Выполнение и обработка FNA Передней жировой ткани для амилоида

Summary

Жир стремление площадкой является предпочтительным, минимально-инвазивных и низкая стоимость подхода по сравнению с другими методами для выявления амилоида для диагностики системного амилоидоза. Это видео статье показано, процедурный план выполнения жира стремление площадки с соответствующей обработки образцов для оптимального диагностического результата.

Abstract

Исторически сложилось так, сердце, печень, почки и биопсии были выполнены, чтобы продемонстрировать амилоидных отложений в амилоидоза. Так как клинические проявления этого заболевания является так переменную и неспецифические, связанные с ними риски этих биопсий являются слишком большими для диагностической ценности. Другие сайты, которые имеют более низкий биопсии риска, таких как кожа или десен, также относительно инвазивных и дорогих. Кроме того, эти биопсии не всегда имеют достаточную депозиты амилоида установить диагноз. Жир стремление площадка продемонстрировала хорошие клинические корреляции с низкой стоимостью и минимальными заболеваемости. Тем не менее, Есть нет стандартных протоколов для выполнения данной процедуры или обработки атмосферный образца, что приводит к переменной и невоспроизводимых результатов. Наиболее часто используемые метода для выявления амилоида в ткани светло-зеленого двулучепреломления на конго окрашенные срезы использованием поляризационного микроскопа. Эта техника требует ячейки блока подготовки атмосферный материал. К сожалению, больных на ранней стадии амилоидоза имеют минимальное количество амилоидных что значительно снижает чувствительность Конго красный окрашенных ячейки блока разделы жира аспиратов площадку. Таким образом, ультраструктурным оценка жира аспиратов площадку с помощью электронной микроскопии следует использовать, учитывая его повышенную чувствительность для обнаружения амилоида. Эта статья демонстрирует простой и воспроизводимой процедуры для выполнения передней жира стремление площадкой для выявления амилоида использованием как окрашивания Конго красным разделов ячейки блока и электронной микроскопии для ультраструктурным идентификации.

Protocol

Введение

Системный амилоидоз сильно варьирует заболевание, которое относится к внеклеточным отложением различных белков, которые все вместе называются амилоида. Осаждение этих амилоидные фибриллы с бета плиссированные конфигурация приводит к различным клинические проявления в зависимости от органов, участвующих. Наиболее клинически значимых проявлений системного амилоидоза отмечаются, когда есть участие критических органов, таких как сердце, печень, и / или почек. Исторически эти участвуют органы были бы биопсию, чтобы продемонстрировать наличие амилоида. Эти умеренно инвазивных процедур, проводимых в том числе значительный риск кровотечения. Жир стремление площадку тех пор было показано, чтобы обеспечить надежную и неинвазивный метод для выявления амилоида в системный амилоидоз ^1. Эта процедура существенно схожей с липосакцией подкожно-жировой клетчатки в передней брюшной стенке под местной анестезией для получения фиброзно-жировой ткани для оценки скудные депозитов амилоида в малой кровью стенок сосудов ^2.

Наиболее часто используемые методы идентификации амилоида в ткани остается характерным яблочно-зеленый двулучепреломления картины видно, когда Конго красный окрашенных срезах визуализируются под микроскопом поляризованный свет ^3. Когда жир стремление площадку осуществляется, Конго красные пятна может быть сделано либо на прямую смазывают слайдов или клеточных препаратов блок атмосферный жировой ткани. Однако у пациентов на ранних стадиях амилоидоза имеют скудную депозиты амилоида, что значительно снижает чувствительность Конго красный окрашенных ячейки блока разделы ^4,5. Ультраструктурные оценка жира аспиратов площадку с помощью электронной микроскопии имеет лучшую воспроизводимость и улучшенной чувствительностью ^4. Поэтому, рекомендуется представить весь жир аспиратов площадкой для подготовки ячейки блока и для выполнения электронной микроскопии ^2.

