Summary
وقد برزت القياس عن بعد ECG بوصفه أداة أساسية في تقييم النماذج الحيوانية لعدم انتظام ضربات القلب والموت المفاجئ بسبب أمراض القلب. هنا ، فإننا نقدم دليلا متدرج للتسجيلات ECG القياس عن بعد للتطبيق في المدى الطويل مراقبة تخطيط القلب المتنقلة في الفئران.
Abstract
القياس عن بعد تسجيل تخطيط القلب في الفئران أمر ضروري لفهم الآليات الكامنة وراء عدم انتظام ضربات القلب ، واضطرابات التوصيل ، والموت القلبي المفاجئ. على الرغم من الاستفادة من السطح لتخطيط القلب على المدى القصير قياسات فترات الموجي ، أنه ليس من العملي لدراسات طويلة الأجل لتقلب معدل ضربات القلب أو أسر من الحلقات النادرة من عدم انتظام ضربات القلب. زرع telemeters ECG تقديم مزايا زرع جراحية بسيطة ، وعلى المدى الطويل تسجيل electrograms الفئران في العيادات الخارجية ، والتوسع في وقت واحد مع تسجيلات متعددة من الحيوانات. هنا ، نقدم دليل خطوة بخطوة لغرس telemeters لتسجيل تخطيط القلب المتنقلة في الفئران. مطلوب الالتزام الدقيق الأسلوب العقيم لتحقيق نتائج إيجابية مع بقاء إمكانية غرس وتسجيل من اسابيع الى اشهر. وهكذا ، زرع ECG القياس هو أداة قيمة للكشف عن معلومات مهمة عن القلب الكهربية المتنقلة في النماذج الحيوانية مثل الماوس.
Protocol
1. إعداد مقياس البعد عن الزرع الجراحي
- قبل إدراج مقياس البعد an ECG في الماوس ، فمن المهم للتأكد من أن مقياس البعد ECG غير معقمة وتعمل على نحو جيد. عادة ما يتم توفير أجهزة القياس عن بعد جديد في حالة عقيمة من قبل الشركة المصنعة. يمكن إعادة استخدامها telemeters ECG بشرط تنظيف الجهاز باستخدام Tergazyme حل 1 ٪ على الأقل 4 ساعات. يمكنك شطف مقياس البعد مع الماء المعقم بعد التنظيف مع Tergazyme. بالإضافة إلى ذلك ، استخدم Wavicide - 01 بين عشية وضحاها مطهر لتعقيم مقياس البعد ECG. يجب التأكد من غسل مطهر قبالة مع الماء المعقم قبل 48 ساعة من زرع في الفئران. مخزن في وعاء معقم.
- التحقق من مقياس البعد يؤدي لسلامة الأسلاك كل إجراء وغمد العازلة. بدوره على الارسال القياس باستخدام مغناطيس داخل لوح 5 سم من مقياس البعد ، واختبار الإشارة مع راديو AM 530 تردد. وينبغي أن يكون إشارة قوية وواضحة ويجب أن تختلف في شدتها والملعب على أساس التلاعب الأسلاك. تسجيل رقم الطراز ، وعدد مقياس البعد المسلسل ، وقيمة المعايرة ECG. مصنعين كثيرا ما يوصي بأن مقياس البعد ينبغي أن يكون على لمدة 24 ساعة قبل الزرع ، راجع دليل التعليمات لمقياس البعد الخاص للحصول على تفاصيل محددة. في هذا المثال ، سوف نستخدم العلوم البيانات الدولي (DSI) مقياس البعد عن التوطين.
