表演和加工为淀粉样蛋白前脂肪垫活检

Summary

脂肪垫的愿望是首选，微创，成本低的方法，其他方法相比，检测诊断系统性淀粉样变性淀粉样蛋白。此视频文章演示了脂肪垫抽吸标本为最佳的诊断结果进行适当的处​​理与执行程序的轮廓。

Abstract

从历史上看，心脏，肝脏，肾脏活检，证明在淀粉样变性淀粉样蛋白沉积。由于本病的临床表现是如此的变量和非特异性，这些活组织切片检查相关的风险是太伟大的诊断率。其他网站有一个较低的活检的风险，如皮肤或牙龈，也相对侵入性和昂贵。此外，这些活组织切片检查可能并不总是有足够的淀粉样蛋白沉积，以建立一个诊断。脂肪垫的愿望表现出良好的临床相关性低的成本和最小的发病率。但是，有没有执行此过程或处理吸气标本，从而导致变量和nonreproducible结果的标准化协议。检测组织中淀粉样蛋白的最频繁使用的方​​式是对刚果红染色切片使用偏光显微镜的苹果绿色的双折射。这种技术需要细胞块吸气材料的制备。不幸的是，呈现在淀粉样变性的早期阶段的病人有极少量的淀粉样蛋白，从而大大降低了对刚果红染色细胞块切片的脂肪垫抽吸的敏感性。因此，应利用脂肪垫抽吸，通过电子显微镜超微结构评价，由于其增加了对淀粉样蛋白检测的灵敏度。本文演示了一个简单和可重复性的程序执行前脂肪垫抽吸利用细胞块切片和电子显微镜超微结构鉴定两个刚果红染色淀粉样蛋白的检测。

Protocol

简介

系统性淀粉样变性是一种高度可变的疾病，是指外，统称为淀粉样蛋白的各种蛋白质沉积。与β褶配置这些淀粉样纤维的沉积，导致各种临床表现取决于所涉及的器官。系统性淀粉样变性的临床相关的表现是有重要器官如心脏，肝脏，和/或肾的参与时指出。从历史上看，这些涉及机关将活检表现出的淀粉样蛋白的存在。这些温和的侵入性程序进行重大风险，包括出血。脂肪垫抽吸以来向人们展示了一个可靠，无创方法检测系统性淀粉样变性淀粉样蛋白在^1。这个过程基本上与检索fibroadipose组织评估缺乏在小血管壁²淀粉样蛋白沉积在局部麻醉下于前腹壁皮下脂肪的吸脂。

淀粉样蛋白在组织鉴定的，最经常使用的方法仍然看到时，刚果红^染色切片在偏振光显微镜3下可视化特征的苹果绿色双折射模式。当脂肪垫的愿望是，刚果红渍，可以做到无论是直接涂幻灯片或吸气脂肪组织的细胞块准备。然而，在早期阶段的淀粉样变性的患者有很少的淀粉样蛋白沉积，这大大降低了刚果红染色的^细胞块切片4,5灵敏度。通过电子显微镜的脂肪垫抽吸的超微结构评价具有更好的可重复性，并提高了^灵敏度 4 。因此，建议向所有为一个单元块的编制和执行电子^显微镜 2脂肪垫抽吸。

脂肪垫的愿望是一个相对较低的成本和获得组织诊断系统性淀粉样变性的非侵入性的方法。本文介绍了脂肪垫抽吸过程，来样加工的细节，提交两个刚果红染色和电子显微镜超微结构评价标本。在这段视频中，我们展示了这种重复性好，简单的程序，以获取最佳的诊断材料。