Жир стремление площадкой является относительно низкая стоимость и неинвазивный метод для получения тканей для диагностики системного амилоидоза. В этой статье описывается процедура жира стремление площадку вместе с подробными сведениями об обработке образцов представить образец для окрашивания Конго красным и ультраструктурные оценки с помощью электронной микроскопии. В этом видео, мы демонстрируем это воспроизводимая и простая процедура для получения оптимального диагностического материала.

1. Выполнение FNA Передней жировой ткани

А. обезболивания в данной местности (рис. 1 и 2)

1. Прием алкоголя тампоны или агента очищения кожи предпочитают конкретного учреждения, чистая кожа на нижнем квадранте области живота сбоку от средней линии и ниже пупка (рис. 1).
2. Марк ромбовидной формы площадью около 2 х 2 дюйма, как показано на рисунке 1 с маркером.
3. Аспирируйте примерно 10 мл 1% лидокаина с 18G иглу. Прикрепить 25G 1 ½ дюйма иглы шприца. Удалите пузырьки воздуха, нажав вертикально шприц, одновременно нажимая на поршень пока жидкость не обойтись и без воздушных пузырьков присутствуют.
4. Обезболить вдоль границ ромбовидной области уже отмечены, как показано на рисунке 2. Начните с вставкой 25G иглу под кожу в точке и осторожно толкать иглу подкожно в точке X. Отойдите на поршень шприца, чтобы убедиться, что вы не в сосуде. Затем медленно толкать поршень проникнуть до 2,5 мл лидокаина (около ¼ от лидокаина в 10 мл шприц) при выводе иглу в точку, не давая игла вышла из кожи в точке А (рис. 2a3). С иглой по-прежнему под кожей изменить направление к точке Y (рис. 2A4) и нажмите иглой подкожно точки Y (рис. 2b1). Как и прежде, убедитесь, что игла не находится в сосуде и обойтись примерно в 2,5 мл лидокаина, медленно снять иглу через точку (рис. 2B3 через 2В4). Повторите аналогичные шаги, начиная с точки В и отпуск лидокаина подкожной от точки В к Х и В к Y (рис. 2c1 через 2d4). Предотвращение кровотечения из уколов и B фирмой применения стерильных кусок колеи.
5. Теперь можно проверить, что этот район под наркозом, слегка касаясь кожи в течение анестезии ромбовидной кончиком / углу кусок марли хлопка, по сравнению с соседними ненаркотизированных кожи.

Б. Выполнение жира стремление площадки (рис. 3)

(Применение местной анестезии до выступления жира стремление площадки могут быть обойдены, в зависимости от региональных и индивидуальных предпочтений. Правильно выполнены FNAB процедуры для передних жира стремление площадки может быть завершена в одном укол. Однако в зависимости от болевого порога индивидуального пациента , маневрирования 18G иглу взад и вперед, чтобы ткань подкожно-жировой клетчатки относительно distresпеть. Обезболивания метод, описанный здесь достигается эффект только в двух уколов иглой с 25G и предотвращает боли с улучшением толерантности к процедуре.)

1. Соберите 18G 1 ½ дюйма иглы на 10 мл шприца. Горы шприц иглой сборки в шприц сцепление ("FNAB сцепление / пистолет") для надлежащего применения и выпуска вакуума.
2. Вставьте кончик иглы в подкожно-жировой клетчатки в очищены и анестезия ромбовидной области (рис. 3а).
3. Полностью отказаться поршень шприца с иглой в подкожную ткань для создания вакуума (рис. 3б).
4. Поддерживать вакуум и маневра иглы вперед и назад в различных направлениях в подкожно-жировой клетчатки (рис. 3в через 3i). Каждый удар должен быть как можно дольше с длиной иглы выбраны не давая игла вышла из кожи. Максимальная частота дискретизации достигается за счет изменения направления с каждым ударом (рис. 3i). Важно сохранить направление иглы касательной к серозной и параллельно поверхности кожи, чтобы избежать проколов брюшной полости.
5. Фиброзно-жировой ткани накапливается в шприц. После достаточно фиброзно-жировой ткани фрагментов (до 1 мл фрагменты богатых кровь, смешанную образца) извлекаются, выпуск вакуумного полностью и удалить иглы (рис. 3 Кб).
6. У пациента или помощник Приложите усилие на площади процедуру с площадки марли, чтобы предотвратить кровоизлияние крови.