- ويمكن تحقيق مقياس البعد إعداد تؤدي عن طريق خفض السلبية (أبيض) إلى حوالي 3.5 سم والموجب (الحمراء) يؤدي إلى 2.5 سم. هذه هي أطوال الأمثل لغرس القيادة السلبية في صدره الأيسر ، ويؤدي إيجابي في البطن اليسرى (انظر الشكل 2). المقبل ، إزالة غمد العازلة لفضح 7 ملم من الأسلاك. الطلاء نهاية الرصاص المعدني مع superglue العقيمة ، مثل جيمس بوند ، الطبيب البيطري ، ونعلق ثم القبعات تؤدي إلى نصائح المعدنية. وهذه القبعات تجنب تآكل الجلد الناجم عن الرصاص التنسيب. وينبغي أن يتعرض حوالي 2-3 ملم الأسلاك المعدنية للاستشعار عن ضربات القلب الكهربائي الأصلي.
2. الجراحية لزرع مقياس البعد
- من اجل استخدام تقنية معقمة في جراحة الفئران ، وسوف تحتاج قفازات معقمة وثنى العقيمة ، والخيوط الجراحية Prolene 6-0. سوف تحتاج أيضا إلى 2 أزواج من ملقط معقم ، 1 زوج من كليلة العضوية مقص ، مشرط ، وسائق الإبرة. ويمكن تعقيم الأدوات الجراحية في كوب حبة تعقيم تسخينه إلى 250 درجة مئوية. يجب التأكد من تعقيم وغسل مقياس البعد كما هو موضح سابقا قبل الاستخدام.
- إعداد الماوس لعملية جراحية بواسطة التخدير لأول مرة الماوس في مربع التعريفي به 3 ٪ في isoflurane 0.5 لتر / دقيقة O2 100 ٪. استخدام وسادة التدفئة ، مثل مضخة - T ، والتي توزع المياه الدافئة ، للحفاظ على درجة حرارة الماوس للتخدير. يمكن رصد درجة الحرارة عن طريق المستقيم التحقيق ، اذا شئت. عندما يكون مخدرا بشكل كاف الماوس ، حلق تماما في البطن والصدر من الفأرة مع كليبرز الكهربائية. إعادة تخدير الفأر مع isoflurane قبل نقل الماوس لأنبوب تدفق مستمر ، مستلق ، مع رئيس والذيل التي تواجه بعيدا نحو لكم. الشريط أسفل الكفوف الماوس على طاولة العمليات الجراحية ساخنة. مسح البطن مع مسحة الكحول لإزالة الشعر ، وحلق لتنظيف الحقل من المنطوق. تطبيق ثلاثة معاطف منفصلة مع مسحات من betadine لتطهير منطقة البطن والصدر. التحقق من المستوى الصحيح للتخدير عن طريق الضغط على الماوس فراش الظفر. بعد أن تم إعداد الماوس لإجراء عملية جراحية ، واستخدام قفازات معقمة وتطبيق ثنى العقيمة إلى الميدان الجراحية.
- داخل الصفاق غرس مقياس البعد يوفر ميزة من التجريب فسيولوجيا التمارين. عن الإدراج داخل الصفاق ، وتبدأ عملية جراحية باستخدام مشرط لإنشاء خط الوسط شق عمودي في الجلد المغطي البطن تقريبا 2.5 سم في الطول. الجلد بعناية منفصلة من الأنسجة الضامة الكامنة باستخدام مقص كليلة العضوية. ثم ، إنشاء شق عمودي في خط الوسط ألبا الخط البريتوني المغطي ، ما يقرب من 1.5 سم في الطول. بالإضافة إلى ذلك ، وخلق حفرة صغيرة في الصفاق أعلاه فقط (الجمجمة) إلى شق البريتوني ، والذي سيكون بمثابة منفذ ليقود تحت الجلد. أثناء تنفيذ عملية جراحية ، والحفاظ على رطوبة موقع الجراحية التي تقطر أحيانا عقيمة المالحة على ميدان التشغيل.
