ביצוע ועיבוד FNA של Pad שומן Anterior עבור עמילואיד

Summary

השאיפה כרית שומן היא גישה מועדפת, עלות פולשנית, נמוכה בהשוואה לשיטות אחרות כדי לזהות עמילואיד לאבחון עמילואידוזיס מערכתית. מאמר זה מדגים וידאו המתאר פרוצדורליים לביצוע השאיפה כרית שומן עם עיבוד מתאים של הדגימה לתוצאות אבחון אופטימלי.

Abstract

מבחינה היסטורית, ביופסיות הלב, הכבד והכליות בוצעו להפגין פיקדונות עמילואיד עמילואידוזיס. מאז המצגת הקליני של המחלה משתנה כל כך לא ספציפי, את הסיכונים הכרוכים ביופסיות של אלה גדול מדי עבור התשואה אבחון. אתרים אחרים כי יש סיכון נמוך יותר ביופסיה, כגון עור או חניכיים, גם פולשנית יחסית יקר. בנוסף, ביופסיות אלה לא תמיד יש מרבצי העמילואיד מספיק כדי לקבוע אבחנה. השאיפה כרית שומן הוכיח קורלציה קלינית טובה עם עלות נמוכה תחלואה מינימלית. עם זאת, אין פרוטוקולים סטנדרטיים לביצוע הליך זה או עיבוד הדגימה aspirated, אשר מוביל לתוצאות משתנה nonreproducible. שיטת מנוצל לרוב לאיתור עמילואיד ברקמות הוא birefringence בצבע ירוק תפוח על סעיפים קונגו אדום מוכתם באמצעות מיקרוסקופ מקטב. טכניקה זו דורשת לחסום תא הכנת חומר aspirated. למרבה הצער, החולים מציגים בשלב מוקדם של עמילואידוזיס יש כמות מינימלית של עמילואיד אשר מקטינה באופן משמעותי את הרגישות של קונגו אדום מוכתם לחסום חלקים לתא של aspirates כרית שומן. לפיכך, ההערכה של ultrastructural aspirates כרית השומן על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים צריך להיות מנוצל, בהתחשב ברגישות מוגברת שלה לגילוי עמילואיד. מאמר זה מדגים תהליך פשוט לשעתקו לביצוע כרית קדמית השאיפה שומן לצורך זיהוי של עמילואיד ניצול שניהם אדום מכתים קונגו סעיפים לחסום התא במיקרוסקופ אלקטרונים לצורך זיהוי ultrastructural.

Protocol

הקדמה

עמילואידוזיס מערכתית היא מחלה משתנה מאוד המתייחס בתצהיר תאיים של חלבונים שונים, כי הם יכונו עמילואיד. הפקדת אלה סיבי עמילואיד עם תצורה קפלים בטא מוביל מצגות קליניים שונים בהתאם לאיברים המעורבים. הביטויים הכי רלוונטיות קלינית של עמילואידוזיס מערכתית מצוינים כאשר יש מעורבות של איברים קריטיים כגון הלב, הכבד, ו / או כליה. מבחינה היסטורית, איברים אלה המעורבים יהיה ביופסיה כדי להפגין נוכחות של עמילואיד. אלה הליכים פולשניים בינוני נשאו סיכון משמעותי, כולל דימום. השאיפה כרית שומן מאז הוכח לספק שיטה אמינה פולשנית לצורך זיהוי של עמילואיד עמילואידוזיס מערכתית ^1. הליך זה דומה במהותו ל שאיבת שומן תת עורית של שומן בדופן הבטן הקדמית תחת הרדמה מקומית כדי לאחזר רקמות fibroadipose להערכת פיקדונות עמילואיד דלים בתוך דפנות כלי הדם קטן ^2.

השיטה מנוצל לרוב לצורך זיהוי עמילואיד ברקמות נשאר דפוס אופייני בצבע ירוק תפוח birefringence לראות כאשר קונגו סעיפים אדום מוכתם הם דמיינו תחת מיקרוסקופ אור מקוטב ^3. כאשר השאיפה כרית שומן מתבצע, קונגו כתמים אדומים ניתן לעשות זאת על שקופיות או מרוח ישיר או ההכנות לחסום תא של רקמת השומן aspirated. עם זאת, חולים בשלבים המוקדמים של עמילואידוזיס יש מרבצי העמילואיד דלים, אשר מקטינה באופן משמעותי את הרגישות של קונגו אדום מוכתם לחסום חלקים התא ^4,5. הערכה Ultrastructural של aspirates כרית השומן על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים יש שחזור טוב יותר רגישות משופרת ^4. לכן, מומלץ להגיש את כל aspirates כרית שומן להכנת שתי לחסום תא לביצוע במיקרוסקופ אלקטרונים ^2.

