Положительный вывод (красный оболочка) помещается в левой части живота ниже левой диафрагмы и ниже сердца. Привести крепится к основной перитонеального ткани 6-0 Prolene шва и должен иметь хороший контакт с брюшной ткани. Дополнительный разрез не нужно на этом этапе, потому что участок свинца имплантации близка к вертикальной средней линии разрез, таким образом, могут быть легко доступны с существующими операционного поля. Обратите внимание, что перитонеальный ткани должны быть сняты, чтобы избежать перфорации основного кишечника.
- Закрыть брюшной фасции и кожу последовательно 6-0 Prolene в слоях.
4. Послеоперационный уход
- Дайте мыши 0,1 мл [1 мг / мл] бупренорфин для обезболивания сразу же после операции. Разрешить мыши, чтобы оправиться от операции на нагревают площадку. Если мышь была длительная операция> 30 мин, или, если мышь появляется сухой, вы можете вводить 0,2-0,3 мл стерильного физиологического раствора в брюшной полости для регидратации. Для сохранения послеоперационного обезболивания это стандартная практика предоставления мышей с бупренорфин два раза в день в течение трех дней, а затем по мере необходимости каждые восемь часов.
- Очистите бетадин с спиртом, чтобы избежать послеоперационных раздражение. Не забудьте записать послеоперационные вес для последующего определения послеоперационной здоровья.
- 8-24 часов после операции, дайте мыши дополнительного обезболивания с бупренорфином, когда это необходимо, так как это уменьшит боль и уменьшить привести отказ от размещения мыши царапать на послеоперационные сайта.
5. Представитель Результаты
При правильном выполнении мыши должны иметь закрытые брюшной разрез с подкожной ведет под кожей. Как правило, мышь занимает 10-30 минут, чтобы оправиться от наркоза. Она занимает около 7-10 дней до мышей полностью оправился от операции, о чем свидетельствует восстановление послеоперационных потере веса и нормализации мобильности.
Наиболее частым осложнением после операции является эрозия конечностей ведет через кожу в течение первых 10 дней после операции. Это частое осложнение можно избежать, твердо придерживаясь подкожной приводит к подкожных тканей или брюшины. Эта методика позволяет избежать провисания провода, которые создают давление и трение на кожу, когда мышь ambulates. Хотя и не столь распространены, инфекции и сепсиса могут возникнуть из-за ошибок в стерильных или из неполной очистки использованной telemeters.
ЭКГ выход может быть записан приемник матрица в сочетании с ПО для сбора данных, таких как Data Sciences International (DSI). Сигнал результаты должны включать в себя четко определенные P волны, обозначая предсердной деполяризации, а также волны QRS что означает желудочковой деполяризации, как показано на рисунке 3. Хорошее качество ЭКГ должны иметь четко определенные P волны предыдущего четко определены QRS волны в соотношении 1:1. Там должна быть низкой фонового сигнала и RR интервалы должны быть регулярными в мышей дикого типа. Низкое качество ЭКГ может быть нечетким Р или комплекса QRS волн, или фонового сигнала, который может сделать последующего компьютерного анализа трудно. Бедных ЭКГ может быть установлен повторно имплантации телеметрических приводит, как правило, по одной за раз. Для повторного имплантата телеметрических свинец, место мыши под анестезией, и используя хирургическую технику, сделать разрез в коже непосредственно вышележащих ведущую роль в вопросе. Когда приводят доступ, разрезать шов крепления свинец, и двигаться привести в нужное место, прежде чем якорь привести снова. Наконец, рядом хирургических сайт с 6-0 Prolene.
Рисунок 1: пример небольшой телеметрических животных с положительными и отрицательными ведет. В общем, красный свинец положительный вывод, и свинцовых белил является отрицательный провод. Каждый привести должны иметь изоляционные оболочки, 5-7 мм оголенный провод и пластиковые ограничен наконечник, который предотвращает эрозию ведут через кожу.