- إدراج مقياس البعد في تجويف البريتوني الحق. ملقط إدراج في الحفرة متفوقة على مقياس البعد وسحب كل من يؤدي ما يصل من خلال ثقب الرصاص بحيث تكون بارزة من البريتوني. الاستخدام المتواصل 6-0 Prolene الغرز لإغلاق 1.5 سم البريتوني شق خط الوسط العمودي.
3. تؤدي زراعة وإغلاق البطن
- توضع يؤدي ECG في التكوين الثاني الرصاص. زمام المبادرة مع غمد بيضاء / شفاف هو سلبي ، ويتم وضعها في البطن العلوية اليسرى. أولا ، خلق الجلد 0.5 سم في شق صدره الماوس اليمنى العليا.المقبل ، واستخدام المقص صريحة لإنشاء نفق إلى شق البطن. سحب زمام المبادرة من خلال النفق واستخدام الخيط Prolene 6-0 لترسيخ تؤدي إلى العضلات الصدرية. تأكد من الدرز على رأس الجزء الظاهر من الرصاص ، وإنشاء اتصال جيد بين العضلات يؤدي والكامنة. استخدام الخيط second الأقرب إلى واحد المذكورة آنفا ، إلى شل تؤدي إلى العضلات. إغلاق شق الجلد باستخدام خياطة Prolene 6-0.
- وضعت قيادة الإيجابية (غمد أحمر) في البطن اليسرى تحت الحجاب الحاجز الأيسر وأسفل القلب. يرتكز تؤدي إلى أنسجة البريتوني الكامنة التي خياطة Prolene 6-0 وينبغي أن يكون الاتصال جيدة مع النسيج البريتوني. شق إضافية ليس من الضروري في هذه الخطوة لأن موقع غرس الرصاص على مقربة من خط الوسط شق عمودي ، وبالتالي يمكن الوصول إليها بسهولة مع حقل الجراحية الموجودة. لاحظ أنه يجب رفع الأنسجة البريتوني لتجنب ثقب في الأمعاء الكامنة.
- إغلاق اللفافة البطن والجلد بالتتابع مع Prolene 6-0 في طبقات.
4. العناية اللاحقة للعمليات الجراحية
- يعطي الماوس 0.1 مل من [1 ملغ / مل] البوبرينورفين لتسكين فورا بعد الجراحة. السماح للماوس للتعافي من عملية جراحية في لوحة ساخنة. إذا كان لعملية جراحية طويلة الماوس> 30 دقيقة ، أو إذا كان الماوس يظهر الجافة ، قد حقن معقمة المالحة 0،2-0،3 مل في الصفاق لمعالجة الجفاف. لتسكين بعد العملية الجراحية استمرت الممارسة القياسية لتقديم الفئران مع البوبرينورفين مرتين يوميا لمدة ثلاثة أيام ، ومن ثم حسب الحاجة كل ثماني ساعات.
- تنظيف قبالة betadine مع مسحة الكحول لتجنب تهيج بعد الجراحة. تذكر لتسجيل الوزن بعد الجراحة لقرار لاحق في مرحلة ما بعد العمليات الجراحية الصحية.
- 8-24 ساعة بعد الجراحة ، ويعطي الماوس تسكين إضافي مع البوبرينورفين عند الحاجة ، حيث سيؤدي ذلك إلى تخفيف الألم والحد من التوظيف يؤدي الفشل في الماوس الخمش في الموقع بعد الجراحة.
5. ممثل النتائج
عندما يقوم بشكل صحيح ، يجب أن يكون مغلق الماوس شقوق في البطن تحت الجلد مع يقود تحت الجلد. عادة ، يأخذ الماوس 10-30 دقيقة للتعافي من التخدير. يستغرق حوالي 7-10 أيام قبل أن الفئران قد تعافى تماما من عملية جراحية ، كما يتضح من التعافي من فقدان الوزن بعد الجراحة ، وتطبيع التنقل.