השאיפה כרית שומן היא עלות נמוכה יחסית, שיטה לא פולשנית להשגת רקמה לאבחון עמילואידוזיס מערכתית. מאמר זה מתאר את הליך שומן שאיפה כרית יחד עם פרטים על עיבוד המדגם להגיש הדגימה עבור מכתים הן קונגו אדום והערכה ultrastructural על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים. בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את הליך לשחזור פשוטה כדי לאחזר חומר אבחון אופטימלי.

1. ביצוע FNA של Pad שומן Anterior

א הרדמה מקומית של האזור (איור 1 & 2)

1. שימוש באלכוהול או מטליות לניקוי העור המועדף על ידי סוכן מוסד מסוים, לנקות את העור באזור ברבע התחתון של הבטן לרוחב קו האמצע ומתחת הטבור (איור 1).
2. סמן אזור בצורת מעוין על 2 x 2 ס"מ כפי שמוצג עם עט סימון באיור 1.
3. לשאוב כ 10 מ"ל של 1% לידוקאין עם מחט 18G. צרף 25 גרם ½ 1 אינץ מחט המזרק. הסר את כל האוויר שנלכד על ידי הקשה על מזרק זקוף תוך כדי לחיצה על הבוכנה עד נוזלי הוא חילק ולא בועות אוויר נוכחים.
4. הרדימי לאורך גבולות באזור מעוין מסומן כבר כפי שמוצג באיור 2. התחל על ידי החדרת מחט 25 גרם ממש מתחת לעור בנקודה ובזהירות לדחוף את המחט מתחת לעור לנקודה X. משוך לאחור על הבוכנה את המזרק על מנת להבטיח כי אתה לא בתוך כלי. ואז לאט לדחוף את הבוכנה לחדור עד 2.5 מ"ל של לידוקאין (כ ¼ של לידוקאין מזרק 10 מ"ל) ואילו נסיגה המחט לנקודה בלי לתת המחט לצאת העור בנקודה A (איור 2a3). בעזרת המחט עדיין מתחת לעור לשנות את הכיוון לעבר נקודה Y (איור 2a4) ולדחוף את מחט תת עורית לנקודה Y (איור 2b1). כמו קודם, לוודא שהמחט אינה כלי ולחלק כ 2.5 מ"ל של לידוקאין תוך לאט למשוך את המחט דרך הנקודה A (איור דרך 2b3 2b4). חזור על צעדים דומים החל מנקודה B ו מחלק לידוקאין תת עורי מנקודות B ל-B ל-X ו-Y (איור 2c1 דרך 2d4). למנוע דימום מן דקירות A ו-B על ידי חברת יישום של היצירה מד סטרילית.
5. כעת אתה יכול לבדוק כי האזור הוא הרדים ידי נוגעות קלות את העור תוך במעויין הרדים ידי קצה / פינת פיסת גזה כותנה, על ידי השוואה עם העור unanesthetized סמוכים.

ב ביצוע השאיפה כרית השומן (איור 3)

(תוכנות של הרדמה מקומית לפני ביצוע השאיפה כרית שומן ניתן לעקוף, בהתאם להעדפות אזוריים נפרדים. FNAB ההליך מבוצע כראוי השאיפה הקדמי כרית שומן ניתן להשלים דקירה אחת. עם זאת, בהתאם לסף הכאב של המטופל הפרט , תמרון של מחט 18G הלוך ושוב לרקמות שומן תת עורי הוא יחסית distresלשיר. השיטה המתוארת כאן הרדמה משיג את האפקט רק שתי דקירות מחט עם 25 גרם ו מסבה את הכאב עם עמידות משופרת הנוהל).

1. להרכיב מחט 18G ½ 1 ס"מ על מזרק 10 מ"ל. הר הרכבה מזרק מחט באחיזת את המזרק ("אחיזה FNAB / אקדח") עבור יישום נאות לשחרר ואקום.
2. הכנס את קצה המחט לתוך שומן תת עורי בתחום מעוין נקי וחומרי ההרדמה (איור 3a).
3. לסגת באופן מלא על הבוכנה של המזרק עם המחט הוכנס הרקמה התת עורית ליצור ואקום (איור 3 ב).
4. שמור על הוואקום ולתמרן את המחט קדימה ואחורה בכיוונים שונים של שומן תת עורי (איור 3c דרך 3i). שבץ כל אחד צריך להיות כמה שיותר זמן עם אורך של מחט שנבחר מבלי לאפשר המחט יוצא של העור. הדגימה המרבית מושגת על ידי שינוי כיוון עם כל חבטה (איור 3i). חשוב לשמור על הכיוון של המחט המשיקים serosa ובמקביל פני העור כדי למנוע ניקוב של חלל הצפק.
5. הרקמה fibroadipose מצטבר המזרק. מספיק פעם רקמות fibroadipose שברים (עד 1 מ"ל של דם עשיר הדגימה שברים מעורבים) מאוחזרות, לשחרר את הוואקום לחלוטין ולהסיר את המחט (איור 3k).
6. האם המטופל או עוזר להפעיל לחץ על המשרד בתחום ההליך עם בלוק גזה כדי למנוע extravasation של דם.