2. Обработки образцов

1. Место не менее 5-6 фрагменты фиброзно-жировой ткани в глутаральдегида решение для электронной микроскопии (рис. 4В).
2. В зависимости от институциональных протокол, несколько мазков фрагменты фиброзно-жировой ткани может быть получен за счет распределения их между двумя предметными стеклами (рис. 4А).
3. Оставшийся материал разрешается сгусток в шприц (это может занять 5-7 минут, в зависимости от времени свертывания) (рис. 4С).
4. Аспирируйте 10% формалина в шприце, так что сгустки материала ткани фиброзно-жировой смещается от стены шприц и свободного плавания (рис. 4С2). Удалите поршень из шприца (рис. 4C3) и передачи сгустками ткани в фиброзно-жировой 10% формалина контейнер с открытым концом шприц противоположном конце сопла (рис. 4С4).
5. Этикетка контейнеры надлежащим образом и представить глутаральдегида для электронной микроскопии и формалина для H & E раздел и Конго красное пятно для оценки под поляризационным микроскопом. Если мазки готовы, они могут быть обработаны в соответствии с протоколом отдельные лаборатории.

Рисунок 1. Площадь для анестезии для FNAB передней жировой ткани.

Рисунок 2. Обезболивания в регионе.

Рисунок 3. Выполнение FNAB передней жировой ткани.

Рисунок 4. Обработка передней жировой ткани аспирата, которые будут представлены в лабораторию для выявления амилоидных отложений.

3. Представитель Результаты

Рисунок 5. Амилоида в стенках мелких кровеносных сосудов фрагменты фиброзно-жировой ткани. Фиброзно-жировой ткани в формалине обработаны, парафин, окрашивали Конго красный, и рассмотрены поляризационные световой микроскопии. Амилоида в стенках мелких кровеносных сосудов показывает, зеленого яблока двулучепреломления (белая стрелка).

Рисунок 6. Ткань не хватает амилоидоза. Двулучепреломления зеленого яблока отсутствует в тканях различных пациентов без амилоидоза. Синий двулучепреломления (белая стрелка) коллагеновых волокон, как правило, присутствуют почти во всех образцах.

Рисунок 7. Фибриллы в соответствии с амилоида в стенки кровеносного сосуда. Электронная микрофотография прямые, неветвящиеся, случайно рассеянные 8-10 нм в диаметре волокон образована амилоида в стенки кровеносного сосуда.

Discussion

Диагностика амилоидоза, как правило, достигается при биопсии пораженных органов, таких как почки, печень и / или сердца. Такой подход имеет высокую диагностическую ценность, однако, является инвазивным и могут быть связаны с осложнениями, включая кровоизлияние ^2. Ректально, десны, и биопсия костного мозга предпочтительным для диагностики как относительно менее инвазивных подход в 1960-х годов ^6,7,8. Брюшной жир стремление площадке был зарегистрирован в 1973 году как безопасные, минимально инвазивных, простой и менее дорогостоящей процедурой для ткани диагноз системного амилоидоза ^1. Тем не менее, детали процедуры и подход к обработке полученного образца не когерентно сообщается. Это видео и статье описывается процедура шаг за шагом.