المضاعفات الأكثر شيوعا من الجراحة ويؤدي تآكل الأطراف عن طريق الجلد في الأيام ال 10 الأولى بعد الجراحة. ويمكن تفادي هذه المضاعفات المشتركة من خلال الالتزام بحزم تحت الجلد يؤدي إلى الأنسجة تحت الجلد أو الغشاء البريتوني. يؤدي هذا الأسلوب يتجنب الركود ، والتي تخلق الاحتكاك والضغط على الجلد عندما ambulates الماوس. وإن كان من المحتمل أقل شيوعا ، والعدوى والإنتان يحدث من أخطاء في أسلوب عقيم ، أو من عدم اكتمال telemeters التنظيف المستخدمة.
قد يتم تسجيل تخطيط القلب الانتاج بمقدار مصفوفة الاستقبال إلى جانب برنامج للحصول على البيانات ، مثل بيانات العلوم الدولية (الطبري). وينبغي أن تتضمن النتائج الموجي موجة ف محددة بوضوح ، وتدل على زوال الاستقطاب الأذيني ، وكذلك موجة QRS مما يدل على الاستقطاب البطيني ، كما هو مبين في الشكل 3 أدناه. وينبغي أن نوعية جيدة وتخطيط القلب تتبع موجة ف محددة بوضوح تسبق موجة QRS محددة بوضوح في نسبة 1:1. يجب أن يكون هناك إشارة الخلفية منخفضة وفترات RR ينبغي العادية في البرية من نوع الفئران. قد يكون ضعف جودة ECG التتبع وغير واضحة أو موجات P QRS ، أو إشارة الخلفية ، التي قد تجعل من الصعب تحليل الكمبيوتر لاحقة. قد تكون ثابتة وتخطيط القلب الفقيرة التي تتبع يؤدي مقياس البعد إعادة زرع ، وعادة في وقت واحد. لإعادة زرع تؤدي مقياس البعد ، ضع الماوس تحت التخدير ، وباستخدام تقنية جراحية ، وجعل شق في الجلد المغطي مباشرة زمام المبادرة في السؤال. عند الوصول إلى الرصاص وقطع خياطة ترسيخ الرصاص ، وتؤدي إلى نقل الموقع المطلوب قبل ترسيخ قيادة مرة أخرى. أخيرا ، على مقربة من موقع الجراحية مع Prolene 6-0.
الشكل 1 : مثال على مقياس البعد مع حيوان صغير يؤدي الإيجابية والسلبية. بشكل عام ، وتؤدي الحمراء هي قيادة إيجابية ، والرصاص الأبيض هو تؤدي سلبية. وينبغي أن يؤدي كل لها غمد العازلة ، ملم 5-7 من الأسلاك المكشوفة والمغطاة تلميح البلاستيكية ، مما يمنع تآكل من الرصاص عن طريق الجلد.
الشكل 2 : يبين الكرتون السليم المواقع غرس مقياس البعد على الماوس. هو مزروع الأبيض (السلبية) الرصاص في صدره الماوس العلوي الأيسر ، ويتم وضع (إيجابي) أحمر يؤدي في البطن اليسرى ، ان هذه الحواس مقياس البعد عن "قيادة اثنين" التكوين.