2. הדגימה עיבוד

1. המקום לפחות 5-6 שברי הרקמה fibroadipose בפתרון glutaraldehyde עבור במיקרוסקופ אלקטרונים (איור 4 ב).
2. בהתאם לפרוטוקול המוסדי, מריחות כמה קטעי רקמות fibroadipose עשוי להיות מוכן על ידי הפצתם בין שתי שקופיות (איור 4 א).
3. החומר הנותר מותר קריש בתוך המזרק (זו עשויה להימשך 5-7 דקות, תלוי בזמן הקרישה) (איור 4 ג').
4. לשאוב 10% בפורמלין בתוך המזרק כך שהחומר קרוש רקמות fibroadipose הוא סולק מן הקיר של המזרק ואת צף חופשי (איור 4C2). הסר את הבוכנה של המזרק (איור 4C3) ולהעביר את רקמת קרושה fibroadipose לתוך מיכל פורמלין 10% מסוף הפתוח של המזרק מול סוף זרבובית (איור 4C4).
5. לייבל המכולות כראוי ולהגיש את glutaraldehyde עבור במיקרוסקופ אלקטרונים ואת פורמלין עבור H & E סעיף וקונגו כתם אדום להערכת תחת מיקרוסקופ מקטב. אם מריחות מוכנים, הם יכולים להיות מעובד על פי הפרוטוקול של המעבדה בודדים.

באיור 1. שטח להיות בהרדמה עבור FNAB של כרית שומן הקדמי.

איור 2. הרדמה מקומית של האזור.

איור 3. ביצוע FNAB של כרית שומן הקדמי.

איור 4. עיבוד של כרית קדמית לשאוב שומן יש להגיש למעבדה לאיתור מרבצי העמילואיד.

3. נציג תוצאות

איור 5. עמילואיד בדופן של כלי דם קטנים שברי הרקמה fibroadipose. רקמות Fibroadipose היה פורמלין, מעובד, פרפין מוטבע, מוכתם קונגו אדום, נבדק על ידי מיקרוסקופ אור מקטב. עמילואיד בדופן של כלי דם קטנים מראה ירוק תפוח birefringence (חץ לבן).

איור 6. רקמות חסר עמילואידוזיס. Birefringence תפוחים ירוקים נעדר ברקמות של חולה אחר ללא עמילואידוזיס. כחול birefringence (חץ לבן) של סיבי קולגן, הם בדרך כלל נוכחים כמעט כל דגימות.

איור 7. סיבי עמילואיד בקנה אחד עם דפנות כלי הדם. מיקרוסקופ אלקטרונים של ישר, ללא הסתעפות, מפוזרים באופן אקראי, בקוטר 80-10 ננומטר סיבי עמילואיד נוצר על ידי דפנות כלי הדם.

Discussion

אבחון של עמילואידוזיס מושגת בדרך כלל עם רקמה ביופסיה של איברים מושפעים כמו הכליות, הכבד, ו / או הלב. גישה זו תשואה אבחון גבוהה, לעומת זאת, הוא פולשני עשוי להיות קשור לסיבוכים כולל דימום ^2. פי הטבעת, חניכיים, ביופסיות מח עצם הועדפו לאבחון כגישה יחסית פחות פולשנית ב -1960 ^6,7,8. כרית בטן השאיפה שומן דווחה בשנת 1973 כמו הליך בטוח, פולשנית פשוטה, ופחות יקר לאבחון רקמות של עמילואידוזיס מערכתית ^1. עם זאת, הפרטים של ההליך ואת הגישה לעיבוד של הדגימה לאחזר לא דיווחו באופן עקבי. זה וידאו המאמר מתאר את הליך צעד אחר צעד.