Рисунок 2: мультфильм показывает правильный телеметрических имплантации сайтов на мышь. Белый (отрицательный) приводят имплантируется в правой верхней части грудной клетки мыши, и красный (положительный) приводят находится в левой части живота, такое, что телеметрическая чувств "провести два" конфигурации.
Рисунок 3: Представитель сигнала от мыши в нормального синусового ритма. P волна представляет предсердной деполяризации и QRS комплекс представляет желудочковой деполяризации. Высокое качество сигнала должно иметь четкую зубца Р перед каждым комплексом QRS в соотношении 1:1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Важных шагов этой процедуры надлежащей очистки и подготовки мыши до выживание хирургии. Когда телеметрических и сайт мышь оперативная должным образом очищены, есть намного лучше послеоперационные результаты. Кроме того, пристальное внимание к размещению привести снижает послеоперационные кожи эрозии. Возможные модификации метода относятся альтернативные конфигурации для оценки боковой стенки ЛЖ функции (свинец Я конфигурации), или использование телеметрических не только для анализа ЭКГ, но и для температуры и даже анализ крови давление [выходит за рамки настоящей статьи] . Альтернативное место для записи телеметрических ЭКГ подкожной привести размещение с внешними проводами, то есть не-имплантированных телеметрических. Это подходит для записи ЭКГ новорожденных, но не практично для амбулаторного телеметрия ЭКГ.
Telemeter имплантация является мощным инструментом для суточного мониторирования ЭКГ, и была использована для оценки возникновения желудочковой тахикардии, внезапной сердечной смерти, А. В. узловой блок, и фибрилляции предсердий. 1,2,3 Кроме того, применение анализа телеметрии дали ценные данные относительно контроля частоты сердечных сокращений и вариабельности сердечного ритма. 4,5 Последние достижения в области ЭКГ телеметрические технологии включили чувствительные измерения температуры тела и кровяного давления. 6 Таким образом, телеметрическая имплантации ценный метод для опробования физиологические изменения у мышей и других животных моделях заболевания.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Марк Макколи поддерживается NIH наставником обучения грант 5T32HL066991-07
Ксандер Wehrens поддерживается NIH / NHLBI гранты 1R01HL091947-01A209 и 3R01HL089598-03S109
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Steri 250 Bead Sterilizer | Inotech | IS-250 | |
| Blunt-Ended Scissors | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5980 | |
| Blunt-Ended Forceps (x2) | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5138 | |
| Veterinary Anesthesia Vaporizer | Surgivet | Isotec 4 | |
| T/Pump | Gaymar Industries | P/N11184-000 | |
| Propylene Blue Monofilament Suture | Ethicon Inc. | 8718 | |
| Povodone Iodine, 10% | Equate | N/A | |
| Alcohol Swabs | PDI | B339 | |
| Tergazyme | Alconox, Inc. | 21837-118 | |
| Wavidicde-01 | Medical Chemical Corporation | Wavicide-01 | |
| ECG Telemeter | DataSciences International | EA-F20 |
References
- Cerrone, M. Bidirectional ventricular tachycardia and fibrillation elicited in a knock-in mouse model carrier of a mutation in the cardiac ryanodine receptor. Circ Res. 96 (10), e77-e77 (2005).
- Chelu, M. G. Calmodulin kinase II-mediated sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak promotes atrial fibrillation in mice. J Clin Invest. 119 (7), 1940-1940 (1940).
- Sood, S. Intracellular calcium leak due to FKBP12.6 deficiency in mice facilitates the inducibility of atrial fibrillation. Heart Rhythm. 5 (7), 1047-1047 (2008).
- Swoap, S. J., Gutilla, M. J. Cardiovascular changes during daily torpor in the laboratory mouse. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 297 (3), R769-R769 (2009).
- Costa-Goncalves, da, C, A. Role of the multidomain protein spinophilin in blood pressure and cardiac function regulation. Hypertension. 52 (4), 702-702 (2008).
- Wehrens, X. H., Kirchhoff, S., Doevendans, P. A. Mouse electrocardiography: an interval of thirty years. Cardiovasc Res. 45 (1), 231-231 (2000).