1。执行前脂肪垫活检

A.麻醉，局部地区（图1和2）

1. 用酒精棉签或一个特定的机构首选的皮肤清洁剂，清洁皮肤，腹部下腹外侧向中线，脐下（图1）。
2. 标记一个约2 × 2英寸的菱形形状的区域，如图1所示，标记笔。
3. 18G针吸约10毫升1％的利多卡因。将一个25G的1.5寸毫针注射器。移除窃听直立的注射器，同时按下活塞，直到液体配药，无气泡存在任何残留空气。
4. 麻醉沿线已标记的菱形区域，如图2所示的边界。开始，刚下在A点皮肤插入25G针，小心地推针，皮下点十，拉注射器推杆，以确保您不在范围内的船只。然后慢慢推柱塞，同时撤回针点，而不让皮肤针点（图2A3）一个渗透到利多卡因2.5毫升（约利多卡因¼ 10 mL注射器）。用针在皮肤下的改变对点的Y（图2A4）方向，推动皮下针点Y（图2B1）。一如以往，确认针是不是在船只和免除约2.5毫升利多卡因，一边慢慢退出通过点针一个（图2B4 2B3）。重复类似的步骤，从B点出发，从B点和配药利多卡因皮下X与B到Y（图2C1 2D4）。防止从扎伤出血和乙公司应用无菌衡量一块。
5. 您现在可以检查该地区是麻醉轻轻抚摸皮肤内麻醉菱形针尖/棉一块纱布一角，与相邻unanesthetized的皮肤比较。

B.执行脂肪垫抽吸术（图3）

（应用局部麻醉前脂肪垫吸性能可能被绕过，根据区域和个人喜好。正确执行前脂肪垫抽吸FNAB程序可以在一个刺完成。然而，根据个别病人的痛阈，来回操纵18G针头在皮下脂肪组织相对distres唱。麻醉方法的描述，这里只有两个25G针头刺破达到的效果，并避免出现改善程序的耐受性疼痛。）

1. 到10毫升注射器组装18G 1.5寸毫针。装在注射器中的抓地力适当的应用程序和真空释放（“FNAB握/枪”）的注射器针头大会。
2. 针尖插入皮下脂肪内的清洗和麻醉的菱形面积（图3a）。
3. 完全缩回的注射器针头插入皮下组织产生真空（图3b）柱塞。
4. 保持真空和皮下脂肪（图3C通过3I）游刃于各个方向来回针。每个冲程应尽可能长时间而不让皮肤针来选择针的长度。最大采样是通过改变每一笔划的方向（图3I）。重要的是要保持切向浆膜和皮肤表面平行，以避免腹腔穿刺针的方向。
5. fibroadipose组织聚集在注射器中。一旦足够fibroadipose组织碎片（碎片丰富的血液混合标本高达1毫升）进行检索，完全释放的真空，取出针（图3K）。
6. 有病人或助理申请程序方面的纱布垫，以防止血液外渗公司的压力。

2。标本的处理

1. 放置在电子显微镜（图4B）戊二醛溶液至少5-6 fibroadipose组织碎片。
2. 根据机构的协议，fibroadipose组织碎片数涂片可能准备通过两个幻灯片之间（图4A）蔓延。
3. 剩余材料被允许血块在注射器（这可能需要5-7分钟，凝血时间而定）（图4C）。
4. 吸10％的福尔马林从墙上的注射器和自由浮动（图4C2）脱落，使凝结fibroadipose组织材料注射器。取下注射器的柱塞（图4C3）和凝结fibroadipose组织转移到10％福尔马林的容器开口端从注射器喷嘴端（图4C4）对面。
5. 适当标记的容器，并提交电​​子显微镜和H＆E节和刚果红染色偏光显微镜下的评价福尔马林戊二醛。如果涂片准备，他们可能会根据个别实验室的协议处理。

图1。面积为麻醉前脂肪垫FNAB。

图2。麻醉的局部地区。

图3。执行前脂肪垫FNAB。

图4。加工前脂肪垫吸提交实验室检测淀粉样蛋白沉积。

3。代表性的成果

图5。淀粉样蛋白在小血管壁fibroadipose组织碎片。Fibroadipose组织嵌入福尔马林处理，石蜡，用刚果红染色，并通过偏光光学显微镜检查。淀粉样蛋白在小血管壁显示苹果绿双折射（白色箭头）。