הגישה לגילוי עמילואיד השאיפה כרית שומן, באופן דומה, גם לא טופל היטב עם כמה מחקרים להשוות ולהעריך גישות שונות ^1,5,6,7,8. הערכת הקדמי aspirates כרית שומן עם כתמים אדומים קונגו הוא פחות רגיש עם reproducibility interobserver נמוך במיוחד במקרים הראשונים של עמילואידוזיס עם מרבצי העמילואיד דלים ^5. אימונוהיסטוכימיה מבוצעת על פורמלין פרפין, מוטבע לחסום תא סעיפים קבועים קונגו אדום הקרינה שבוצעו על מריחות ציטולוגיה דווחו לשפר את רגישות האבחון ^9,10. במיקרוסקופ אלקטרונים משפרת את איתור וזיהוי של סיבי עמילואיד דלים של קירות כלי הדם הקטנים בתוך רקמת שומן fibroadipose כרית aspirates ^{4, 5.} על סמך מידע זה, מאמר זה מתאר עיבוד של הדגימה להכין בלוקים תא (הערכה של קונגו אדום מוכתם לחסום חלקים התא מתחת למיקרוסקופ מקטב עבור birefringence אבחון תפוח ירוק וכן אימונוהיסטוכימיה כמצוין) וכן במיקרוסקופ אלקטרונים. עם זאת, בהתאם לגישה שנבחרה לצורך הערכה של הדגימה עבור עמילואיד, זה עשוי להיות נתון הכנה למרוח ציטולוגיה, לחסום הכנה התא עיבוד במיקרוסקופ אלקטרונים. במעבדות יש לבצע את הבדיקות על מריחות מוכן מחלקיהם רקמות aspirated fibroadipose ומוכתמת עם קונגו אדום ללמוד את ¹⁰ פלואורסצנטי.

בדרך כלל עמילואידוזיס מאוחר, מיקרוסקופ אור עם מיקרוסקופיה אדום קונגו מקטב עשוי להיות מספיק, עם זאת, בשלבים המוקדמים של המחלה מכתים אדום קונגו עם מקטב במיקרוסקופ על סעיפים לחסום התא פחות רגיש ואמין שומן כרית aspirates ^4,5,11 . כתמים מיוחדים נוספים כולל Thioflavin T ניתן להשתמש עם מגבלות דומות. גישות אחרות כדי לזהות עמילואיד לכלול הערכה של מריחות לשאוב עבור עמילואיד עם מיקרוסקופיה אדום קונגו הקיטוב ואת הקרינה ^10. מניסיוננו שיטה זו פחות לשחזור. הערכה של כלי הדם כרית שומן עמילואיד באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים מתגבר על המגבלות האלה ^4,11. אפיון נוסף של עמילואיד דווחה על ידי מיקרוסקופיה immunoelectron ^12, אולם שיטות אלו לא יהיו זמינים באופן נרחב בקביעת אי - טיפול שלישוני.

מחטים המשמשים לביצוע הליכים השאיפה עשוי להיות מסווג לפי גדלים מד שלהם מצוין (21, 25 גרם), בינוני (18, 20 גרם), גדול (לדוגמא-14G) ^11. Anterior השאיפות כרית שומן דווחו להתבצע באמצעות מודד משתנה החל הביניים (18 עד 20 גרם) קנס (21 עד 22g) ^2,10. רוב הנגעים המונית הם aspirated עם מד מחטים עדינה (כגון 25 גרם) כדי לקבל מריחות ציטולוגיה טוב יחד עם עובר נוסף עם מחט מד רחב יותר (כגון 18G) כדי לאחזר מדגם נוסף בלוקים התא.

במהלך השאיפה הקדמי כרית שומן, רקמת fibroadipose מלוכדת לא לשאוב היטב עם מחטים עדינה. לחסום תא הכנה במיקרוסקופ אלקטרונים חשובים להערכת קטן דפנות כלי הדם ברקמת שברי fibroadipose ב aspirates שומן. מחטים מד רחבים יותר (כגון 18G) מומלץ תשואה נאותה חומר אבחון ^2,10. כאשר ההליך הוא דומה FNAB המקובל, השאיפה כרית השומן נקרא FNAB למרות מחטים מד רחב עשוי לשמש לביצוע זה ^5.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alcohol swabs
gauze pads
marking pen
10 mL syringes x2
1% lidocaine			local anesthetic- If lidocaine is used alone, it causes an initial burning sensation after instillation. This can be prevented by using a 1:1 mixture of 1% lidocaine and 1% sodium-bi-carbonate
18 gauge(G) 1 ½ inch needles x2 (for performing FNAB)
25G 1 ½ inch needle			for injecting local anesthetic
FNA syringe holder ("gun")
bandage
vial of glutaraldehyde			for electron microscopy
biopsy container of 10% formalin