Мы демонстрируем протокол для получения химерных эмбрионов данио для живого изображения сотовой поведение во время эмбриогенеза.
Abstract
Клетки изменения широко в местах их расположения и имущества во время эмбриогенеза. Эти изменения регулируется взаимодействие между клетками и окружающей их среды. Химерные эмбрионы, которые состоят из клеток разных генетический фон, большие средства для изучения межклеточных взаимодействий посредничестве генов, представляющих интерес. Эмбриональных прозрачности данио на ранних стадиях развития позволяет прямой визуализации морфогенез тканей и органов на клеточном уровне. Здесь мы демонстрируем протокол для получения химерных сетчатку и мозг в данио эмбрионов и выступать с концертами изображений донорских клеток. Протокол охватывает подготовку трансплантации иглы, трансплантации GFP-экспрессирующих доноров бластомеров на GFP-отрицательный Саваоф, и изучение клетки-донора поведения в живых конфокальной микроскопии. С небольшими изменениями, этот протокол также может быть использован для изучения эмбрионального развития других тканей и органов в данио. Преимущества использования GFP в клетки донора этикетке также обсуждаются.
Protocol
День 1. Подготовка 1. Настройка рыбы кресты Настройка попарно кресты данио в вечернее время. Для предотвращения случайного скрещивания до нужного времени, используйте циркуль, чтобы отдельные женские и мужские рыбы в брачный кассет. GFP-экспрессирующих транс?…
Discussion
В этом видео мы продемонстрируем метод трансплантации бластомеров проанализировать сетчатки и развитие мозга в данио. Этот протокол также может быть использована для анализа развития других тканей и органов просто выпуская доноров бластомеров в соответствующих местах в принимающей…
Acknowledgements
Это исследование было поддержано Национальным институтом здоровья (NIH) Core Грант (5P30EY008098) и следующие средства для XW: NIH Грант R01EY016099 и исследований в области профилактики слепоты развития карьеры Award. Мы благодарим Кира Латроп за помощь в конфокальной микроскопии.
Zou, J., Wei, X. Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (41), e1924, doi:10.3791/1924 (2010).