图6。缺乏组织淀粉样变性。苹果绿双折射缺席在不同的病人组织无淀粉样变性。蓝双折射的胶原纤维（白色箭头），通常存在于几乎所有的标本。

图7。纤维与淀粉样蛋白在血管壁的是一致的。直，无分支的电子显微镜，随机分散的直径为8-10纳米的纤维，由淀粉样蛋白在血管壁的形成。

Discussion

淀粉样变性的诊断通常是实现与受影响的器官，如肾脏，肝脏和/或心脏组织活检。然而，这种方法具有较高的诊断率，是侵入性和可能相关的并发症包括出血^2。直肠，牙龈和骨髓活检诊断的首选方法在20世纪60年代^6,7,8相对较少侵入。腹部脂肪垫抽吸据报道在1973年作为一种安全，微创，简单，更便宜的组织学诊断为系统性淀粉样^变性 1程序。然而，检索到的标本处理的程序和方法的细节是不连贯报道。这视频和文章，描述过程中的步骤一步。

检测淀粉样蛋白在脂肪垫抽吸的方法，同样，也没有得到很好的一些研究比较和评估各种^方法 1,5,6,7,8标准化。与刚果红染色前脂肪垫抽吸的评价是与观察者间的重复性较低，尤其是在淀粉样变性早期病例与缺乏淀粉样^蛋白沉积5敏感。福尔马林固定石蜡包埋细胞块切片进行免疫组织化学和刚果红色荧光细胞学涂片进行报道，以提高诊断^的灵敏度9,10。电子显微镜提高了脂肪垫^抽吸4，5 fibroadipose组织小血管壁缺乏淀粉样纤维的检测和鉴定。根据这一信息，本文介绍了标本制备细胞块（刚果红染色细胞块切片在偏光显微镜诊断苹果绿色双折射下的评价，也表明免疫组化作为）和电子显微镜的处理。但是，根据淀粉样标本的评价选择的方法，它可能会受到细胞学涂片制备，细胞块的准备，处理和电子显微镜。有些实验室执行从吸气fibroadipose组织碎片，并准备与刚果红染色研究^荧光 10涂片测试。

一般在后期的淀粉样变性，与刚果红偏光显微镜的光学显微镜，可能就足够了，但是，在疾病的刚果红染色与偏光显微镜对细胞块切片早期阶段是那么敏感和可靠的^脂肪垫抽吸4,5,11 。 Thioflavin T等其他特殊污渍可使用类似的限制。其他的方法来检测淀粉样蛋白，包括与刚果红偏光显微镜和^荧光 10淀粉样蛋白的吸涂片的评价。这种方法在我们的经验是少重现。通过电子显微镜淀粉样蛋白脂肪垫血管的评价克服了这些^限制 4,11 。淀粉样蛋白的进一步鉴定已通过免疫电^镜 12;然而，这些方法可能不会在非三级护理设置广泛。

用于执行共同愿望程序的针头可划分成细计的大小（21 - 25G），中间（18 - 20G），大（如^14G）11 。前脂肪垫的愿望已报告使用变量仪表，从中间（18至20G）不等的罚款 ​​（21到^22G）2,10执行。肿块大多是与更精细的表针（如25G）吸气，以取得良好的细胞学涂片检查，以及与更广泛的针头（如18G）来获取额外的样品细胞块的额外的通行证。

前脂肪垫抽吸期间，凝聚力的fibroadipose组织不吸以及更细的针头。细胞块的制备及电子显微镜是重要的评价小血在血管壁上的脂肪抽吸fibroadipose组织碎片。更宽的表针（ ​​如18G）推荐产生诊断提供充足的^物质 2,10 。由于程序是可比常规FNAB的，被称为脂肪垫抽吸作为FNAB，尽管更广泛的^表针 ，可用于执行5。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alcohol swabs
gauze pads
marking pen
10 mL syringes x2
1% lidocaine			local anesthetic- If lidocaine is used alone, it causes an initial burning sensation after instillation. This can be prevented by using a 1:1 mixture of 1% lidocaine and 1% sodium-bi-carbonate
18 gauge(G) 1 ½ inch needles x2 (for performing FNAB)
25G 1 ½ inch needle			for injecting local anesthetic
FNA syringe holder ("gun")
bandage
vial of glutaraldehyde			for electron microscopy
biopsy container of 10% formalin