Подход для выявления амилоида в жире стремление площадку, похоже, также не очень хорошо стандартизованный несколько исследований, сравнения и оценки различных подходов ^1,5,6,7,8. Оценка передней жира аспиратов площадку с окрашивания Конго красным менее чувствительна с более низкими interobserver воспроизводимость особенно в ранние случаи амилоидоза со скудной депозиты амилоида ^5. Immunohistochemistry осуществляется на фиксированных формалином и залитых парафином ячейке блока секций и Конго красной флуоресценции осуществляется на цитологию мазков были зарегистрированы для улучшения диагностической чувствительностью ^9,10. Электронная микроскопия улучшает обнаружение и идентификация скудные фибрилл амилоида в небольших стен кровеносного сосуда в фиброзно-жировой ткани в жировой ткани аспиратов ^{4, 5.} Основываясь на этой информации, в данной статье описывается обработка образца подготовить ячейки блоков (для оценки Конго красный окрашенных ячейки блока секции под поляризационный микроскоп для диагностики двулучепреломления зеленого яблока, а также для иммуногистохимии, как это указано) и электронной микроскопии. Однако в зависимости от выбранного подхода для оценки образцов для амилоида, он может быть подвергнут цитология мазков подготовка, подготовка ячейки блока и обработки данных для электронной микроскопии. Некоторые лаборатории проводить испытания на мазки готовят из атмосферный фрагментов ткани фиброзно-жировой и окрашивают конго для изучения флуоресценции ^10.

Как правило, в конце амилоидоз, световой микроскопии с Конго красным поляризационной микроскопии может быть достаточно, однако на ранних стадиях заболевания конго окрашивания поляризационной микроскопии по разделам ячейки блока менее чувствительным и надежным для жировая ткань всасывает ^4,5,11 . Другие специальные пятна в том числе тиофлавина T могут быть использованы с подобными ограничениями. Другие подходы для выявления амилоида включать оценку аспирата мазков для амилоида с Конго красным поляризационной микроскопии и флуоресценции ^10. По нашему опыту этот метод менее воспроизводимым. Оценка кровеносных сосудов в жировой ткани для амилоида с помощью электронной микроскопии позволяет преодолеть эти ограничения ^4,11. Дальнейшая характеристика амилоида была сообщает иммуноэлектронной микроскопии ^12, однако эти методы не могут быть доступны широко невысшее профилактического учреждения.

Иглы, используемые для выполнения стремление процедуры могут быть классифицированы в зависимости от их размеров калибр на мелкие (21-25G), промежуточные (18-20G) и большой (например,-14G) ^11. Передняя жира устремления площадки, как сообщается, проводится с помощью переменной датчиков от промежуточных (от 18 до 20G) до штрафа (от 21 до 22G) ^2,10. Большая часть массы поражения атмосферным с тонкой иглы (например, 25G), чтобы получить хорошие мазки цитологии вместе с дополнительными проходит с более широкой иглой (например, 18G), чтобы получить дополнительный образец для сотовых блоков.

В передней жира стремление коврик, сплоченных ткани фиброзно-жировой не аспирата также с более тонкими иглами. Сотовые Блок подготовки и электронной микроскопии имеют важное значение для оценки малых стенки кровеносных сосудов в ткани фиброзно-жировой фрагментов в жир всасывает. Более широкие иглы (например, 18G) рекомендуются для получения диагностических адекватного материала ^2,10. Так как процедура сравнима с обычными FNAB, жир стремление площадка называется FNAB хотя более широкий калибр иглы могут быть использованы для выполнения его ^5.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alcohol swabs
gauze pads
marking pen
10 mL syringes x2
1% lidocaine			local anesthetic- If lidocaine is used alone, it causes an initial burning sensation after instillation. This can be prevented by using a 1:1 mixture of 1% lidocaine and 1% sodium-bi-carbonate
18 gauge(G) 1 ½ inch needles x2 (for performing FNAB)
25G 1 ½ inch needle			for injecting local anesthetic
FNA syringe holder ("gun")
bandage
vial of glutaraldehyde			for electron microscopy
biopsy container of 10% formalin