الشكل 3 : الموجي ممثل ماوس في إيقاع الجيوب الأنفية طبيعية. ف موجة الاستقطاب الأذيني ويمثل المركب QRS يمثل الاستقطاب البطيني. وينبغي أن يكون الموجي ذات جودة عالية ومتميزة موجة ف تسبق كل مجمع QRS في نسبة 1:1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الخطوات الحاسمة لهذا الإجراء هي التنظيف السليم وإعداد الماوس قبل الجراحة البقاء. عندما يتم تنظيفها بشكل صحيح مقياس البعد وموقع المنطوق الماوس ، هناك أفضل بكثير بعد الجراحة النتيجة. بالإضافة إلى ذلك ، اهتماما وثيقا لقيادة التنسيب بعد الجراحة يقلل تآكل الجلد. التعديلات الممكنة لهذه التقنية تشمل تكوينات بديلة لتقييم وظيفة الجدار الجانبي LV (الرصاص أنا التكوين) ، أو استخدام مقياس البعد ليس فقط بالنسبة للتحليل الموجي تخطيط القلب ، ولكن أيضا لدرجة الحرارة وضغط الدم حتى تحليل [خارج نطاق هذه المادة] . موقع بديل القياس عن بعد لتسجيل تخطيط القلب تحت الجلد هو موضع الصدارة مع أسلاك خارجية ، أي مقياس البعد غير مزروع. هذا هو المناسب لتسجيل المواليد من الطول الموجي تخطيط القلب ، ولكن ليس من العملي لتخطيط القلب القياس المتنقلة.
مقياس البعد الزرع هو أداة قوية لمراقبة تخطيط القلب المتنقلة ، واستخدمت لتقييم حدوث عدم انتظام دقات القلب البطيني ، والموت القلبي المفاجئ ، AV كتلة العقدي ، والرجفان الأذيني. 1،2،3 بيانات قيمة بالإضافة إلى ذلك ، وتطبيقات تحليل القياس عن بعد وأسفرت بشأن السيطرة على معدل ضربات القلب والقلب تقلب سعر الفائدة. التطورات الحديثة في تخطيط القلب 4،5 مقياس البعد التكنولوجيا وشملت القياسات الحساسة من درجة حرارة الجسم الأساسية وضغط الدم. 6 وهكذا ، مقياس البعد هو أسلوب زرع قيمة لمعايرة التغيرات الفسيولوجية في الفئران وغيرها من النماذج الحيوانية من المرض.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
يتم اعتماد علامة ماكولي بمنحة إرشادهم التدريب NIH 5T32HL066991 - 07
ويدعم زاندر Wehrens المعاهد الوطنية للصحة / NHLBI المنح 1R01HL091947 - 01A209 - 03S109 و3R01HL089598
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Steri 250 Bead Sterilizer | Inotech | IS-250 | |
| Blunt-Ended Scissors | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5980 | |
| Blunt-Ended Forceps (x2) | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5138 | |
| Veterinary Anesthesia Vaporizer | Surgivet | Isotec 4 | |
| T/Pump | Gaymar Industries | P/N11184-000 | |
| Propylene Blue Monofilament Suture | Ethicon Inc. | 8718 | |
| Povodone Iodine, 10% | Equate | N/A | |
| Alcohol Swabs | PDI | B339 | |
| Tergazyme | Alconox, Inc. | 21837-118 | |
| Wavidicde-01 | Medical Chemical Corporation | Wavicide-01 | |
| ECG Telemeter | DataSciences International | EA-F20 |
References
- Cerrone, M. Bidirectional ventricular tachycardia and fibrillation elicited in a knock-in mouse model carrier of a mutation in the cardiac ryanodine receptor. Circ Res. 96 (10), e77-e77 (2005).
- Chelu, M. G. Calmodulin kinase II-mediated sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak promotes atrial fibrillation in mice. J Clin Invest. 119 (7), 1940-1940 (1940).
- Sood, S. Intracellular calcium leak due to FKBP12.6 deficiency in mice facilitates the inducibility of atrial fibrillation. Heart Rhythm. 5 (7), 1047-1047 (2008).
- Swoap, S. J., Gutilla, M. J. Cardiovascular changes during daily torpor in the laboratory mouse. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 297 (3), R769-R769 (2009).
- Costa-Goncalves, da, C, A. Role of the multidomain protein spinophilin in blood pressure and cardiac function regulation. Hypertension. 52 (4), 702-702 (2008).
- Wehrens, X. H., Kirchhoff, S., Doevendans, P. A. Mouse electrocardiography: an interval of thirty years. Cardiovasc Res. 45 (1), 231-231 (2000).
